伴隨著家禽養(yǎng)殖行業(yè)呈規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化、商業(yè)化的、密度高的發(fā)展趨勢，禽畜病蟲害展現(xiàn)高頻率化、復(fù)雜發(fā)展趨勢，為減少病發(fā)與身亡產(chǎn)生的財產(chǎn)損失，飼料被普遍用來防止和醫(yī)治禽畜病癥，或者以亞醫(yī)治使用量加上于精飼料中以推動小動物生長發(fā)育、改進小動物產(chǎn)品質(zhì)量和提升精飼料使用率。但一部分禽畜養(yǎng)殖廠工作人員缺少對藥品傷害的認識及科學(xué)研究服藥的具體指導(dǎo)，或受資金權(quán)益迫使，不安全用藥，乃至不法亂用各種飼料，且不嚴格執(zhí)行休藥期，造成 禽畜商品中飼料殘余超標(biāo)準(zhǔn)狀況經(jīng)常發(fā)生。不管飼料殘余水準(zhǔn)多少，根據(jù)長時間的食物網(wǎng)蓄集到一定量之后對身體造成副作用，如過敏癥狀，泌尿生殖系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、心肌損害等，一些藥品還具備不確定性的致畸性、致癌物質(zhì)，或致心搏驟停乃至身亡。除此之外，病菌在長時間接觸到這種較低濃度的藥品后，非常容易提升病毒感染的抗藥性及基因變異的概率，進而變?nèi)跞藗兗膊〉闹委煂嶋H效果，使公共衛(wèi)生服務(wù)遭遇嚴重的考驗和威協(xié)。飼料殘余還會繼續(xù)使禽畜出口產(chǎn)品遇阻，危害禽畜業(yè)的身體健康連續(xù)快速發(fā)展和國家的社會經(jīng)濟的發(fā)展。因而，進行飼料殘余的檢驗科學(xué)研究，標(biāo)準(zhǔn)服藥，以具體指導(dǎo)生產(chǎn)制造，確保食品衛(wèi)生安全，提升人民健康水準(zhǔn)，提高禽畜設(shè)備的競爭能力。

現(xiàn)階段，飼料殘余的檢查辦法有酶聯(lián)免疫法、微生物法、電解法、氣相色譜分析、高效液相色譜色譜法及高效率液相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)等。在其中，微生物法和酶聯(lián)免疫法的檢驗結(jié)果很容易發(fā)生陽性；高效液相色譜色譜法和氣相色譜分析的敏感度低、可選擇性差，且多聚集于單一類型飼料的剖析，進行一個試品中有類藥測量需采取不一樣的方式 ，前處理方式用時、繁雜，檢驗低效能高價位；超高效率液相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜法具備高通量測序、高可選擇性、高分離度、高靈敏、高檢驗效果等優(yōu)點，是飼料多殘余檢驗的優(yōu)選方式 。生雞蛋、雞脯肉試品栽培基質(zhì)繁雜且飼料大多數(shù)為少量乃至痕量元素殘余，而我國需求的殘余限定較低，給檢查工作中產(chǎn)生極大挑戰(zhàn)。盡管飼料多殘余檢驗已經(jīng)有較多參考文獻報導(dǎo)，但末見與此同時測量生雞蛋和雞脯肉中磺胺類、氟喹諾酮、氯霉素類、金剛烷胺類飼料殘余的報導(dǎo)。

本科學(xué)研究擬創(chuàng)建超高效率液相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜法一起測量生雞蛋和雞脯肉中磺胺類、氟喹諾酮、氯霉素類和金剛烷胺類飼料殘余，期待為禽類產(chǎn)品中飼料殘余的檢查給予合理方式。

1試驗一部分

1.1儀器設(shè)備與設(shè)備

1290超高效率液相色譜、ZORBAXC18色譜柱(50mm×2.1mm×1.8μm)：英國Agilent企業(yè)商品；QTRAP5500三重四極桿/線形正離子阱質(zhì)譜儀器：英國ABSciex企業(yè)商品；渦旋振蕩器：英國ThermoScientific公司商品；JD200-2電子分析天平：沈陽市企密安電子器件有限責(zé)任公司商品；TGL-15B型快速臺式離心機：上海安亭科學(xué)研究儀器廠商品；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：法國海道爾夫企業(yè)商品。

1.2試品與實驗試劑

磺胺二甲異噁唑、磺胺嘧啶、磺胺羥基異噁唑、磺胺噻唑、磺胺羥基嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹噁林、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噻二唑、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、環(huán)丙沙星、達氟沙星、氟羅沙星、培氟沙星、洛美沙星、氧氟沙星、金剛烷胺、金剛乙胺、金剛烷胺-D15(10mg/L)，恩諾沙星-D5、環(huán)丙沙星-D5、環(huán)丙沙星-D8、磺胺鄰二甲氧嘧啶-D3、磺胺間二甲氧嘧啶-D6、氯霉素-D5水溶液國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(5mg/L)，氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素水溶液國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(100mg/L)：均購于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)業(yè)產(chǎn)品產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所；工業(yè)甲醇、乙腈：色譜純，法國Merck企業(yè)商品；苯甲酸：色譜純，英國Sigma企業(yè)商品；無水硫酸鈉、乙酸銨、氧化鈉、正己烷、環(huán)己烷、硫酸(優(yōu)級純)、氫氧化鈉(分析純，成分25%～28%)、磷酸氫二鉀(分析純)：上海市國藥控股商品；PSA、C18填充料(50μm)：我國迪馬科技有限公司商品；二甲亞砜：分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)藥品高新科技有限責(zé)任公司商品；試驗自來水：自做超純水系統(tǒng)。

1.3水溶液配置

用工業(yè)甲醇稀釋液各飼料水溶液國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：金剛烷胺、金剛乙胺、氯霉素配置成0.1mg/L，氟喹諾酮、磺胺類、甲砜霉素、氟甲砜霉素配置成1.0mg/L，7種內(nèi)標(biāo)均配置為0.5mg/L儲備液，于4℃下遮光儲存。系列產(chǎn)品標(biāo)液用工業(yè)甲醇配置，在用現(xiàn)配。

0.2mol/L硫酸溶液的配制：取1.5mL硫酸(36%～38%)，用超純水系統(tǒng)滴定劑至100mL。

1.4試品前解決

1.4.1試品獲取

稱量5.00g(精準(zhǔn)至0.01g)勻質(zhì)試件于50mL塑膠離心管架中，添加30μL0.5mg/L內(nèi)標(biāo)水溶液、5.0mL鹽酸溶液，渦流至試品分散化后，加15.0mL乙腈和7～9g氧化鈉至溶劑呈過飽和，渦流獲取5～7min，以5000r/min離心式5min，取下乙腈層至50mL離心管架中，向沉渣里加15.0mL乙腈反復(fù)獲取1次，合拼2次萃取液，待凈化處理。

1.4.2試品凈化處理

向以上待凈化處理萃取液中添加8～10mL正己烷-環(huán)己烷混和水溶液(1∶1，V/V)，渦流1min，以5000r/min離心式5min，取乙腈層濃縮至干，添加2.0mL0.2%苯甲酸-乙酸丁酯水溶液融解殘余物，過0.22μm濾紙后再將滲瀝液蒸干，添加1.0mL0.2%苯甲酸-甲醇溶液復(fù)溶，待凈化處理。

將30mgC18和60mgPSA吸咐原材料攪拌，添加下方墊有過濾紙的2.0mL塑膠醫(yī)療注射針中，再添加2.0mL0.2%苯甲酸-甲醇溶液滲濾，去除滲濾液，將以上1.0mL待凈化處理水溶液遷移至凈化處理柱，使其在作用力的作用下排出，接受凈化處理液，過0.22μm濾紙，待UHPLC-MS/MS測量。

1.5試驗標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1色譜儀標(biāo)準(zhǔn)

流動性相：A為0.1%苯甲酸-溶液(含0.1mmol/L乙酸銨)，B為0.2%苯甲酸-甲醇溶液；流動速度0.2mL/min；柱溫35℃；進樣量2.0μL；梯度方向過柱程序流程：0.00～3.00min(10%～40%B)，3.00～6.00min(40%～95%B)，6.00～8.00min(95%B)，8.00～8.20min(95%～10%B)，8.20～10.00min(10%B)。

1.5.2質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)

ESI離子源；離子源溫度550℃；噴霧器氣(GS1)工作壓力0.379MPa；輔助加溫氣(GS2)工作壓力0.379MPa；氣簾氣工作壓力0.241MPa；正、空氣負離子方式與此同時掃描儀，在其中氯霉素類藥為空氣負離子方式掃描儀，噴霧器工作電壓-4500V，多反映檢測方式(MRM)；磺胺類、氟喹諾酮、金剛烷胺類為共價鍵方式掃描儀，噴霧器工作電壓5500V，多反映檢測方式，別的質(zhì)譜分析主要參數(shù)列于表1。