1.3. 4揮發(fā)物口味成分的檢驗

1) 香味化學(xué)物質(zhì)獲取

依據(jù)頂空進樣器固相微萃取原理(HS-SPME)改善的方式 [31]獲取揮發(fā)物口味化學(xué)物質(zhì)，并且用GC/MS開展剖析。將10mL“美樂”紅酒試品和3.6gNaCl放進15mL提純瓶中，再添加20uL20mg/L的3-辛醇標液。提純瓶用里襯密封性，試品在45℃下均衡20min，微提純在45℃、500r/min的混合下不斷60min。提純完畢將提純頭插進氣相口解析5min。

2) 色譜儀標準

用Agilent7890B氣相色譜與5977A質(zhì)譜儀器開展GC-MS剖析。離子交換柱型號規(guī)格HP-Innowaxcolumn柱(60m×2.5mm×0.25μm)，載氣是總流量為1mL/min的氮氣，氣相口溫度230℃。柱溫選用程序升溫：原始溫度50℃保存5min，以3％/min升到125℃保存3min，隨后以2℃/min升到180℃保存3min，最終以15℃/min升到230℃保存15min。

質(zhì)譜儀器在電子器件負電子源(EI)的水解方式下運作，應(yīng)用問隔為0.2S的全掃捕方式(掃捕范疇m/z40～450)，離子源溫度200℃。

判定和定性分析：根據(jù)將各成分峰中的物質(zhì)與NISTl4.L譜庫的規(guī)范化學(xué)物質(zhì)開展配對，并將獲得的質(zhì)譜分析和保存指數(shù)值(RI)與NISTl4.L譜庫巾的規(guī)范化學(xué)物質(zhì)開展較為。用內(nèi)標法測算各成分的相應(yīng)成分，結(jié)果表明為3個反復(fù)的“美樂”紅酒試品的均值±標準偏差。

2 結(jié)果剖析

2.1 殼聚糖媒介化學(xué)交聯(lián)標準的提升結(jié)果

2.1.1 偶聯(lián)劑摩爾分數(shù)對媒介制作的危害

殼聚糖脂質(zhì)體媒介懸架醛基的總數(shù)與其說固定化工作能力的高低相關(guān)。不一樣摩爾分數(shù)的戊二醛對殼聚糖脂質(zhì)體媒介上懸架醛基質(zhì)量濃度的危害見圖2。

由圖得知，在一定區(qū)域內(nèi)，伴隨著戊二醛水溶液摩爾分數(shù)的提升，媒介上的懸架醛基質(zhì)量濃度呈持續(xù)上升發(fā)展趨勢，可是當戊二醛水溶液摩爾分數(shù)做到5％時，媒介上懸架醛基質(zhì)量濃度達2.4％，以后隨戊二醛摩爾分數(shù)提升，媒介上懸架醛基反倒趨于平穩(wěn)。應(yīng)用不一樣加酶量，測得數(shù)據(jù)信息與此一致。結(jié)果表明，摩爾分數(shù)5％的戊二醛水溶液早已能夠 保證非常多數(shù)目的醛基與殼聚糖媒介上的羥基產(chǎn)生化學(xué)交聯(lián)反映，這時媒介對酶的固定量做到較大 。因而媒介制取時采用摩爾分數(shù)為5％的戊二醛水溶液作偶聯(lián)劑就可以。

2.1.2 化學(xué)交聯(lián)時間對媒介制作的危害

如圖所示3所顯示，在2～8h區(qū)域內(nèi)，媒介上的懸架醛基隨化學(xué)交聯(lián)時間的提高而提升；當化學(xué)交聯(lián)時問做到8h后，懸架醛基的質(zhì)量濃度基本上維持不會改變。表明8h的化學(xué)交聯(lián)時間足夠使戊二醛水溶液中的醛基與媒介上的羥基充足反映，使媒介對酶的固定量較大 。因而，挑選8h做為殼聚糖脂質(zhì)體媒介和戊二醛水溶液的化學(xué)交聯(lián)時間。

2.2 固定化酶EC溶解酶的酶學(xué)特性

2.2.1 固定化酶EC溶解酶的最好反映溫度以及可靠性如

如圖4所顯示，根據(jù)分散酶和同定化酶在30、36、42、48、54、60、66℃和72℃標準下的酶活結(jié)果得知，他們的適宜溫度各自為30℃和42℃。同定化酶在30～42℃酶促反應(yīng)慢慢提高，適宜溫度比分散酶略高；在42℃之后溶解EC工作能力逐步減少，與酶活呈下降趨勢的分散酶轉(zhuǎn)變基本一致；但固定化的酶活在42～72℃均高過分散酶。

發(fā)生適宜溫度遷移可能是南于EC溶解酶的空間構(gòu)造遭受同定化媒介的干擾而略微更改，尤其是在42℃之后，固定化酶EC溶解酶的空間布局比較平穩(wěn)，催化反應(yīng)底物工作能力比分散酶略高。也是有別的科學(xué)研究結(jié)果顯示固定化酶脲酶與分散酶的適宜催化反應(yīng)溫度有一定的差別，但二者的催化劑實際效果并沒有明顯差別。

可靠性數(shù)據(jù)顯示，同定化EC溶解酶在42℃標準下儲放24h后相對性酶活仍能做到60％之上，表明固定化酶EC溶解酶可以承受一定區(qū)域的溫度，對自然環(huán)境的適應(yīng)能力不錯，在常溫自然環(huán)境下不用超低溫維護，是一種綠色環(huán)保型固定化。

2.2.2 固定化酶EC溶解酶的適宜pH以及可靠性

從圖5能夠 看得出，在pH為3.0、3.3、3.6、3.9、4.2、4.5和4.8的標準下，分散酶和固定化催化反應(yīng)底物EC的適宜pH有一定的偏移，分散EC溶解酶對pH4.5的EC水溶液具備較大的催化劑的活性，且在pH3.0～4.5酶促反應(yīng)慢慢提升，相對性酶活在30％～100％之問；同定化EC溶解酶的適宜pH為3.6～3.9，且在這里區(qū)域內(nèi)酶促反應(yīng)均高過分散酶，特別是在在pH3.6上下主要表現(xiàn)出較大 催化劑的活性。

可靠性數(shù)據(jù)顯示，固定化在適宜pH標準下反應(yīng)速度越長，相對性酶促反應(yīng)的降低速率越快，特別是在是12～24h期問的相對性酶活彈性系數(shù)遠遠地高過0～12h的彈性系數(shù)。同定化酶在pH3.6標準下置放24h以后的酶活損率不超過40％，表明固定化酶EC溶解酶的耐堿性較分散酶好，更適合繁雜條件的實際操作。以前就會有科學(xué)研究將以京尼平為偶聯(lián)劑與來自普羅維登斯菌(ProvidenciarettgeriJN-B815)的酸堿性脲酶開展化學(xué)交聯(lián)，發(fā)覺此化學(xué)交聯(lián)酶可以融入米酒的繁雜微自然環(huán)境并除去尿素溶液和EC。
 

申明：文中常用照片、文本來源于《食品與生物技術(shù)》，著作權(quán)歸原作全部。