2結(jié)果與剖析

2.1胞壁肽HPLC剖析

肽聚糖是由N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）、N-乙酰胞壁酸（MurNAc）及肽模塊構(gòu)成的聚合體，肽鏈碳水化合物的構(gòu)成主要是Ala、Glu、DAP，也有少量的Gly，大部分G-及產(chǎn)孢菌具備meso-DAP殘基。對枯草枯草芽孢菌植物細胞的肽聚糖選用變?nèi)芫孛附猓渚势谓?jīng)硼氫化鈉復(fù)原后，選用HPLC開展胞壁肽的分離出來，獲得胞壁肽譜圖（圖1）。從圖上能夠看得出，枯草枯草芽孢菌的胞壁肽關(guān)鍵帶有15個胞壁肽成分，關(guān)鍵的峰八個。肽聚糖歷經(jīng)變?nèi)芫孛附夂?，產(chǎn)生以GlcNAc-MurNAc-L-Ala-D-Glu-mesoDAP為基本上結(jié)構(gòu)單元的二聚體、三聚體、四聚體等。這種胞壁肽成分分子質(zhì)量越大，保存期越長，因而，單個總體目標峰出峰時間較早。Atrih等對枯草枯草芽孢菌的胞壁肽開展剖析，獲得3八個成分，在20min保存期內(nèi)的前4個成分均為胞壁肽單個，某些成分官能團發(fā)生氟苯化而保存期不一樣。此結(jié)果也與文獻資料報導(dǎo)相一致。
 

2.2胞壁肽ESl-MS剖析

對每一個成分單峰搜集，除鹽后開展ESI-MS剖析，根據(jù)對3號峰的MS剖析（圖2），其分子離子[M] 為m/z869，伴峰：[M H] 為m/z870，該分子質(zhì)量構(gòu)成與GlcNAc-MurNAc-L-Ala-D-Glu-mesoDAP（標準偏差：869.9）一致，伴峰的產(chǎn)生是由于在共價鍵方式下，目地精彩片段會在水解全過程里加一個氫，分子質(zhì)量提升。因而，峰3即是總體目標物二糖三肽（GM-ＴriDAP），其結(jié)構(gòu)示意圖如圖2所顯示。

2.3胞壁肽FTlR

對胞壁肽3號峰單峰搜集，低溫干燥后開展傅里葉變換紅外線定量分析，紅外光譜圖見圖3所顯示，從圖上能夠看得出，在兩個地區(qū)存有強消化吸收，一個是～3447cm^-1，另一個是～1020cm^-1。肽鏈的好多個特點帶包含氟苯A帶（～3500cm^-1）、氟苯Ⅰ帶（1600～1700cm^-1）和氟苯Ⅱ帶（1510～1580cm^-1）。氟苯A帶主要是N-H伸縮式震動，對共價鍵十分比較敏感；氟苯Ⅰ帶是肽鏈的首要特點帶，主要是C=O和C-N的升縮震動；而氟苯Ⅱ帶主要是N-H平行面變角震動，及其C-N和C-C的升縮震動。糖環(huán)的特點峰集中化在800cm^-1～1200cm^-1中間，包含C-OH的升縮震動和糖苷鍵C-O-C的震動累加消化吸收數(shù)據(jù)信號。峰3的紅外光譜分析的消化吸收峰分類見表1所顯示，從表格中還可以看得出，胞壁肽3號峰包含糖肽的典型性官能團震動特點，一個是肽鏈的氟苯消化吸收帶，包含3447cm^-1的氟苯A帶、1647cm^-1的氟苯Ⅰ帶；另一個是在1200～800cm^-1，1020cm^-1是糖環(huán)及其糖苷鍵的特點消化吸收峰。因而，胞壁肽3號峰具備典型性的糖肽結(jié)構(gòu)類型。
 

2.41HNMR

氫譜是全部磁共振譜中敏感度較高的，能夠為化學(xué)物質(zhì)給予充足的構(gòu)造信息內(nèi)容。對胞壁肽3號峰的結(jié)構(gòu)特征開展氫譜分析，檢測其能否與GlcNAcMurNAc-L-Ala-D-Glu-mesoDAP構(gòu)造相符合。氫譜中各官能團異構(gòu)的有機化學(xué)特點具體表現(xiàn)在化學(xué)位移上，氫原子核外電子云相對密度越大，化學(xué)位移越小，出峰部位越挨近右側(cè)。1HNMR譜見圖4所顯示，從圖上還可以見到經(jīng)典的胞壁肽數(shù)據(jù)信號方式，糖肽官能團異構(gòu)自身的特性、官能團等都是對有機物的化學(xué)位移造成危害，進而更改官能團異構(gòu)出峰部位，糖環(huán)和肽鏈主要表現(xiàn)不一樣的化學(xué)位移。在先人對于肽聚糖精彩片段核磁共振剖析的根基上，對胞壁肽3號峰氫譜的化學(xué)位移開展所屬，GlcNAc、MurNAc和肽鏈羥基殘基的常見數(shù)據(jù)信號處于4.7×10^-6～3.3×10^-6中間，4.67是GlcNAc異頭氧原子上的質(zhì)子共震數(shù)據(jù)信號；針對羥基和環(huán)烴的甲基質(zhì)子化學(xué)位移處于2.5×10^-6～1.1×10^-6中間。綜合性以上剖析，胞壁肽峰3的1HNMR與總體目標糖肽構(gòu)造相符合。

2.5胞壁肽對芽胞出芽的危害

芽胞出芽后熱抵抗性消退，寒濕解決（80℃，20min）不可以立即消滅芽胞，但可將出芽的芽胞消滅。因而，熱抵抗性消退常常用于表現(xiàn)芽胞是不是經(jīng)歷了出芽。為認證文中中獲得的胞壁肽是不是具備出芽實際效果，將制作的胞壁肽添加到枯草枯草芽孢菌168芽胞液中混和勻稱（胞壁肽終濃度值為1mg/mL），37℃震蕩孵育1h。接著，將胞壁肽解決后的芽胞開展寒濕解決（80℃，20min），運用平板電腦計數(shù)法測算寒濕解決前后左右芽胞總數(shù)的轉(zhuǎn)變即是出芽芽胞的總數(shù)。胞壁肽對枯草枯草芽孢菌168芽胞出芽的危害如圖所示5所顯示。未添加胞壁肽的解決組里，芽胞數(shù)經(jīng)寒濕加工處理后并沒有降低，表明芽胞仍維持原來的熱抵抗性，并沒有產(chǎn)生出芽全過程。而添加胞壁肽后的芽胞經(jīng)寒濕加工處理后總數(shù)降低了0.9個多數(shù)，表明0.9個多數(shù)的芽胞在胞壁肽解決后熱抵抗性消退，發(fā)生了出芽，與先人分析結(jié)果相一致。由此可見，本實驗中制取的胞壁肽（二糖三肽）能誘發(fā)芽胞出芽，為事后進一步科學(xué)研究胞壁肽誘發(fā)芽胞出芽原理打下基礎(chǔ)。
 

3結(jié)果

運用枯草枯草芽孢菌為目標，制取、分離純化病菌營養(yǎng)體植物細胞上的胞壁肽，獲得的胞壁肽最小單位為二糖三肽，此胞壁肽能夠 有效的推動芽胞出芽，為芽胞出芽的進一步科學(xué)研究打下基礎(chǔ)。

申明：文中常用照片、文本來源于《中國食品學(xué)報》，著作權(quán)歸原作全部。