目地運用超高效率液相色譜儀串連四級桿路軌阱質譜分析(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技術檢查鑒定補陽還五湯以及在人血液和小便中藥品成分。方式收集補陽還五湯以及臨床醫(yī)學病人內服給藥后的血細胞和小便樣版，樣版經80%工業(yè)甲醇污水處理后，選用Hyperil Gold C18色譜柱(1.0 mm×50 mm，1.9μm)，流動性相為水(A)-乙腈(B)(各含0.1%苯甲酸和5 mmol·L?1醋酸銨)開展梯度方向過柱，流動速度0.3 mL·min?1，柱溫40℃。根據(jù)數(shù)據(jù)分析補陽還五湯、給藥后代血液和給藥后代小便樣版，與此同時融合化學物質的質譜分析破裂規(guī)律性，表現(xiàn)其中藥制劑、含藥血液和小便中藥品成分。結果在湯藥中國共產黨評定了5五個化學物質；在給藥后病人的血液中國共產黨評定了34個化學物質；在小便中評定了23個化學物質。這種成份主要是黃酮類化合物、多糖類、苯堿類、苯酞類和人參皂甙類物質。結果本科學研究全方位表明了補陽還五湯以及在人血液和小便藥品成分，為揭露補陽還五湯真真正正醫(yī)治腦中風的藥力物質條件給予了參照。

補陽還五湯由黃芩生、當歸尾、白芍、地龍、羌活、紅花、杏仁等7味常見中藥構成，是養(yǎng)血活血化瘀的意味著方[1]。補陽還五湯常見于醫(yī)治腦顱損傷意外并發(fā)癥中腦缺血腦中風。藥理學分析證實，補陽還五湯能夠降低頸髓損傷位置的細胞壞死[4]，推動腦栓塞后毛細血管轉化成，減少毛細血管體細胞粘附分子結構和栽培基質金屬材料胰蛋白酶-9的表述，減少C-c反應蛋白和血糖水準，具備抗血管粥樣硬化功效等。補陽還五湯醫(yī)治腦缺血腦中風藥力準確，可是其藥力物質條件尚不確立。中藥材藥力物質條件科學研究是詮釋中藥材總體作用及功效實質的主導階段，現(xiàn)階段對補陽還五湯和其在身體的臨床藥理學的評定剖析已經有相關的參考文獻報導，如Liu等運用高效率液相色譜儀-二極管列陣探測器-航行時間質譜分析(HPLC-DAD-TOF/MS)技術性融合化學物質精準分子離子和特點殘片正離子在補陽還五湯中一共評定了54個化學物質，主要是喹諾酮類、黃酮類化合物、多糖類、大豆異黃酮類、單萜苷類、人參皂甙類、有機物和碳水化合物。在身體的有關分析如沈曉等運用超高效率液相色譜儀-四極桿-航行時間質譜分析(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技術性融合精準相對性分子質量和特點殘片離子對大鼠灌胃補陽還五湯后的腦部中國共產黨檢驗到五個化學物質，在血液中檢查到七個化學物質，與此同時楊東輝等[10]運用高效率液相色譜儀-二極管列陣探測器-線形正離子阱質譜分析(HPLC-DADitrap/MS)融合化學物質精準相對性分子質量、特點殘片正離子和紫外線消化吸收特點在豬的血清蛋白中國共產黨評定了4五個化學物質，以上科學研究均為揭露補陽還五湯的藥力物質條件給予了試驗根據(jù)，可是其在臨床醫(yī)學上的有關科學研究并未見參考文獻報導，而藥品僅有進到身體后才可以起到藥力，故對補陽還五湯在人體內的臨床藥理學科學研究，更有利于詮釋其藥力物質條件。本探討使用的超高效率液相色譜儀串連四級桿路軌阱質譜分析(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技術性具備迅速、精確、敏感度高的特性，創(chuàng)建此統(tǒng)計分析方法對補陽還五湯以及在人血液和小便藥品成分開展迅速剖析，將為揭露其醫(yī)治腦缺血腦中風的物質條件給予更為有益的試驗根據(jù)。

1儀器設備與原材料

Vanquish UHPLC超高效率液相色譜、QE-HF-X型質譜儀器、ST16R型冷凍離心機均來自于英國Thermo企業(yè)；血液采血管(英國BD企業(yè))；尿杯(上海市高創(chuàng)有機化學高新科技有限責任公司)；工業(yè)甲醇、水、苯甲酸、醋酸銨(LC-MS級)均購自英國Thermo企業(yè)，別的實驗試劑均為分析純。補陽還五湯嚴苛遵循原方黃芩生120 g、當歸尾6 g、白芍415 g，地龍、羌活、杏仁、紅花各3 g配制水煎而成。阿魏酸(生產批號：EB04168；純凈度≥99%)、毛蕊大豆異黃酮苷(生產批號：EB07531；純凈度≥98%)標準品均購自上海市士鋒生物技術有限責任公司；黃芩人參皂甙Ⅲ(生產批號：B20567；純凈度≥98%)、洋羌活內酯H(生產批號：B21462；純凈度≥98%)標準品均購自上海源葉生物技術有限責任公司。

2方式

2.1臨床醫(yī)學樣版收集

任意選擇6名被診治為腦中風病人(男孩和女孩參半)，忌食4 h，服食補陽還五湯后，各自在1，2 h收集病人的血細胞和小便樣版，血液和小便離心式(3 000 r·min?1，10 min)，取上清液約0.5 mL，混和不一樣時間點的血細胞和小便樣版后冷藏儲存于?80℃，預留。

2.2樣版前解決

各自取補陽還五湯、解除凍結后的血細胞和小便樣版100μL至EP管內，添加400μL含0.1%苯甲酸甲醇溶液，渦流波動1 min，冰浴靜放5 min，以15 000 r·min?1、4℃下離心式10 min，取300μL上清液加LC-MS級水稀釋液至500μL，應用帶有0.22μm濾紙的移液管中以10 000 r·min?1、4℃下離心式10 min，搜集滲瀝液，氣相剖析。

2.3標準品切削液配置

高精密稱加入適量的阿魏酸、毛蕊大豆異黃酮苷、黃芩人參皂甙Ⅲ和洋羌活內酯H標準品，放置10 mL深棕色量瓶中，用工業(yè)甲醇融解并稀釋液至標尺，混勻，各自配出濃度值為10.0，10.0，20.0，10.0 mg·mL?1的貯備液。各自取各標準品貯備液適當，放置同一個10 mL深棕色量瓶中，用工業(yè)甲醇稀釋液配置標準品混和切削液，儲存于?20℃電冰箱。

2.4 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS剖析

離子交換柱為Hyperil C18(1.0 mm×50 mm，1.9μm)；流動性相為水(A)-乙腈(B)(各含0.1%苯甲酸和5 mmol·L?1醋酸銨)；流動速度為0.30 mL·min?1；氣相量為2μL。梯度方向過柱：0~2 min，2%B，2~12 min，2%→100%B，12~14 min，100%B，14~14.1 min，100%→2%B，14.1~16 min，2%B。掃描儀范疇挑選m/z 100~1 500；ESI源：毛細血管工作電壓為3.2 kV；鞘氣流動速度：35 arb；輔助汽體流動速度：10 arb；毛細血管溫度：320℃。MS/MS二級掃描儀為數(shù)據(jù)信息依賴感掃描儀。

2.5補陽還五湯成分和其在人血及小便中藥品成分的評定

選用LC/MS標準對補陽還五湯試品與人血及小便試品開展檢測分析。根據(jù)較為補陽還五湯試品、給藥組血液和小便的總離子流圖和化學物質質譜分析破裂規(guī)律性評定藥品成分，并對主要成分采

3結果

3.1 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS色譜圖的收集

依據(jù)創(chuàng)建的檢測統(tǒng)計分析方法，在正、空氣負離子方式下收集補陽還五湯試品和給藥人血液及小便試品的色譜，結果見圖1。