一、目地和規(guī)定

①根據(jù)本試驗(yàn)加重對(duì)凱氏定氮法測(cè)量基本原理的了解和了解。

②根據(jù)本試驗(yàn)把握凱氏定氮法中試品消化吸收、水蒸氣蒸餾、消化吸收等專業(yè)技能的實(shí)際操作。

二、基本原理

本試驗(yàn)是運(yùn)用蛋白是中氮的有機(jī)物，當(dāng)食品類與鹽酸和金屬催化劑一同加溫消化吸收時(shí)，使蛋白質(zhì)分解，溶解的氮與鹽酸融合轉(zhuǎn)化成硫酸銨。隨后再脫灰水蒸氣蒸餾使氨分散，用硼酸消化吸收后再以硫酸標(biāo)液滴定管，最終依據(jù)酸的使用量乘于計(jì)算指數(shù)，即是蛋白質(zhì)含量。

三、儀器設(shè)備

①500mL凱氏蒸發(fā)皿

②定氮蒸餾裝置

四、實(shí)驗(yàn)試劑

①硫代硫酸鈉

②硫酸銨

③鹽酸

④40g／L硼酸洗液

⑤混和顯色劑

⑥400g／L氫氧化鈉溶液水溶液

⑦0.1000mol／L硫酸標(biāo)液

五、實(shí)驗(yàn)步驟

1、試品的消化吸收

將大豆破碎，過40目篩，攪拌后精確稱量黃豆面粉0.30g，當(dāng)心移進(jìn)100mL干躁的凱氏蒸發(fā)皿中（勿粘附在瓶?jī)?nèi)壁），添加0.2g硫代硫酸鈉、3g硫酸銨及5mL鹽酸（1克試品加鹽酸15mL），稍混勻后，將瓶以45^°斜支有石棉網(wǎng)的加熱爐上，先以文火遲緩加溫（燒開的泡沫塑料不超過瓶肚的2／3），待內(nèi)容物全都碳化，泡沫塑料徹底停下后，提升火力點(diǎn)，并維持瓶里液態(tài)微沸，直到液態(tài)呈深藍(lán)色回應(yīng)全透明后，再再次加溫0.5h，進(jìn)行消化吸收。

待消化酶冷至常溫后，用純凈水整潔地轉(zhuǎn)到100mL容量瓶中，并且用純凈水滴定劑，混勻，（消化酶在臨用前再稀釋液滴定劑）。

2、水蒸氣蒸餾與消化吸收

聯(lián)接好少量定氮蒸餾裝置，于水蒸汽產(chǎn)生瓶里盛水至2／3容量處，加甲基橙顯色劑數(shù)滴及鹽酸數(shù)mL，以保證水偏酸，添加數(shù)粒玻璃彈珠，加溫?zé)_水蒸汽產(chǎn)生瓶里的水。查驗(yàn)設(shè)備的密封性。

在接受瓶里添加25mL 40g／L硼酸及2滴混和顯色劑，將冷凝器下方插進(jìn)液位下列。精確量撤銷化封閉液10mL經(jīng)布氏漏斗口添加反映管中，用少許純凈水清洗布氏漏斗。經(jīng)布氏漏斗再添加10mL 40g／L氫氧化鈉溶液水溶液使其呈強(qiáng)偏堿，馬上夾好布氏漏斗夾，并加少許水于氣相布氏漏斗中密封，防止漏汽。夾持廢水排出口處的螺旋式夾，開展水蒸氣蒸餾。水蒸氣蒸餾至冷凝器下端消化吸收液變成翠綠色逐漸記時(shí)，再次水蒸氣蒸餾3min后，將冷凝器頂尖提離液位再水蒸氣蒸餾1min，用純凈水清洗冷凝器頂尖后終止水蒸氣蒸餾。

3、滴定管

消化吸收液用0.1000mol／L硫酸標(biāo)液滴定管至水溶液發(fā)生微鮮紅色在30s內(nèi)不消退即是做到滴定終點(diǎn)。

4、試劑空白

不用試件，按以上實(shí)際操作開展試劑空白。

六、結(jié)果解決

式中：ω——蛋白的質(zhì)量濃度，％

c——HCl規(guī)范溶液的濃度，mol／L

V₁——滴定管試品消化吸收液時(shí)耗費(fèi)硫酸標(biāo)液容積，mL

V₂——滴定管空缺消化吸收液時(shí)耗費(fèi)硫酸標(biāo)液容積，mL

m——黃豆面粉的品質(zhì)，g

M——氮的摩爾質(zhì)量，14.01g／mol

F——大豆的蛋白質(zhì)含量計(jì)算指數(shù)（5.71）

七、表明及常見問題

①消化過程應(yīng)留意旋轉(zhuǎn)凱氏蒸發(fā)皿，運(yùn)用冷疑酸液將粘附在瓶?jī)?nèi)壁的炭粒沖下去，以促消化徹底。

②試品含人體脂肪或糖較多時(shí)，易形成泡沫塑料，可添加小量辛醇或液體石蠟，或甲基硅油有機(jī)硅消泡劑，避免其外溢瓶外，并留意合理操縱熱原抗壓強(qiáng)度。

③硫代硫酸鈉具有催化反應(yīng)，加快氧化分解。與此同時(shí)也是水蒸氣蒸餾時(shí)試品液脫灰的顯色劑，若所施加堿量不夠，溶解液展現(xiàn)深藍(lán)色不轉(zhuǎn)化成堿式硫酸銅沉積，需再提升氫氧化鈉溶液使用量。

④水蒸氣蒸餾全過程應(yīng)留意連接處有沒有松漏狀況，水蒸氣蒸餾結(jié)束，先將水蒸氣蒸餾出入口離去液位，再次水蒸氣蒸餾1min，將粘附在頂尖的吸附液徹底洗入消化吸收瓶里，再將消化吸收瓶移走，最終斷電，決不能先斷電，不然消化吸收液將產(chǎn)生反吸狀況。