1、運(yùn)用化肥分子結(jié)構(gòu)的原來(lái)基因合成：運(yùn)用–化肥分子結(jié)構(gòu)中華有的活力官能團(tuán)，或經(jīng)適度化學(xué)變化在化肥分子結(jié)構(gòu)上產(chǎn)生-C1、-COCl、-OH、-NH₂、-CHO等活力官能團(tuán)，隨后再與適度實(shí)驗(yàn)試劑縮合反應(yīng)，如碳水化合物與酰鹵或醛基、酸酐與甲基反映等，進(jìn)而生成含適度長(zhǎng)短“聯(lián)接臂”的化肥半抗原。例如可在偏堿情況下將噻菌靈分子結(jié)構(gòu)中的羥基與溴代己酸縮合反應(yīng)，生成噻菌靈半抗原。

2、運(yùn)用生成化肥的化工中間體或化肥的溶解物質(zhì)(或構(gòu)造類似物)生成：如克百威半抗原的生成，先用咪唑酚和光氣反映轉(zhuǎn)化成2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋哺基氯甲酸酯，隨后再和4-氨基丁酸或6氨基己酸反映獲得維持克百威結(jié)構(gòu)類型、具備羧基尾端、含4個(gè)氧原子或6個(gè)氧原子“聯(lián)接臂”的克百威半抗原。

3、從頭合成：如三唑磷半抗原的生成，以三氯硫磷為初始原材料，先與酒精反映轉(zhuǎn)化成二氯硫代磷酸乙酯，再依次與苯唑醇、氨基己酸(或氨基丁酸)反映獲得三唑磷半抗原N-[(O-乙基-O-苯基-1，2，4-三唑)硫代磷?；鵠-6-氨基己酸(或丁酸)。

(二)化肥人力抗原體(免疫原和被子原)的制取

化肥人力抗原體的制取就是指將化肥半抗原與載體蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)的全過(guò)程。制取人力抗原體時(shí)要充足將化肥的特點(diǎn)構(gòu)造突顯于載體蛋白表層。依據(jù)化肥半抗原中活力官能團(tuán)的不一樣，可選用不一樣的辦法與載體蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)。針對(duì)含活力羧基的化肥半抗原，一般 選用活力酯法、碳二亞胺法或混和酸酐法與載體蛋白的分散羥基產(chǎn)生酰胺鍵而共價(jià)鍵耦聯(lián)。針對(duì)含脂環(huán)族伯氨的化肥，一般根據(jù)戊二醛、二異氰酸酯、亞胺酸酯等聯(lián)接劑與媒介蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)。針對(duì)含脂環(huán)伯胺(脂環(huán)氟苯可先復(fù)原為羥基)的化肥，可先反映轉(zhuǎn)化成重氮鹽，再與載體蛋白分子結(jié)構(gòu)中色氨酸殘基上酚羥基的鄰位產(chǎn)生甲酰胺鍵而共價(jià)鍵耦聯(lián)。針對(duì)含甲基、羥基的化肥，可先與琥珀酸酐、氯乙酸鈉反映引進(jìn)分散羧基，再與媒介蛋白耦聯(lián)，針對(duì)含糖量基的化學(xué)物質(zhì)，分子結(jié)構(gòu)中的鄰二醇可被過(guò)碘酸鹽空氣氧化為醛基，再與媒介蛋白的分散羥基產(chǎn)生酰胺鍵而共價(jià)鍵耦聯(lián)。在制取人力抗原體時(shí)，用以制取免疫原的載體蛋白和用以制取被子原的載體蛋白一般來(lái)源于不一樣屬種，那樣還可以在化肥免疫力剖析中降低抗原與蛋白的非特異性反映。

(三)抗原的制取與提純

1、多克隆抗體的制取多克隆抗體的制取用人造的免疫原免疫力兔、羊等身心健康小動(dòng)物。

因?yàn)椴【?、病毒感染等顆粒物性抗原體的抗原性比人力抗原體的抗原性強(qiáng)，因此在使用 人力抗原體免疫力被病菌、病毒感染等病源物或寄生蟲(chóng)病的生物時(shí)，難以獲得對(duì)總體目標(biāo)剖析化肥具非特異感染力的抗原。

小動(dòng)物免疫力計(jì)劃方案：初次免疫力以弗氏徹底佐劑乳狀液免疫原使成油包水溶劑，用以皮內(nèi)多一點(diǎn)注入；加強(qiáng)免疫以弗氏不徹底佐劑乳狀液免疫原使成油包水溶劑，用以皮內(nèi)或皮下組織多一點(diǎn)注入。免疫力位置包含后背皮內(nèi)和皮下組織、頭頸皮下組織、腹部、腳板、腹股淋巴結(jié)節(jié)等。沒(méi)經(jīng)佐劑乳狀液的水溶免疫原，可開(kāi)展皮下注射或靜脈輸液。按免疫力使用量，小動(dòng)物免疫力分少量法、變量定義法和很多法。少量法的免疫原使用量在mg(μg)級(jí)，變量定義法多見(jiàn)1～2mg/kg(休重)，很多法的免疫力使用量為50～100mg/kg每只小動(dòng)物；初次免疫力的時(shí)間間隔一般3周上下，之后每過(guò)7～10d加強(qiáng)免疫1次。4免后1周逐漸耳緣靜脈取血，室內(nèi)溫度當(dāng)然凝結(jié)后4℃置放留宿，分離出來(lái)血清蛋白。將抗血清按1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64……稀釋液，瓊脂粉雙重免疫擴(kuò)散測(cè)定方法抗血清效價(jià)達(dá)1∶64時(shí)，頸總動(dòng)脈采全血，室內(nèi)溫度當(dāng)然凝結(jié)后4℃置放留宿。次日分離出來(lái)血清蛋白，加0.02％疊氮化鈉于一20℃主抓凍存，可儲(chǔ)存3～5年。也可選用硫酸銨三步蛋白質(zhì)變性法分離出來(lái)抗血清中的人免疫球蛋白，必需時(shí)要免疫力蛋白質(zhì)A或免疫力蛋白質(zhì)G脂質(zhì)體、離子交換色譜色譜儀及其二乙胺乙基(DEAE)甲基纖維素吸咐法進(jìn)一步提純，干凍。抗原干凍粉于-20℃可儲(chǔ)存5～十年。

2、單抗的制取單抗的制取選用雜交瘤技術(shù)性，操作步驟如下所示。

(1)小動(dòng)物免疫力：用提純抗原體對(duì)8～12周齡的BALB/c身心健康小白鼠開(kāi)展腹部注入免疫力(水溶抗原體先要用弗氏徹底佐劑充足乳狀液)。一般共免疫力5～8次，免疫力問(wèn)隔時(shí)問(wèn)為2～3周。查驗(yàn)抗血清的效價(jià)，末次免疫力后3～4d，分離出來(lái)脾體細(xì)胞。

(2)骨髓瘤細(xì)胞的塑造：取Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞株，首先用含8-氮鳥(niǎo)嘌呤的培養(yǎng)液做融入塑造，體細(xì)胞增長(zhǎng)時(shí)間一般為10～15h，最大生長(zhǎng)發(fā)育相對(duì)密度為9.0×10⁵個(gè)/mL。在細(xì)胞融合前1d，用新鮮培養(yǎng)液調(diào)整體細(xì)胞濃度值為2.0×10⁵個(gè)/mL，次日一般為多數(shù)成長(zhǎng)期體細(xì)胞。

(3)細(xì)胞融合：取具備基酶的骨髓瘤細(xì)胞和睥體細(xì)胞按恰當(dāng)占比(一般1∶4)混和，添加聚乙二醇(PEG)使體細(xì)胞彼此之間結(jié)合，隨后用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋液以清除聚乙二醇的功效。將結(jié)合后的體細(xì)胞適度稀釋液后置攝像頭塑造板中塑造。

(4)挑選：細(xì)胞培養(yǎng)基至遮蓋l0％～20％塑造板的孔底時(shí)，汲取上清液用間接性酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定方法檢驗(yàn)抗原成分，挑選出抗原成分高的代謝孔。將孔中體細(xì)胞再?gòu)?fù)制化，然后用酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定方法開(kāi)展抗原體非特異測(cè)量，挑選出代謝特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株，液氮罐中凍存。