燕麥粉是麥子制粉操作過程中的關(guān)鍵副產(chǎn)品，營養(yǎng)成分豐富多彩，在其中高含水量的蛋白及其不飽和脂肪讓燕麥粉可做為蛋白質(zhì)補(bǔ)充品與糧油食品產(chǎn)品的夢想原材料。但因?yàn)檠帑湻壑写嬗谢傅膬?nèi)源性人體脂肪抗霉素、高含水量的抗?fàn)I養(yǎng)成分因素及其高水分活度，促使燕麥粉無法立即做為食品工業(yè)原材料獲得合理運(yùn)用，通常被當(dāng)作精飼料或廢料處理。發(fā) 酵做為改進(jìn)食品類物理化學(xué)及生產(chǎn)加工性能的有效的方式 ，在燕麥粉上也獲得了取得成功運(yùn)用。發(fā)醇后的燕麥粉中的植酸等抗?fàn)I養(yǎng)成分因素的含水量大大減少，淀粉酶和脂質(zhì)空氣氧化酶的活性也獲得明顯抑止?？茖W(xué)研究還發(fā)覺，燕麥粉中的小分子活性肽、花青素等作用活性物質(zhì)的占比也在進(jìn)行發(fā)酵后明顯提升，具備降低血脂、抗氧化性、抗癌等生理作用]。在其中2,6-二叔丁基對苯醌（2,6-dimethoxy-ρ-benzoquinone，2,6-DMBQ）做為發(fā)醇燕麥粉中首要的抗癌活力成份而遭受普遍關(guān)心。

2,6-DMBQ來自燕麥粉體細(xì)胞內(nèi)的水溶氫醌糖苷。在進(jìn)行發(fā)酵全過程中，氫醌糖苷的糖苷鍵受微生物菌種代謝的β-葡萄糖苷酶的功效破裂，并在過氧化氫酶的效果下轉(zhuǎn)化成2,6-DMBQ[13]。HIDV魪GI M等[14]在20世際90時(shí)代運(yùn)用面包酵母發(fā)醇燕麥粉，對發(fā)醇物質(zhì)生產(chǎn)加工后獲得發(fā)醇燕麥粉提取液并定名為Avemar。在之后的分析中，Avemar的抗癌、抗氧化性、增強(qiáng)免疫力的作用獲得普遍確認(rèn)，但針對Avemar實(shí)際的厭氧發(fā)酵加工工藝與發(fā)酵菌種卻很少有報(bào)導(dǎo)。中國專家學(xué)者經(jīng)秀等]和海外專家學(xué)者RIZZELLO C G等[18]各自以酵母和乳酸菌飲料為受試菌苗開展產(chǎn)2,6-DMBQ菌苗的挑選，最后得到高溫釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和綠色植物乳桿
菌（Lactobacillus plantarum）為適宜發(fā)酵菌種，可是事后并沒有對二種菌苗產(chǎn)2,6-DMBQ的功能開展進(jìn)一步較為。

本分析以燕麥粉為原材料，2,6-DMBQ生產(chǎn)量為評(píng)價(jià)方法，從3株菌種中挑選最佳發(fā)酵菌種，并調(diào)查3種原材料前處理方法對2,6-DMBQ生產(chǎn)量的危害。在這個(gè)基礎(chǔ)上，研究菌苗加上量、料液比、發(fā)酵溫度及其發(fā)酵時(shí)間4個(gè)發(fā)醇加工工藝要素對2,6-DMBQ生產(chǎn)量的危害，并根據(jù)單要素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)明確最適宜發(fā)醇加工工藝組成，致力于為發(fā)醇燕麥粉資源進(jìn)一步綜合利用給予實(shí)驗(yàn)根據(jù)。

1 原材料與方式

1.1 原材料與實(shí)驗(yàn)試劑

1.1.1 原材料

燕麥粉：市面上。

1.1.2 菌苗

乳酸菌（Lactobacillus plantarum）：試驗(yàn)室分離出來儲(chǔ)存；高溫釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）、少糖面包酵母：安琪酵母股權(quán)有限責(zé)任公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

工業(yè)甲醇、氧化鈉（均為分析純）：國藥控股上海試劑有限責(zé)任公司；2,6-二叔丁基對苯醌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純凈度>97%）：梯希愛上海市化為產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限責(zé)任公司；酵母菌浸取粉胨葡萄糖水（yeast extract peptone dextrose，YEPD）培養(yǎng)液、孟加拉國紅培養(yǎng)液、MRS骨頭湯培養(yǎng)液、MRS固體培養(yǎng)基：廣東環(huán)凱微生物菌種高新科技有限責(zé)任公司。

1.2 儀器設(shè)備與機(jī)器設(shè)備

RS-FS1401型多用途破碎機(jī)：合肥榮事達(dá)小電器有限責(zé)任公司；LHS-250HC-11型恒溫恒濕設(shè)備恒溫箱：上海一恒儀器設(shè)備有限責(zé)任公司；BSA 124S型高精密電子分析天平：廣州授科儀器設(shè)備高新科技有限責(zé)任公司；Avanti J-26xp型離心機(jī)：英國Beckman企業(yè)；DHG-9053A型電加熱控溫鼓風(fēng)干燥箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)儀器有限責(zé)任公司；KQ-700DE型數(shù)控機(jī)床超聲波清洗器：昆山市超聲波儀器設(shè)備有限責(zé)任公司；LDZM-80L-III型滅菌鍋：上海申安醫(yī)療器械廠；LGJ-25G冷凍式干燥機(jī)：北京四環(huán)福瑞科儀智能科技有限責(zé)任公司；M3-L233B微波爐加熱：廣東省美的微波爐生產(chǎn)制造有限責(zé)任公司；Waters ACQUITY UPLC H-CLASS超高效率液相色譜儀系統(tǒng)軟件：英國Waters企業(yè)。

1.3 方式

1.3.1 燕麥粉發(fā)醇加工工藝及實(shí)際操作關(guān)鍵點(diǎn)

                                             菌種活化
                                                   ↓
燕麥粉→破碎→殺菌→預(yù)備處理→注射→發(fā)醇

實(shí)際操作關(guān)鍵點(diǎn)：

破碎：將小麥胚芽粉碎后，過60目篩。殺菌：將小麥胚芽粉與超純水系統(tǒng)按質(zhì)量比1∶3充足攪拌后在121 ℃標(biāo)準(zhǔn)下髙壓蒸氣殺菌15 min。預(yù)備處理：將滅完菌的燕麥粉與超純水系統(tǒng)依照質(zhì)量比1∶10再度攪拌，依照事后試驗(yàn)設(shè)計(jì)開展差異解決。菌種活化、注射：將乳酸菌連接MRS骨頭湯，37 ℃標(biāo)準(zhǔn)下塑造24 h，取200 μL細(xì)胞培養(yǎng)液連接MRS骨頭湯培養(yǎng)液，37 ℃標(biāo)準(zhǔn)下塑造24 h，持續(xù)活性塑造2代后，按事后試驗(yàn)設(shè)計(jì)開展注射。高溫釀酒酵母和少糖面包酵母在37 ℃溫開水中活性10 min后取200 μL連接YEPD培養(yǎng)液，28 ℃標(biāo)準(zhǔn)下塑造24 h，持續(xù)活性塑造2代后，按事后試驗(yàn)設(shè)計(jì)開展注射。發(fā)醇：依照事后試驗(yàn)設(shè)計(jì)各自在不一樣標(biāo)準(zhǔn)下完成發(fā)醇。

1.3.2 發(fā)酵菌種的挑選

乳酸菌：用無菌檢測鹽水將活性后的乳酸菌菌體濃度值調(diào)整至1×10⁴ CFU/mL，按菌苗加上量1∶6（菌液與麥胚質(zhì)量比，g∶g）加上到料液之比1∶15（麥胚與水質(zhì)量比，g∶g）的燕麥粉發(fā)醇基液中，37 ℃標(biāo)準(zhǔn)下發(fā)醇24 h。

酵母菌：用無菌檢測鹽水將活性后的高溫釀酒酵母、少糖面包酵母的菌體濃度值調(diào)整至1×10⁴ CFU/mL，按菌苗加上量1∶6各自加上到料液之比1∶15的燕麥粉發(fā)醇基液中，28 ℃標(biāo)準(zhǔn)下發(fā)醇24 h。

 取發(fā)酵物測量2,6-DMBQ生產(chǎn)量，較為3株菌產(chǎn)2,6-DMBQ的工作能力，明確適宜發(fā)酵菌種。

1.3.3 不一樣預(yù)備處理方法對2,6-DMBQ生產(chǎn)量的危害

在明確適宜發(fā)酵菌種的根基上，以未作解決的燕麥粉為空白試驗(yàn)，依據(jù)早期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，各自選用高溫（95 ℃，30 min）、微波加熱（700 W，5 min）、超聲波（輸出功率100%，30 min）3種辦法對燕麥粉開展預(yù)備處理。用無菌檢測鹽水將活性后的適宜菌苗的菌體濃度值調(diào)整至1×104 CFU/mL，按菌苗加上量1∶6加上到料液之比1∶15的燕麥粉發(fā)醇基液中，28 ℃標(biāo)準(zhǔn)下發(fā)醇24 h。測量發(fā)酵物中2,6-DMBQ生產(chǎn)量，以研究不一樣的預(yù)備處理標(biāo)準(zhǔn)下是不是有利于2,6-DMBQ生產(chǎn)量的提升，明確適宜預(yù)備處理方法。

1.3.4 發(fā)醇標(biāo)準(zhǔn)提升單要素實(shí)驗(yàn)

在明確適宜發(fā)酵菌種和預(yù)備處理方法后完成發(fā)醇標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)研究，固定不動(dòng)發(fā)醇標(biāo)準(zhǔn)為：菌苗加上量1∶6、料液比1∶15、發(fā)酵時(shí)間24 h、發(fā)酵溫度28 ℃，在這個(gè)基礎(chǔ)上，先后調(diào)查菌苗加上量（1∶2、1∶4、1∶6、1∶8、1∶10）、料液比（1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、 1∶25）、發(fā)酵溫度（18 ℃、23 ℃、28 ℃、33 ℃、38 ℃）、發(fā)酵時(shí)間（18 h、24 h、30 h、36 h、42 h）對2,6-DMBQ生產(chǎn)量的危害，明確
各要素的適宜標(biāo)準(zhǔn)以開展正交實(shí)驗(yàn)。

1.3.5 發(fā)醇標(biāo)準(zhǔn)提升正交實(shí)驗(yàn)

依據(jù)單要素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以2,6-DMBQ生產(chǎn)量為評(píng)價(jià)方法，選擇菌苗加上量（A）、料液比（B）、發(fā)酵時(shí)間（C）、發(fā)酵溫度（D）4個(gè)要素開展4要素3水準(zhǔn)的L（9 34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，以確認(rèn)最好發(fā)醇標(biāo)準(zhǔn)組成，正交實(shí)驗(yàn)要素與水準(zhǔn)見表1。

1.3.6 2,6-DMBQ生產(chǎn)量的測量

試品的解決：將發(fā)酵物在8 000×g、4℃標(biāo)準(zhǔn)下離心式15 min，取上清液低溫干燥，隨后添加20 mL工業(yè)甲醇于干凍原材料中開展萃取法，超聲波解決（輸出功率100%，30 min）后，用0.22 μm濾紙過慮制取被測試品液開展測量。

參考經(jīng)秀等[17]的辦法實(shí)現(xiàn)了改善，選用超高效率液相色譜儀（ultra performance liquidchromatography，UPLC）測定方法2,6-DMBQ生產(chǎn)量。UPLC標(biāo)準(zhǔn)：ACQUITY UPLC BEH C18色 譜柱（2.1 mm×100 mm1.7 μm），流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇∶水=20∶80（V/V），流動(dòng)速度0.2 mL/min，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量0.2 μL，檢驗(yàn)光波長
288 nm。以2,6-DMBQ的濃度值（x）為橫坐標(biāo)軸，峰總面積（y） 為縱軸，制作2,6-DMBQ標(biāo)曲。2,6-DMBQ標(biāo)曲的線性回歸方程為y=48 102x-33 772，R²=0.999 4，表明2,6-DMBQ在1～100 μg/mL濃度值范疇內(nèi)有著優(yōu)良的線性相關(guān)，可用以2,6-DMBQ的定量分析。依據(jù)2,6-DMBQ標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保存期開展判定。