多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法是當(dāng)前測量地下水中糞沙門氏菌群的常見規(guī)范方式,根據(jù)三種方式對糞大腸菌群國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和具體地下水樣開展剖析檢驗,結(jié)果顯示:多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法用以糞大腸菌群的檢驗結(jié)果具備一致性;根據(jù)三種方式利弊的比照,多管法低成本適用基本檢驗,紙條法高效率便捷更適用大批快速檢測,酶底物法使用簡易,不會受到場所限定可立即當(dāng)場檢驗,更適用緊急當(dāng)場檢測。

序言

糞大腸菌群又被稱為耐高溫大腸桿菌，是在44.5℃能生長發(fā)育并發(fā)醇乳酸菌產(chǎn)酸脹氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陽性菌呈陰性無枯草芽孢菌。自然環(huán)境地下水中的糞大腸菌群關(guān)鍵來源于排泄物的環(huán)境污染，因而根據(jù)測量水里糞大腸菌群的成分，可間接性得到水質(zhì)受排泄物嚴(yán)重污染的狀況，是目前世界各國環(huán)保監(jiān)測單位關(guān)鍵檢測新項目之一，是點評水污染水平和清潔衛(wèi)生的主要指標(biāo)值，在《地表水環(huán)境質(zhì)量（GB3838—2002）》中，要求Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ類水糞大腸菌群的成分先后≤200、200～2000、2000～10000、10000～20000及20000～40000個/L，在我國地下水體糞大腸菌群成分廣泛較高，一部分海域成分乃至超出Ⅴ類水質(zhì)檢測標(biāo)準(zhǔn)。

多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法是當(dāng)前中國測量地下水中糞大腸菌群常見的規(guī)范方式。多管發(fā)酵早在1985年就納入《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法（GB5750-85）》，并于2018年公布修訂本，是糞大腸菌群測量的傳統(tǒng)方式，它做為《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》中的建議方式，英國公共衛(wèi)生服務(wù)研究會（APHA）出版發(fā)行的《水和廢水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法（20版）》中方式9221E也選用的是多管發(fā)酵；紙條法在歐美資本主義國家應(yīng)用較少，關(guān)鍵在一些發(fā)達(dá)國家應(yīng)用，環(huán)境保護(hù)部在2015年公布了紙條法的規(guī)范方式，它做為《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》中的建議方式（C類方法）；酶底物法是一種新式酶技術(shù)性監(jiān)測方式 ，已在美、日、韓和歐州眾多我國應(yīng)用,2003年從國外引進(jìn)在我國，環(huán)境保護(hù)部在2018年公布了酶底物法的規(guī)范方式。三種方式均是糞大腸菌群檢驗的規(guī)范方式，但在方法檢出限、現(xiàn)場采樣和操作流程等存有差別，文中參考環(huán)保企業(yè)規(guī)范，各自從糞大腸菌群國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和具體地下水樣開展檢測分析和比照科學(xué)研究，并從檢測時間、成本費(fèi)、自然環(huán)境等歸納出各方式的優(yōu)點和缺點和應(yīng)用領(lǐng)域，為眾多環(huán)保監(jiān)測剖析工作人員依據(jù)具體標(biāo)準(zhǔn)和水質(zhì)采樣種類挑選最好方式材料分析測試給予參考與參照。

1試驗一部分

1.1實驗試劑和原材料

乳清蛋白蛋白胨培養(yǎng)液，EC骨頭湯培養(yǎng)液，糞腸子紙條I、II型，糞大腸菌群有證國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，DST(deflned)MMO-MUG酶底物實驗試劑，無菌水，呈陽性菌種：腸子埃希氏菌ATCC25922，呈陰性菌種：產(chǎn)氣腸桿菌ATCC13048。

1.2儀器設(shè)備和機(jī)器設(shè)備

取樣瓶，防水防火式恒溫培養(yǎng)箱：GNP-9160，恒溫培養(yǎng)箱：HH.B11.420-135-Ⅱ，髙壓滅菌設(shè)備：YXQ-LS-100G，程序控制定量分析全自動封口機(jī)：2009D,97孔定量分析盤，規(guī)范呈陽性色度盤，接種環(huán)，1mL容量瓶，試管嬰兒：15mm×150mm。

1.3實驗方法

多管發(fā)酵HJ347.2—2018；紙條法HJ755—2015；酶底物法HJ1001—2018。

2試驗結(jié)果與探討

2.1空白試驗

空白試驗用無菌水做全程序流程空缺測量。(1)多管發(fā)酵：初發(fā)醇和復(fù)發(fā)醇的管內(nèi)均無色調(diào)轉(zhuǎn)變 ，達(dá)到規(guī)范空缺規(guī)定；(2)紙條法：塑造后的紙條上無一切微生物菌種生長發(fā)育，達(dá)到規(guī)范空缺規(guī)定；(3)酶底物法：塑造后的97孔定量分析盤里無顏色反應(yīng)，達(dá)到H規(guī)范空缺規(guī)定。

2.2呈陽性及陰性對照

按多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法三種方式試驗需要做好塑造，呈陽性菌種展現(xiàn)陽性反應(yīng)；呈陰性菌種展現(xiàn)陰性反應(yīng)。

2.3糞大腸菌群國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的結(jié)果（見表1)

由表1得知，三種方式對糞大腸菌群國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的六次檢測結(jié)果均在可接納范疇（83～312067MPN/L）內(nèi)；從規(guī)范試品檢驗效果的相對性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差看來，多管發(fā)酵為3.37%，紙條法為2.44%，酶底物法為1.87%，均達(dá)到分別相匹配方式規(guī)范中相對性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的規(guī)定；從相對偏差看來，多管發(fā)酵為3.72%，紙條法為2.6%，酶底物法為3.34%，均達(dá)到分別相匹配方式規(guī)范中相對偏差的規(guī)定。

2.4具體地下水樣結(jié)果（見表2)

18個不一樣自然環(huán)境地下水樣與此同時用多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法在同樣情況下開展檢驗，為了更好地使數(shù)據(jù)信息成標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布，先向信息開展取對數(shù)后開展應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)剖析，應(yīng)用SPSS兩組開展雙樣版配對t檢驗。

由表2數(shù)據(jù)信息還可以看得出，相關(guān)系數(shù)r各自為0.983、0.990、0.993，表明三組數(shù)據(jù)信息關(guān)聯(lián)性不錯；每組的t值各自為0.056、0.124、0.247，均低于t0.05(17)=2.110，表明三種方式對同一試品的解析結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義上的顯著性差異，即多管法、紙條法和酶底物法的研究結(jié)論具備一致性。

2.5三種辦法的優(yōu)點和缺點比照（見表3)

由表3得知，從實驗過程看來，多管發(fā)酵必須 配備培養(yǎng)液并殺菌，開展復(fù)發(fā)醇，剖析時間48h上下、檢測時間長、操作流程繁瑣且在殺菌自然環(huán)境下檢驗；紙條法和酶底物法均可及時注射逐漸試驗，比較簡單，酶底物法注射的勞動量顯著比多管和紙條法少許多 ，高效率最大，紙條法對比多管法來講不必開展復(fù)發(fā)醇，高效率比多管法高。從實驗儀器看來，紙條法只必須 防水防火恒溫箱，多管法和酶底物法除開防水防火恒溫箱外，均還必須一個機(jī)器設(shè)備。從資金成本費(fèi)看來，單獨(dú)試品的費(fèi)用多管發(fā)酵最少，次之為紙條法，酶底物法成本費(fèi)最大。

3總結(jié)

根據(jù)多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法對規(guī)范試品和具體地下水樣的試驗比照科學(xué)研究得知，同一試品三種方式對糞大腸菌群檢驗結(jié)果無應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)上顯著性差異，其結(jié)論具備一致性。他們做為環(huán)保等級方式，都各有優(yōu)點和缺點，可依據(jù)不一樣的前提和規(guī)定選取適宜的方式 。多管發(fā)酵和紙條迅速法早已列入《國家地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測網(wǎng)監(jiān)測任務(wù)作業(yè)指導(dǎo)書（試行）》的特定方式。

總的來說，多管發(fā)酵運(yùn)用極其普遍，適用水質(zhì)采樣稀釋倍數(shù)不明的情形和環(huán)保監(jiān)測單位的常用檢驗；紙條法更適用大量試品的快速檢測；酶底物法雖成本費(fèi)價格昂貴，但使用簡易，對檢驗自然環(huán)境并沒有特別要求，更適用自然環(huán)境安全事故緊急檢測。