高脂肪飲食搭配可造成 血糖上升，比較嚴(yán)重時(shí)可造成一些傷害身體健康的病癥，如主動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞和慢性胰腺炎等，已成為了現(xiàn)代社會(huì)群體關(guān)鍵的營養(yǎng)成分難題之一。除此之外，長期性服用高脂肪飲食還可造成 體脂率出現(xiàn)異常累積和腸道微生物群的不平衡。根據(jù)飲食搭配干涉防止由高脂肪膳食導(dǎo)致的健康問題正成為了科學(xué)研究的網(wǎng)絡(luò)熱點(diǎn)。

抗性淀粉在直腸中無法被酶解消化吸收，而在直腸中可被酵解，其根據(jù)上消化道進(jìn)到腸子，經(jīng)病菌進(jìn)行發(fā)酵造成短鏈脂肪酸，調(diào)整腸菌，降低血糖和碳水化合物，抑止脂肪細(xì)胞的消化吸收累積，改進(jìn)炎癥。盲腸是腸子的起止段，盡管盲腸、乙狀結(jié)腸是病菌最集中和多元化的地區(qū)，且二者內(nèi)容物中有益菌構(gòu)造具備相似度，可是優(yōu)點(diǎn)有益菌存有差別。現(xiàn)階段有關(guān)盲腸中有益菌轉(zhuǎn)變 特點(diǎn)與改進(jìn)因高脂肪飲食搭配誘發(fā)血脂高和血糖高關(guān)聯(lián)的探討罕見報(bào)導(dǎo)。紫山藥（PurpleDioscoreaalataL）為多年生長 蔓生植物薯蕷（DioscoreaalataL）的根莖，在中國沿海地區(qū)普遍栽種，木薯淀粉約占微生物總產(chǎn)量的16%～20%。

本分析以紫山藥高抗性淀粉為原材料，揭露紫山藥高抗性淀粉對(duì)盲腸微生物菌種的益生功效以及改進(jìn)高脂血癥效率，能為盲腸有益菌及脂質(zhì)代謝與身心健康的分析給予根據(jù)。

1原材料和機(jī)器設(shè)備

1.1原材料與實(shí)驗(yàn)試劑

紫山藥（紫玉淮山），產(chǎn)于福建三明市建寧縣。普魯蘭酶（2800U/g）、高溫α-胃蛋白酶（8000U/mL），英國Sigma企業(yè)；木薯淀粉葡糖苷酶（100000U/mL），上海市麥克林生物化學(xué)高新科技有限責(zé)任公司；D-葡萄糖水診斷試劑盒，西班牙Megazyme公司；血糖檢測試劑盒，南京建成生物技術(shù)研究室；ＴIANampStoolDNAkit檢測試劑盒，天根生化高新科技有限責(zé)任公司；檸檬酸鈉、氫氧化鈉溶液、磷酸氫二鈉、工業(yè)乙醇均為國內(nèi)分析純?；揪暳铣煞荩禾穷惻c碳水化合物72.3%、蛋白14.9%、人體脂肪12.8%；高脂肪精飼料成份：酯化椰油5%，食用油5%，碳水化合物0.2%和基本精飼料89.8%。精飼料購自南通市特洛菲精飼料高新科技有限責(zé)任公司。

1.2關(guān)鍵機(jī)器設(shè)備與儀器設(shè)備

DHG-9003A型暖風(fēng)烘干箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限責(zé)任公司；SYQ-DSX-280B型高壓滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠；ＴDL-5-A型低速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)研究儀器廠；ＶERＴEX70型傅立葉光譜分析儀，法國布魯克分析儀企業(yè)；GA-3型測血糖儀器，三諾生物感測器股權(quán)有限責(zé)任公司；CFX96型熒光定量PCR儀，英國Bio-Rad公司；PE300型IlluminaMiSeq轉(zhuǎn)錄組測序儀，英國Illumina企業(yè)。

2實(shí)驗(yàn)方式

2.1紫山藥抗性淀粉的制取

紫山藥木薯淀粉的制取見參考文獻(xiàn)。將50.0g紫山藥木薯淀粉（干基），加至200mL硫酸銨緩沖液（0.2mol/L，pH5.0）中燒開30min，減溫至58℃；添加普魯蘭酶（2800U/g）拌和12h；調(diào)整至7.0，120℃隔熱保溫30min，制冷至4℃儲(chǔ)藏24h，不斷2次；將沉積粉40℃干躁后，稱量20.0g添加100mLpH6.0醋酸鈉緩沖液，提溫至90℃，添加0.3mL高溫α-胃蛋白酶（8000U/mL）維持1h，制冷至60℃并且用稀釋液的檸檬酸鈉調(diào)整pH至4.5，添加0.3mL木薯淀粉葡糖苷酶（100000U/mL）維持1h；以3000×g離心式15min，純凈水清洗木薯淀粉3次，摩爾分?jǐn)?shù)95%酒精清洗3次，40℃干躁24h，破碎過100目篩，得高抗性淀粉（HRS）。系統(tǒng)檢測，HRS中的迅速消化吸收木薯淀粉、遲緩消化吸收木薯淀粉和抗性淀粉的成分各自為11.4%，28.4%和60.2%。

2.2 FTlR剖析

傅里葉變換紅外光譜分析（FＴIR）剖析依據(jù)Wang等的方式稍做改動(dòng)。將烘干的HRS試品與溴化鉀以1∶100～1∶150的比率實(shí)現(xiàn)混和，充足碾磨。將打磨好的粉末狀倒進(jìn)磨具中真空包裝壓片糖果，12MPa的工作壓力下維持30s，壓至全透明，在4000～400cm^-1掃描儀區(qū)域內(nèi)運(yùn)用傅里葉變換紅外光譜分析掃描機(jī)觀查。

2.3細(xì)胞模型創(chuàng)建

男性金黃地鼠，SPF級(jí)，6～8周齡，休重90～110g，購自北京市維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)性有限責(zé)任公司。適應(yīng)能力飼養(yǎng)1星期過后，將32只金黃地鼠任意分成4組喂養(yǎng)：一切正常對(duì)照實(shí)驗(yàn)（NC）：基本精飼料 相等鹽水；實(shí)體模型組（MC）：高脂肪精飼料 相等鹽水；HRS小劑量組（LR）：高脂肪精飼料 0.5g/100gbw高抗性淀粉；HRS高使用量組（HR）：高脂肪精飼料 1.5g/100gbw高抗性淀粉。金黃地鼠隨意吃料、飲用水，10h/14h白天更替飼養(yǎng)4周。

2.4盲腸內(nèi)容物搜集

在第2和第4個(gè)禮拜天忌食12h，各實(shí)驗(yàn)組各自屠宰3只和5只金黃地鼠，搜集盲腸內(nèi)容物包裝后于-80℃冷藏。

2.5血清蛋白指標(biāo)值測量和內(nèi)臟器官轉(zhuǎn)變

在第4禮拜天眼圈采血后處決，迅速脫離肝部、腎臟功能、肝臟、附睪囊腫和腎周的脂肪細(xì)胞合稱重；將血夜搜集在采血管中，于4000r/min、4℃離心式15min，血清蛋白散裝在1.5mL離心管架中，于-20℃儲(chǔ)存預(yù)留；依照血糖測定試劑盒使用說明測量甘油三脂（ＴG）、總膽固醇（ＴC）、密度高的蛋白碳水化合物（HDL-C）和高密度蛋白碳水化合物（LDL-C）的濃度值。

2.6 DNA獲取和16SrDNA遺傳基因PCR擴(kuò)增

應(yīng)用ＴIANampStoolDNAkit檢測試劑盒從金黃地鼠盲腸內(nèi)容物中獲取DNA。以盲腸內(nèi)容物中病菌基因?yàn)槟０?，?20F和802R為上中下游引物設(shè)計(jì)，增加16SrDNA的Ｖ4區(qū)。在其中，PCR反映管理體系（50μL）：10×Ｔaqbuffer5μL；dNＴP5μL；上游引物515F（20μmol/L）0.5μL；中下游引物設(shè)計(jì)806R（20μmol/L）0.5μL；Ｔaq酶0.5μL；模版1μL；ddH2O37.5μL。PCR反映標(biāo)準(zhǔn)：94℃3min；94℃45s，50℃60s，72℃90s，3五個(gè)循環(huán)系統(tǒng)；72℃10min。

2.7轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)信息的生物特征剖析

選用Illumina企業(yè)的ＴruSeqNanoDNALＴLibraryPrepKit制取轉(zhuǎn)錄組測序百度文庫，在IlluminaMiseq轉(zhuǎn)錄組測序儀上開展轉(zhuǎn)錄組測序；將轉(zhuǎn)錄組測序雜帶拼湊，依照與參考編碼序列≥97%的相似性聚類算法，創(chuàng)建OＴU，并明確種型型。運(yùn)用熱點(diǎn)圖和歸類構(gòu)成剖析（LEfSe剖析）各自科學(xué)研究金黃地鼠盲腸有益菌進(jìn)化速率和歸類構(gòu)成的轉(zhuǎn)變。

2.8數(shù)據(jù)分析

全部檢驗(yàn)一式3份，選用DPS8.0程序包開展應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)剖析。結(jié)果表明為：均值±相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。方差分析按5%顯著性檢驗(yàn)開展。