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農(nóng)藥殘留的酶活性抑制與免疫分析技術(shù)的免疫分析法(二)

來源:鄭州天順食品添加劑有限公司 發(fā)布時(shí)間:2021-09-12 10:12:23 關(guān)注: 0 次
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1、人免疫球蛋白的種類與構(gòu)造:人免疫球蛋白分子結(jié)構(gòu)由4條多肽鏈構(gòu)成,兩根挎包稱之為輕鏈(1ight chain,L),分子質(zhì)量約為25ku。兩根長(zhǎng)鏈稱之為重鏈(heavy chain,H),分子質(zhì)量為50~75 ku。輕鏈有2種:κ和λ。在同一人免疫球蛋白分子結(jié)構(gòu)中,兩根輕鏈?zhǔn)峭?isotype)的。重鏈有5種:α、γ、δ、ε和μ。依據(jù)人免疫球蛋白重鏈的品種不一樣,可將其分成5類:IgA(α鏈)、IgD(δ鏈)、IgE(ε鏈)、IgG(γ鏈)和IgM(μ鏈)。肽鏈間根據(jù)二硫鍵(disulfide b()nd)聯(lián)接,單獨(dú)Ig分子結(jié)構(gòu)呈“Y”狀構(gòu)造。

人免疫球蛋白分子結(jié)構(gòu)分成穩(wěn)定區(qū)(constant reglon,C)和可變性區(qū)(variable region,V)兩一部分。針對(duì)不一樣的人免疫球蛋白分子結(jié)構(gòu),輕鏈N端一半和重鏈N端1/4這一地區(qū)的氨基酸序列有很大的轉(zhuǎn)變,稱之為可變性區(qū);一部分氨基酸序列趨向傳統(tǒng),稱之為穩(wěn)定區(qū)。可變性區(qū)一些位置氨基酸序列轉(zhuǎn)變 特別大,故稱之為高變區(qū)(hyperlvariable regk)n,HvR)。高變區(qū)只占v區(qū)的20%~25%;其他75%~80%則比較傳統(tǒng),稱之為架構(gòu)區(qū)(fraHlework regiorl)。輕鏈(light chain,L)和重鏈(heavy chain,H)各帶有3個(gè)高變區(qū),其表層為抗原體相接處(antigen binding site)。因?yàn)楦咦儏^(qū)碳水化合物編碼序列與融合的抗原體產(chǎn)生了構(gòu)造相輔相成的三維空間構(gòu)造,因此高變區(qū)也被稱作相輔相成決策區(qū)(complementary_determining regiorL,CDR)。γ重鏈、α重鏈和δ重鏈帶有1個(gè)非球型片段,坐落于C區(qū)的第1個(gè)(CH1)和第2個(gè)(CH2)結(jié)構(gòu)域中間,氨基酸殘基數(shù)小至10個(gè)多至60個(gè)之上。該區(qū)域稱之為門鉸鏈區(qū)(hinge regiorl)。當(dāng)抗原與抗原體融合時(shí),門鉸鏈區(qū)可隨意旋轉(zhuǎn),以滿足不一樣間距的抗原決定簇??乖蓱{著門鉸鏈區(qū)的延展性與某一與眾不同抗原體的1個(gè)之上結(jié)構(gòu)域融合,與越來越多的抗原體契合點(diǎn)觸碰可提升融合的抗壓強(qiáng)度。

2、抗原的種類:按制取方式、造成方式和特性,抗原分成多克隆抗體、單抗和基因工程技術(shù)抗原。

(1)多克隆抗體:多克隆抗體(polyclonal antibody,PcAb)就是指由多枝B體細(xì)胞形成的、對(duì)于不一樣抗原決定簇的抗原的混合物質(zhì)。其制取方式是用抗原體立即免疫力兔、羊等小動(dòng)物制取抗血清,再從抗血清中分離出來抗原。多克隆抗體與抗原體的吸引力強(qiáng)、可靠性好,但抗原的均一性和非特異比不上單抗,來源于中斷,存有批間差別。

(2)單抗:?jiǎn)慰?monoclonal antibody,McAb)就是指由某一個(gè)抗原決定簇刺激性單棵B體細(xì)胞所造成的抗原。單抗是根據(jù)雜交瘤技術(shù)性(又稱之為無性繁殖體細(xì)胞技術(shù)性)制取的。單抗勻質(zhì)性好、非特異強(qiáng),可在身體之外細(xì)胞培養(yǎng)液中持續(xù)大批量塑造,無批間差別。

(3)基因工程技術(shù)抗原基因工程技術(shù)抗原(genetic engineering antibody)是根據(jù)對(duì)抗原可變性區(qū)的遺傳基因開展復(fù)制或一部分精彩片段更新改造,運(yùn)用DNA分子資產(chǎn)重組技術(shù)性,再歷經(jīng)表述而發(fā)生的具備病毒學(xué)活力的非特異活性多肽?;蚬こ碳夹g(shù)抗原技術(shù)性的進(jìn)步使人力設(shè)計(jì)方案和制取有著獨(dú)特特性、獨(dú)特作用的抗原變成很有可能。

(三)抗原和抗體反映

抗原體與抗原的非特異融合稱之為抗原和抗體反映(antigen-antibody reaction)。哺乳動(dòng)物人體具備人體免疫系統(tǒng),在遭受進(jìn)入體內(nèi)的病菌、病毒感染、體細(xì)胞、機(jī)構(gòu)、蛋白等外源化學(xué)物質(zhì)(抗原體)刺激性的情況下能產(chǎn)生防御性回復(fù)反映,造成活性的防護(hù)化學(xué)物質(zhì)(抗原)來鑒別該外源物

質(zhì)并與之緊密結(jié)合,進(jìn)而“鈍化處理”該成分以清除其影響??乖涂贵w的辨別和融合反映不但還可以在身體內(nèi)開展,還可以在身體之外適度情況下開展,合乎品質(zhì)功效基本定律。這類反映在身體內(nèi)做為血液體液免疫的效用體制當(dāng)然產(chǎn)生,在身體之外做為免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)的效果而發(fā)生。因?yàn)閭鹘y(tǒng)式病毒學(xué)技術(shù)性多以人或動(dòng)植物的血清蛋白做為抗原的來源于,因此體外實(shí)驗(yàn)中的抗原和抗體反映習(xí)慣性上稱之為血清學(xué)反映(serological reaction)??墒钱?dāng)今的抗原和抗體反映早就達(dá)到了血清學(xué)時(shí)期的定義。

1、抗原和抗體的結(jié)合性:抗原體與抗原的融合具備極度的非特異,關(guān)鍵借助抗原體與抗原融合結(jié)構(gòu)域空間布局的高精密“切合”和范德華(van der Waals)力等非共價(jià)鍵力的維持。抗原體與抗原的融合盡管是多樣性的非特異融合,但不產(chǎn)生堅(jiān)固的化學(xué)鍵(化學(xué)鍵鍵能為209.2~418.4 kJ/m01),只是以繁雜的非共價(jià)鍵融合在一起,這類較差的結(jié)合性最少包含下列4個(gè)層面。

(1)靜電引力:抗原和抗體分子結(jié)構(gòu)上含有反過來正電荷的官能團(tuán)中間能夠產(chǎn)生靜電引力,又稱之為庫侖力。比如抗原分子結(jié)構(gòu)上堿性氨基酸的分散羥基(一NH3 )和酸性氨基酸的分散羧基(-COO),可與抗原體分子結(jié)構(gòu)上帶反過來正電荷的相匹配官能團(tuán)互相吸引住。這類吸引力的尺寸與兩正電荷間間距的平方米反比,均值鍵能約為20.9 kJ/mol。

(2)范德華力:抗原和抗體互相靠近時(shí),因?yàn)榉肿咏Y(jié)構(gòu)或分子的一瞬間偶極功效而發(fā)生的吸引力稱之為范德華力,它可使相應(yīng)的抗原體與抗原互相吸引住。范德華力的組成與測(cè)算較為復(fù)雜,大概與2個(gè)相互影響官能團(tuán)的電極化水平的相乘正相關(guān),與他們相互間間距的7三次方反比,鍵能為4.2~12.5 kJ/mol。

(3)親水性相互作用力:2個(gè)親水性官能團(tuán)在溶液中互相觸碰時(shí),因?yàn)閷?duì)水分抵觸而趨于集聚的力稱之為親水性相互作用力,亦稱之為疏水鍵??乖涂贵w反映時(shí)可給予疏水性官能團(tuán)的氨基酸殘基有亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸等??乖w與抗原因?yàn)橛H水性功效而凝結(jié)成一氧化氮合酶,那樣就使其與水了解的面積變小,吸水性減少。

(4)共價(jià)鍵:供氫體上的氫原子與受氫體原子間的吸引力組成共價(jià)鍵。供氫體和受氫體的分子全是電負(fù)性較強(qiáng)的分子。在抗原和抗體反映中,羧基、羥基和甲基是關(guān)鍵供氫體,而羧基氧、羧基碳、肽鍵氧等分子是關(guān)鍵受氫體。共價(jià)鍵具備專一性,因而比范德華力更具備非特異。共價(jià)鍵結(jié)合性與供氫體和受氫體中間間距的6三次方反比,鍵能約為20.9 kJ/mol。

參考文獻(xiàn):農(nóng)殘剖析,

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