5、響應(yīng)面BOX-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在單要素試驗(yàn)效果的根基上，對(duì)發(fā)醇培養(yǎng)液構(gòu)成開(kāi)展響應(yīng)面提升。選擇變量要素為A-魔芋精粉、B-酵母菌浸粉、C-Mn2² ，響應(yīng)值(R1)為酶活。應(yīng)用手機(jī)軟件Design-Expert10.0.7對(duì)以上要素開(kāi)展回應(yīng)斜面多元回歸分析，對(duì)發(fā)醇培養(yǎng)液的構(gòu)成開(kāi)展提升。BOX-Behnken實(shí)驗(yàn)要素水準(zhǔn)表如表1:

二、結(jié)果與剖析

1、菌種的剝離與挑選

將聚集細(xì)胞培養(yǎng)液的封閉液施膠于挑選培養(yǎng)液，產(chǎn)甘露聚糖酶的菌種會(huì)在培養(yǎng)液上生長(zhǎng)發(fā)育，為此來(lái)挑選菌種。選擇漲勢(shì)較好且菌體直徑大的10株單菌體進(jìn)到復(fù)篩，并定名為NSG-1、NSG-2、….NSG-10。

將挑選獲得的10株菌開(kāi)展搖瓶發(fā)醇，用DNS測(cè)定方法粗酶液酶魅力。結(jié)果如圖所示1所顯示，NSG-6在經(jīng)耐堿性試驗(yàn)后酶魅力為1.78U/mL相對(duì)性最大，其一切正常酶魅力為2.05U/mL，故將其做為供試菌種。

2、菌種評(píng)定

PCR物質(zhì)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果即Marker構(gòu)成見(jiàn)圖2。Marker中3000bp、1000bp和500bp雜帶濃度值為60ng/3μL表明為增亮帶，其他雜帶濃度值均為30ng/3μL，電泳原理方位從上到下。從電泳原理結(jié)果得知:PCR擴(kuò)增物質(zhì)雜帶清楚、沒(méi)有托尾狀況，且相對(duì)分子質(zhì)量在1400bp上下與16SrDNA片段相符合，可開(kāi)展事后試驗(yàn)。

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果如圖所示3所顯示，NSG-6的16SrDNA序列共1473bp。將該編碼序列上傳至NCBI開(kāi)展BLAST，隨后用手機(jī)軟件MEGAX對(duì)16SrDNA序列開(kāi)展開(kāi)放閱讀框核對(duì)，一部分結(jié)果見(jiàn)表2。選用相鄰聯(lián)接法搭建NSG-6與相關(guān)病菌16SrDNA的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(類(lèi)似的反復(fù)測(cè)算1000次)，結(jié)果見(jiàn)圖4。由開(kāi)放閱讀框核對(duì)結(jié)果和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)得知，NSG-6與EnterobacterludwigiiEN-119(NR042349.1)相似度做到100%，分辨其為路德維希腸桿菌。

3、響應(yīng)面Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)提升結(jié)果

（1）響應(yīng)面設(shè)計(jì)方案結(jié)果

單要素試驗(yàn)結(jié)果如下所示，培養(yǎng)液構(gòu)成:魔芋精粉2.5%、酵母菌浸粉2.5%、MnSO₄0.5%；發(fā)醇標(biāo)準(zhǔn):當(dāng)然pH、接種量2.00%、發(fā)酵溫度35℃、搖床轉(zhuǎn)速比230r/min。

應(yīng)用手機(jī)軟件Design-Expert10.0.7對(duì)培養(yǎng)液構(gòu)成開(kāi)展響應(yīng)面設(shè)計(jì)方案，結(jié)果見(jiàn)表3。再對(duì)其信息開(kāi)展多元線性回歸線性擬合，得到多元化回歸分析實(shí)體模型:

R1=4.85 0.84A 0.20B-0.26C 0.11AB-0.25AC 0.27BC 0.35A₂-0.24B₂-0.63C₂R₂=0.9958

在其中R1是預(yù)估的甘露聚糖酶的酶活，A是魔芋精粉加入量，B是酵母菌浸粉加上量，C是硫酸錳加上量。