2.5 病菌素粗提

硫酸銨獲取獲得的病菌素粗提物對蠟樣枯草芽孢菌有顯著的抗菌實際效果。用PBS和0.2mol/LNaCl水溶液過柱經(jīng)硫酸銨獲得的病菌素粗提物并各自搜集其過柱液隨后干凍。經(jīng)抗菌實驗發(fā)覺歷經(jīng)PBS和0.2mol/LNaCl過柱的成分能夠比較好地抑止蠟樣枯草芽孢菌（圖3）。

2.6 三羥甲基甘氨酸-SDS-PAGE電泳原理結果

圖4是產(chǎn)病菌素枯草芽孢菌的Ｔricine-SDSPAGE電泳原理結果。因為Ｔricine-SDS-PAGE電泳原理能夠比較好地分離出來＜30ku的蛋白質，因而采用3.3～20.1ku的規(guī)范蛋白質做對比。與Marker雜帶比照得知菌種O在14.4ku上下時有一條比較突出的雜帶。菌種19在8ku和18ku上有突出的蛋白質雜帶。菌種F則在8ku處、14.4ku上下均發(fā)生顯著的雜帶。菌種4-1在14.4ku上下時有一條蛋白質雜帶。4株枯草芽孢菌的Ｔricine-SDS-PAGE電泳原理結果能夠分析判斷出其所產(chǎn)病菌素的分子質量均低于20ku。該結論也說明這種菌種生產(chǎn)病菌素很有可能為耐熱性不錯的II類小分子水蛋白質。

2.7 LC-MS/MS評定結果

表4為產(chǎn)病菌素枯草芽孢菌的LC-MS/MS評定結果。融合Ｔricine-SDS-PAGE電泳原理實驗最后能夠分析判斷菌種O生產(chǎn)病菌素很有可能為13ku尺寸的帶有DUF1093結構域的蛋白、13.506ku尺寸的YlbF大家族管控蛋白質及18.877ku的1型谷氨酰胺轉移酶；菌種19造成的病菌素很有可能為8.969ku的假定蛋白質CXF51_07005、16.871ku尺寸的SPBc2原噬菌體衍化的蛋白YolA及其18.001ku尺寸的假定蛋白質BESＴ7613_2224；菌種F生產(chǎn)病菌素很有可能為分子質量尺寸為8.089ku的假定蛋白質C1Ｔ28_21195、13.011ku尺寸的溶解酶（加氧酶）、15.786ku尺寸的holin大家族蛋白及其分子質量為17.082ku的SMI1/KNR4大家族蛋白質；菌種4-1造成的病菌素很有可能相匹配為9.439ku的小分子質量的酸可溶胞子蛋白質Ｔlp或者分子質量為22.529ku的3-己酮糖-6-硫酸銨合酶?，F(xiàn)階段的結論與蛋白質數(shù)據(jù)庫查詢內已編碼的蛋白質較為，沒有完全一致的蛋白質相符合，說明本分析中看到的病菌素不清除為新式病菌素的很有可能。病菌素進一步提純，碳水化合物序列比對和產(chǎn)病菌素的病菌全基因組序列開展轉錄組測序剖析，進而精確分辨這4株枯草芽孢菌生產(chǎn)病菌素是不是為新式病菌素。

3 結果

本分析從福建省杜蠣中分離出來挑選出14株對普遍病原菌有抗菌活力的枯草芽孢菌菌種，根據(jù)抗菌實驗發(fā)覺這種枯草芽孢菌對橙黃色鏈球菌、蠟樣枯草芽孢菌、乳酸菌等革蘭氏陽性菌及弗氏檸檬酸鈉鏈球菌、副血溶弧菌、大腸埃希菌、腸胃沙門菌、志賀氏菌等革蘭氏陽性菌陰性菌均有一定的殺菌作用。與此同時，這種枯草芽孢菌產(chǎn)的病菌素具備耐熱性強、易被胰蛋白酶溶解和由核糖體編號生成造成病菌素等典型性病菌素特點。依據(jù)14株菌的抗菌譜范疇和rep-PCR結果，分析判斷4種菌種很有可能有別于其他枯草芽孢菌。因而，選擇這4株菌O（解木薯淀粉枯草芽孢菌），4-1（死谷枯草芽孢菌），19和F（枯草枯草芽孢菌）開展下一步實驗。根據(jù)Ｔricine-SDSPAGE電泳原理實驗，這4株枯草芽孢菌產(chǎn)的病菌素分子質量均不超20ku。表明以上4株病菌很有可能產(chǎn)II類乳酸菌飲料病菌素。運用LC-MS/MS評定并核對目前蛋白數(shù)據(jù)庫查詢，數(shù)據(jù)顯示這4株枯草芽孢菌生產(chǎn)病菌素未在目前數(shù)據(jù)庫查詢中發(fā)覺，病菌素進一步提純，碳水化合物序列比對和產(chǎn)病菌素的病菌全基因組序列開展轉錄組測序剖析仍需在未來實驗中開展，進而精確明確這4株枯草芽孢菌的病菌素特性。