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甘藍型油菜乙酰轉(zhuǎn)移酶基因的克隆及功能驗證(二)

來源:鄭州天順食品添加劑有限公司 發(fā)布時間:2021-09-17 15:01:31 關(guān)注: 0 次
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2.2.2 蛋白二級結(jié)構(gòu)預測分析與剖析

根據(jù)線上PredictProtein軟件對AT遺傳基因不一樣復制編號的蛋白開展亞細胞定位發(fā)覺2個蛋白質(zhì)均精準定位在細胞核;TMHMM跨膜螺旋式區(qū)分析表明,2個蛋白質(zhì)均為膜外蛋白質(zhì),無跨膜結(jié)構(gòu)工程。SOPMA構(gòu)造預測分析說明,AT蛋白質(zhì)中,無規(guī)律打卷占有率最大,均在43%上下,次之為x-螺旋式,約占35%,拓寬鏈約占18%,β-拐角約占4%,兩蛋白質(zhì)有一定差別(表4)。

2.2.3 蛋白三級構(gòu)造預測分析與剖析

經(jīng)SWISS-MODEL同宗模型發(fā)覺,114、148均融入酰谷丙轉(zhuǎn)氨酶實體模型,但其構(gòu)像略不一樣(圖1,2)。

2.3 過表達與RNAi影響資產(chǎn)重組質(zhì)粒圖譜

AT遺傳基因的2個復制114與148過表達重組質(zhì)粒見圖3-A。AT遺傳基因的2個復制114與148RNAi重組質(zhì)粒見圖3-B。

2.4 轉(zhuǎn)基因水稻擬南芥檢驗

經(jīng)潮霉素挑選T0轉(zhuǎn)基因水稻擬南芥種籽后(圖4),對T1開展pCambia1300-35s-114、pCambia1300-RNAi-114、pCambia1300-35s-148及pCambia1300-RNAi-148媒介潮霉素評定,結(jié)果顯示(圖5),目地質(zhì)粒T-DNA均已插進擬南芥基因,說明擬南芥轉(zhuǎn)基因水稻取得成功。

由表5得知,與野生型擬南芥種籽油酸各成份對比,影響114遺傳基因(114R)表述會造成 聚醚和脂肪酸成分極明顯的提升,提升力度分別為10.25%,38.33%,而軟脂酸和a亞麻酸是極明顯的降低,降低力度分別為10.57%,17.90%,明顯降低脂肪酸的成分,花生仁烯酸的成分也是有降低,可是差別不明顯;過表達114遺傳基因(35s-114)會造成 軟脂酸、脂肪酸和脂肪酸成分的明顯提升,提升力度各自做到15.52%,37.88%,12.33%,而聚醚、a亞麻酸和花生仁烯酸含萬方數(shù)據(jù)量做到極明顯的降低,力度分別為50.22%,10.86%,29.93%。

在對飽和脂肪與不飽和脂肪剖析中,影響114遺傳基因會使飽和脂肪成分降低,對不飽和脂肪無明顯危害;過表達114遺傳基因會提升不飽和脂肪油酸的成分,而對飽和脂肪無明顯危害。

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