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酶底物法快速測定地表水中糞大腸菌群實驗研究

來源:鄭州天順食品添加劑有限公司 發(fā)布時間:2021-09-17 16:30:43 關(guān)注: 0 次
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沙門氏菌群是總大腸桿菌中的一部分。 關(guān)鍵來源于排泄物遙在 44.5益溫度下會生長發(fā)育并發(fā)醇乳清蛋白產(chǎn)酸脹氣的大腸桿菌稱之為糞大腸菌群。用提升塑造溫度的辦法將地理環(huán)境中的大腸桿菌與排泄物中的大腸桿菌區(qū)別開, 使培育出的菌具體為來源于排泄物中的大腸桿菌, 進而更確切地體現(xiàn)出水體受排泄物嚴重污染的狀況 目前袁糞大腸菌群檢驗最常見的辦法是多管發(fā)酵和濾膜法。 可是這2種方式測量的時間段都較長袁最少必須 48 h,流程繁雜必須 認證實驗,與此同時無菌操作原則對試驗室硬件設施的規(guī)定 十分高。 而固定不動底物酶底物分析法 1 個試品在試驗室內(nèi)實際操作的時間僅必須 1 min塑造時間也減少為 24 h在一般試驗室內(nèi)就能開展, 酶底物法可抑 制 200 萬只異常病菌精準檢驗到每 100 mL 試品中的 1 個糞大腸菌群。

1 試驗一部分

1.1 儀器設備與實驗試劑

關(guān)鍵儀器設備與實驗試劑詳細表 1。

1.2 實驗原理

在塑造溫度為 44.5依1益標準下袁糞大腸菌群細 菌 能 特 異 性 產(chǎn) 生 茁 一 半 乳 糖 苷 ,該生物菌能夠溶解色原底物釋放出來色 衣原體陽性使細胞培養(yǎng)液呈淡黃色袁 使細胞培養(yǎng)液呈淡黃色轉(zhuǎn)變的原 理來測量水里糞大腸菌群。

1.3 實驗步驟

1 選用 100mL 無菌檢測取樣瓶取 100mL 攪拌水 樣 (假如水質(zhì)采樣糞大腸菌群數(shù)超過2005 個/L則酌情考慮少 取并且用新配制的超純水系統(tǒng)稀釋液至 100mL 標尺線)。 

2 在配有水質(zhì)采樣的取樣瓶中添加科即得 TM(Colilert余)實驗試劑袁充足混勻袁使實驗試劑徹底融解。 

3 把融解徹底水質(zhì)采樣倒進無菌檢測塑造定量分析盤(97孔)。

4 選用帶 97 孔定量分析盤硫化橡膠托墊在全自動封口機上 開展封裝。

5 把封裝好的 97 孔定量分析盤裝人 44.5 1oC 恒 溫恒溫箱中塑造 24h。

6 塑造 24h 后從恒溫箱中取下與 97 孔呈陽性規(guī)范色度盤開展較為淡黃色孔色調(diào)比 97 孔呈陽性 規(guī)范色度盤深的說明為陽性反應依據(jù) 97 孔定量分析盤里的呈陽性孔眼 對比 IDEXX 企業(yè)供應的 MPN表報出結(jié)果。

1.3 試品來源于

水質(zhì)采樣來自慶陽市蒲河地下水及巴家咀地面生活用水源水體袁 依照 葉地下水和污水監(jiān)測技術(shù)性規(guī) HJ/T91-2002的要求收集并于 0耀4益超低溫避 光儲存6h 內(nèi)開展材料分析測試。

 2 結(jié)果與探討

2.1 實驗結(jié)果
此次試驗各取慶陽市蒲河地下水和巴家咀飲 用水資源水 30 份試品各自用酶底物法和多管發(fā)醇 法開展檢測數(shù)據(jù)分析袁結(jié)果見表 2。

2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

應用手機軟件 Excel2007, 對 2 種方式檢測的糞大腸菌群結(jié)果開展匹配 t 檢測袁為了更好地使 2 組數(shù)據(jù)信息呈正 態(tài)遍布 現(xiàn)對信息開展多數(shù)解決后再開展 t 檢測結(jié)果見表 3。

由表 3 由此可見泊松相關(guān)系數(shù)r為 0.98堯0.994屬 強有關(guān)淵指數(shù)越趨向 1袁關(guān)聯(lián)性直越好袁表明2組 數(shù)據(jù)信息的關(guān)聯(lián)性非常好曰 P=0.426 和 0.725袁躍0.05袁表明 2組數(shù)據(jù)信息無統(tǒng)計學意義上的顯著性差異可覺得多管發(fā)酵與酶底物法試驗結(jié)論具備對比性與 有關(guān)參考文獻相符合具備不錯的一致性。

2.3 探討

1 酶底物法與多管發(fā)酵各自測量以慶陽 市地區(qū)的蒲河為象征的水質(zhì)采樣中的糞大腸菌群兩 者沒有統(tǒng)計學意義上的差別遙 原文中的解析結(jié)論與 有關(guān)文獻的結(jié)果有不錯的一致性 。

2 酶底物測定方法地下水中的糞大腸菌群袁操 作簡單檢測的及時性好于傳統(tǒng)式的統(tǒng)計分析方法袁檢測周期時間短早期準備工作少袁對試驗標準和工作人員規(guī)定 低袁可以更快的檢測水體微生物菌種環(huán)境污染程序流程袁達到環(huán)保監(jiān)測技術(shù)標準。

3 酶底物法在國外堯歐洲地區(qū)及一部分東南亞國家被普遍使用于水里堯 糞大腸菌群及腸子埃希氏菌的檢驗并根據(jù)英國 EPA 驗證遙 我國也納入了葉日常生活 飲 用 水 標 準 檢 驗 方 法 微 生 物 指 標 曳 (GB 轅 T 5750援12要2006)袁能夠測量生活用水中總大腸桿菌和腸子埃希氏菌 廣東質(zhì)量監(jiān)督局于 2013 年準許公布了行業(yè)標準葉水里菌落總數(shù) 復合型 酶底物檢驗方式曳(DB44 轅 T 1163要2013)遙 酶底物法在我國正逐漸逐漸營銷推廣 可是鑒于該辦法的費用較高袁現(xiàn)階段都還沒被普遍應用 假如未來實驗試劑堯耗 材價錢能有些降低 水質(zhì)采樣的測量范疇能進一步提 高一定會獲得更快的營銷推廣。 

3 結(jié)果

固定不動底物酶底物測定方法水質(zhì)采樣中的糞大腸菌群具備較高的準確度和精確性袁與多管發(fā)酵進 行較為在統(tǒng)計學意義上無顯著性差異 能達到環(huán) 境監(jiān)測系統(tǒng)規(guī)定遙 該辦法使用簡單堯便捷袁工作中效 率獲得了明顯增強袁合適大批量剖析水體類試品建 議國家相關(guān)單位頒布水里糞大腸菌群酶底物統(tǒng)計分析方法。

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