食用添加劑是當(dāng)今食品產(chǎn)業(yè)中不可以缺失的一部分，人造黑色素、甜味素和添加劑做為主要的食用添加劑被普遍使用于食品生產(chǎn)生產(chǎn)加工?？墒牵殡S著其在食品企業(yè)的普遍應(yīng)用，違反規(guī)定及超限定應(yīng)用事情經(jīng)常發(fā)生，所產(chǎn)生的食品質(zhì)量安全難題也日益突顯，安全管理難題已被納入食品衛(wèi)生安全整治工作中的關(guān)鍵內(nèi)容。伴隨著我們生活水平的提升及對身心健康的關(guān)心，紅酒漸漸地替代了酒精含量較高的純糧酒，變成 了許多 酒宴和聚會的“新歡”，消耗量展現(xiàn)日益增加的發(fā)展趨勢，但紅酒銷售市場仍有很多違反規(guī)定應(yīng)用添加物或是添加物超標(biāo)準(zhǔn)的狀況，乃至有非法商人運(yùn)用香料、黑色素、乙醇、甜味素等添加物開展勾調(diào)，生產(chǎn)制造假冒偽劣產(chǎn)品紅酒商品，攪亂紅酒銷售市場，傷害顧客身心健康。

近些年，國家相關(guān)機(jī)構(gòu)在對全國各地紅酒的抽樣檢驗(yàn)流程中發(fā)覺，亂用添加物狀況經(jīng)常發(fā)生，因而紅酒中違反規(guī)定運(yùn)用的防腐劑也變成我國食品衛(wèi)生安全監(jiān)管抽樣檢驗(yàn)的重點(diǎn)項(xiàng)目建設(shè)。伴隨著在我國食品類安全管理水準(zhǔn)的提高，為提升工作效能，便捷監(jiān)督機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)商對紅葡萄酒中添加劑、甜味素和色素沉著的日常檢測，開發(fā)設(shè)計(jì)敏感度高、適用范圍廣的高通量測序檢驗(yàn)方式以合理地解決添加物在紅酒中的亂用，及其面對突發(fā)性食品類安全事故具備關(guān)鍵的實(shí)際意義。

為確保食品衛(wèi)生安全，必須 對紅葡萄酒中食用添加劑的成分開展檢驗(yàn)?，F(xiàn)階段，國家標(biāo)準(zhǔn)有對于紅酒中添加劑、黑色素和甜味素等的檢查方式 ，但這種規(guī)范大多數(shù)對于單一或某幾類食用添加劑，且試品的前處理方式不盡相同，針對紅酒中多種多樣添加物則必須逐一測量，程序流程復(fù)雜，現(xiàn)場采樣長，高效率很低，在實(shí)現(xiàn)大批量試品檢驗(yàn)時，必須大批量的財(cái)力物力。

近些年，世界各國有關(guān)紅酒中添加劑、甜味素和黑色素檢驗(yàn)辦法的文獻(xiàn)資料報(bào)導(dǎo)許多 ，關(guān)鍵選用離子色譜法、氣相色譜分析、高效率液相色譜儀、高效率液相色譜儀質(zhì)譜等，盡管有關(guān)檢驗(yàn)辦法的消息許多 ，在檢驗(yàn)敏感度和精確度層面均逐步提高，但經(jīng)文獻(xiàn)資料，大多數(shù)只對于某一類添加物開展檢驗(yàn)，不利對紅葡萄酒中多種類型添加物的規(guī)模性篩選。此外，包含在我國國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)以內(nèi)，現(xiàn)階段較為常見的研究方法為液相色譜儀法，該方式無法給予總體目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息內(nèi)容，抗干擾性相對來說較差，在具體試品剖析時很容易遭受栽培基質(zhì)影響而造成陽性狀況。

液相色譜儀與質(zhì)譜分析液質(zhì)質(zhì)技術(shù)性可以在一定水平上減少栽培基質(zhì)影響，針對必須高靈敏、寬應(yīng)用領(lǐng)域的檢驗(yàn)工作中來講，已變成最合適的技術(shù)手段之一，慢慢運(yùn)用于添加物的檢驗(yàn)。本試驗(yàn)選用高效率液相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)性，運(yùn)用高效率液相色譜儀的強(qiáng)分離出來工作能力和質(zhì)譜分析精確判定、高可選擇性和高靈敏的特性，在較短的時間內(nèi)就可以進(jìn)行多組分的分離出來評定，創(chuàng)建了一種可一起測量并可以精確判定定量分析紅酒中添加劑、甜味素和色素沉著的方式 。

一、原材料與方式

1、原材料、實(shí)驗(yàn)試劑與儀器設(shè)備

紅酒樣：購自零售商場和店鋪。

實(shí)驗(yàn)儀器：LCMS-8050高效率液相色譜儀-串連質(zhì)譜儀器（日本Shimadzu企業(yè)，實(shí)際配備為LC20ADXR×2輸液泵，DGU-20A3R線上脫氣輪，SIL20AXR自動進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)軟件控制板，LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀器，LabSolutionsVer.5.91色譜工作平臺）；Milli-QReference超純水器（英國Millipore公司）；超聲波清洗器（KQ-500DE，昆山市超聲波儀器設(shè)備有限責(zé)任公司）；AcquityUPLCHSST₃柱（100mm×2.1mm,1.8µm，英國Waters企業(yè)）；0.22μm尼龍濾膜（上海安譜儀器設(shè)備有限責(zé)任公司）。

實(shí)驗(yàn)試劑：工業(yè)甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨（HPLC級，Dikma企業(yè)）；甜蜜素（Sodiumcycamate）、安賽蜜（Acesulfame-K）、糖精鈉（Saccharinsodium）、阿斯巴甜（Aspartame）、三氯蔗糖（Sucralose）、甜菊糖苷（Stevioside）、紐甜（Neotame）、阿力甜（Alitame）；誘惑紅（Allurared）、赤蘚紅（Erythrosine）、莧菜紅（Amaranth）、檸檬黃（Carmine）、焦糖色（Tartrazine）、日落黃（Sunsetyellow）、亮藍(lán)（Brilliantblue）；脫氫乙酸（Dehydroaceticacid），英國Sigma-Aldrich企業(yè)，澳大利亞TRC企業(yè)和法國Dr.EhrenstorferGmbH企業(yè)，純凈度≥95%。

2、實(shí)驗(yàn)方法

（1）規(guī)范溶液的配制
各自精確稱量16種添加物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10mL深棕色容量瓶中，自來水或工業(yè)甲醇融解并滴定劑，配置成濃度值為1mg/mL的單標(biāo)貯備液，于-18℃下遮光儲存。用工業(yè)甲醇稀釋液并配置正中間濃度值的規(guī)范切削液，于4℃遮光儲存。依據(jù)須要用流動性相逐步稀釋液，配置成合理含量的混和規(guī)范切削液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（2）試品前解決方式

取紅酒試品2.0mL于10mL容量瓶中，用超純水系統(tǒng)滴定劑，超聲波攪拌，過0.22μm濾紙，滲瀝液供測量。

（3）色譜儀標(biāo)準(zhǔn)

離子交換柱：AcquityUPLCHSST3柱（100mm×2.1mm,1.8µm，英國Waters企業(yè)）。流動性相：（A）工業(yè)甲醇和（B）10mmol/L乙酸銨溶液，流動速度0.35mL/min；梯度方向過柱程序流程為：0min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)為10%；0～3min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從10%升到90%，并維持2.5min，5.5～5.51min；工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從90%降到10%；5.51min～6.5min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)維持10%。柱溫為35℃；氣相容積：2μL。

（4）質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)

分析儀：LCMS-8050；離子源：電噴霧器離子源（ESI）；掃描儀方法：正空氣負(fù)離子與此同時掃描儀；離子源插口工作電壓：0.5kV；做霧化氣：N23.0L/min；干躁氣：N210L/min；撞擊氣：氬氣；DL溫度：250℃；加熱器溫度：400℃；逐行掃描：多反映檢測(MRM)；停留時間：15ms；時間延遲：3ms；16種添加物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)MRM主要參數(shù)見表1。

二、結(jié)果與探討

1、試品前解決標(biāo)準(zhǔn)的提升

與別的剖析方式不一樣，質(zhì)譜分析通常具有一定的基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)應(yīng)用ESI源時，在離子化全過程中栽培基質(zhì)成分與總體目標(biāo)物市場競爭，更易發(fā)生栽培基質(zhì)抑制效應(yīng)。降低基質(zhì)效應(yīng)的辦法一般有稀釋液試品水溶液、提升凈化處理流程、配置栽培基質(zhì)配對標(biāo)液等。本探討選用立即氣相方法做好剖析，以防止傳統(tǒng)式的液液萃取、固相萃取方式利用率低、可重復(fù)性差，且會采用大量的溶液的缺點(diǎn)，但充分考慮紅酒中帶有一定占比酒精和糖原，為降低基質(zhì)效應(yīng)對測量的危害，需對試品開展稀釋液解決。稀釋液的辦法能夠減少酒精對色譜儀峰形危害，變?nèi)趸|(zhì)效應(yīng)，可是會減少方式的方法檢出限。歷經(jīng)對流行知名品牌的紅酒各自稀釋液2～15倍開展檢驗(yàn)，不一樣稀釋倍數(shù)試品檢測比照，最后明確稀釋倍數(shù)為5倍。