（2）幾何圖形同分異構(gòu)體的評(píng)定

在理論上，β-胡羅卜素幾何圖形同分異構(gòu)體的評(píng)定還可以在其雙重磁共振譜(NMR)上完成。但現(xiàn)階段沒(méi)有參考文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。

β-胡羅卜素同分異構(gòu)體的電子器件光譜圖特不一樣。順式同分異構(gòu)體的主消化吸收峰與反式同分異構(gòu)體的主消化吸收峰對(duì)比，其電子器件光譜圖產(chǎn)生“紫移”。與此同時(shí)，順式同分異構(gòu)體在342～348nm處會(huì)發(fā)生一個(gè)特點(diǎn)消化吸收峰。這種光譜儀特點(diǎn)可做為分辨β-胡羅卜素同分異構(gòu)體的重要環(huán)節(jié)。

如上所述，因?yàn)榉肿咏Y(jié)構(gòu)在一個(gè)烴基處發(fā)生了順式對(duì)映異構(gòu)，在β-胡羅卜素的電子器件光譜圖上342～348nm處會(huì)發(fā)生一個(gè)峰(消化吸收段)。這一峰被稱作“順式峰”(cis-peak)。分子結(jié)構(gòu)中產(chǎn)生順式對(duì)映異構(gòu)的部位被稱作“cis-band”。與此同時(shí)，與全反式同分異構(gòu)體較為，順式同分異構(gòu)體主消化吸收峰的最高消化吸收光波長(zhǎng)(λmax)也會(huì)出現(xiàn)輕微的“紫移”。圖3中的I、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ號(hào)峰的電子器件光譜圖圖在λmax=342～347nm上下與全反式同分異構(gòu)體的光譜儀較為能夠見(jiàn)到有顯著的峰存有，詳細(xì)圖2；圖3為順式峰的絕對(duì)高度；與此同時(shí)，與Ⅳ號(hào)峰的光譜儀較為，I、Ⅱ、Ⅲ號(hào)峰光譜儀主消化吸收峰和順式消化吸收峰的λmax；各自發(fā)生了5～6nm和1～4nm的“紫移”，見(jiàn)圖4。這種光譜儀特點(diǎn)的轉(zhuǎn)變帶來(lái)了將I、Ⅱ、Ⅲ號(hào)峰評(píng)定為β-胡蘿l、素順式同分異構(gòu)體的直接證據(jù)。

（3）幾何圖形同分異構(gòu)體的定量分析測(cè)量

在C30-HPLC上，β-胡羅卜素的幾何圖形同分異構(gòu)體能夠得到較好的分離出來(lái)。因?yàn)閷?duì)照品試品的貧乏，β-胡羅卜素順式同分異構(gòu)體的定量分析需根據(jù)其電子器件光譜圖范疇內(nèi)的吸光度指數(shù)。揮發(fā)光透射探測(cè)器(ELSD)的運(yùn)用能夠完成這一目地。在ELSD上搜集β-胡羅卜素全反式同分異構(gòu)體數(shù)據(jù)信號(hào)的情況已由惠伯棣等創(chuàng)建進(jìn)行。應(yīng)用LC-PDA-ELSD串連系統(tǒng)軟件，同歩搜集每一個(gè)β-胡羅卜素幾何圖形同分異構(gòu)體成分的電子器件光譜圖和品質(zhì)數(shù)據(jù)信號(hào)，由二者峰總面積之比測(cè)算每一個(gè)成分的吸光度指數(shù)，最后達(dá)到在C30-HPLC-PDA系統(tǒng)軟件上β-胡羅卜素各幾何圖形同分異構(gòu)體的定量分析檢驗(yàn)。最后依據(jù)其色譜儀峰總面積，能夠精準(zhǔn)精確測(cè)量出β-胡羅卜素幾何圖形同分異構(gòu)體的構(gòu)成。

一般狀況下，用以定性分析的吸光度指數(shù)指的是在該有機(jī)化合物在λmax處的吸光度指數(shù)。β-胡羅卜素全反式同分異構(gòu)體于450nm處的吸光度指數(shù)已被報(bào)導(dǎo)，如A^1%_1cm。一般在2500上下。

不容置疑，在PDA探測(cè)器上，一種β-胡羅卜素順式同分異構(gòu)體的量與其說(shuō)在檢驗(yàn)光波長(zhǎng)處的色譜儀峰總面積呈正線性相關(guān)關(guān)聯(lián)，合乎朗伯-梅爾斯基本定律。假如在ELSD探測(cè)器上，這類順式同分異構(gòu)體的量與其說(shuō)峰總面積間亦存有正線性相關(guān)關(guān)聯(lián)，則可重歸其在PDA和ELSD頂峰總面積中間的線性相關(guān)關(guān)聯(lián)，并估算其切線斜率。最后，按以下方式估計(jì)這類順式同分異構(gòu)體的吸光度指數(shù)。

A_Z=A_E（K_Z/K_E)

在其中：

A_Z=順式同分異構(gòu)體吸光度指數(shù)；

A_E=全反式同分異構(gòu)體吸光度指數(shù)；

K_Z=順式同分異構(gòu)體切線斜率=PDA峰總面積／ELSD峰總面積；

K_E=全反式同分異構(gòu)體切線斜率=PDA峰總面積／ELSD峰總面積；

依據(jù)朗伯-梅爾斯基本定律，按以下計(jì)算公式β-胡羅卜素同分異構(gòu)體的成分。

x=(A×y)／(A^1％_1cm×100000)

在其中：

X=試品中常含的b，β-胡羅卜素同分異構(gòu)體的量(克)；

Y=試品溶劑的容積(mL)；

A=試品中各成分的峰總面積(毫伏·秒)，A^1％_1cm=吸光度指數(shù)，為在1公分光程長(zhǎng)的色度杯里1％(w／v)濃度值物質(zhì)的量濃度的基礎(chǔ)理論消化吸收值，測(cè)算β-胡羅卜素全反式同分異構(gòu)體成分時(shí)選用數(shù)值ε=2500(450nm)。