目地

創(chuàng)建鎧甲草中黃酮類物質(zhì)和齊墩果酸的含水量測定法。

方式

選用HPC測定方法鎧甲草中齊墩果酸的成分。WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm），流動性相為工業(yè)甲醇-PBS（85∶15），流動速度1.0mL/min，柱溫35℃，氣相量為10μL，檢驗光波長210nm，測量齊墩果酸的成分。結(jié)果：齊墩果酸在5～50μg/mL的濃度值范內(nèi)呈優(yōu)良線性相關(guān)（Y=4533X 909.6，R=0.9996），均值利用率為99.39%，RSD為1.53%（n=6）。

結(jié)果

本實驗方法精確靈巧、平穩(wěn)靠譜，可用以鎧甲草中齊墩果酸的含水量測量。

鎧甲草（CassiamimosoidesLinn.）為豆科植物（Leguminousae）決明屬一年或多年生長亞灌木狀木本植物，以狼把草當(dāng)藥，關(guān)鍵分散于廣東省、福建省、云南省、中國臺灣、貴州省和廣西省等地，其味甘、性溫，具備清熱去火、化淤化積的作用。有科研結(jié)果顯示，鎧甲草可以有效的抑止淀粉酶，避免輕度脂肪肝；其首要成分有黃酮類物質(zhì)、齊墩果酸、β-谷甾醇、木犀草素、原兒茶醛等。殊不知，現(xiàn)階段世界各國對鎧甲草的分析主要是聚集在成分和藥用價值層面，相關(guān)鎧甲草中藥材質(zhì)量管理的探究非常少，且末見對其相關(guān)成分開展成分檢測的報導(dǎo)。本試驗以鎧甲草中具備抗感染護(hù)肝的相關(guān)成分齊墩果酸，做為定量分析檢驗指標(biāo)值成份，創(chuàng)建鎧甲草中齊墩果酸的HPLC成分測定法，為鎧甲草的質(zhì)量管理和有效開發(fā)設(shè)計給予參照根據(jù)。

1儀器設(shè)備與原材料

WatersAlliance2695型高效率液相色譜；WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm）；WJX-A1000型快速多用途破碎機；JP-100S型超聲波清洗器；MING-CHE24UV超純水機。

齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品（C1723001）；鎧甲草采于廣東梅州市蕉嶺縣，經(jīng)嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)科院生藥學(xué)翟明教師評定為豆科植物決明屬綠色植物鎧甲草（Cassiamimosoides）的狼把草；別的實驗試劑均為分析純。

2方式及結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)品水溶液的制取

高精密稱量齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品1mg，放置10mL容量瓶中，加工業(yè)甲醇至標(biāo)尺，即得。

2.2供試品水溶液的制取

稱量鎧甲草細(xì)粉2g，添加2moL/L的硫酸10mL，充足浸泡后，在60℃水浴下，酸水解反應(yīng)2h，沉淀用超純水系統(tǒng)水清洗至中性化，干躁后添加10倍量的90%的乙醇溶液和0.5%NaOH水溶液，調(diào)整pH值至8，50℃超聲波30min，旋蒸后，水浴加熱濃縮成中藥浸膏。

中藥浸膏用工業(yè)甲醇超聲波融解后，離心式取上清液，滴定劑至10mL，即得。

2.3色譜儀標(biāo)準(zhǔn)

離子交換柱：WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動性相：工業(yè)甲醇：PBS=85∶15；檢驗光波長：210nm；流動速度：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL，柱溫：35℃。

2.4線性相關(guān)調(diào)查

各自高精密汲取“2.1”項下的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品0.5、1、2、3、4、5mL水溶液于10mL容量瓶中，用工業(yè)甲醇滴定劑，得濃度值為5、10、20、30、40、50μg/mL系列產(chǎn)品濃度值的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品水溶液，于“2.3”項下的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)，以齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品水溶液色譜儀峰總面積Y為縱軸，齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度值X（μg/mL）為橫坐標(biāo)軸，開展線性擬合，得齊墩果酸標(biāo)曲，求取線性回歸方程Y=4533X 909.6，R=0.9996。結(jié)果顯示，在5～50μg/mL的含量范疇內(nèi)，齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品水溶液的峰總面積與濃度值的線性相關(guān)優(yōu)良。

2.5專屬性調(diào)查

取新項目“2.1”和“2.2”項所制取的標(biāo)準(zhǔn)品水溶液和供試品水溶液，在“2.3”的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)下氣相，齊墩果酸的保存期約為13.77min，峰型平穩(wěn)，分離度優(yōu)良，有不錯的基準(zhǔn)線分離出來，末見殘渣峰影響，具備優(yōu)良的專屬性。如圖所示1所顯示。

2.6儀器設(shè)備精度實驗

高精密汲取標(biāo)準(zhǔn)品水溶液1.0mL，于“2.3”項的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)下，持續(xù)反復(fù)氣相6次，每一次10μL，檢驗獲得黃酮類物質(zhì)峰總面積的RSD為1.36%，說明儀器設(shè)備精度優(yōu)良。

2.7可靠性實驗

高精密汲取供試品水溶液1.0mL，各自于0、2、4、6、8、12h于“2.3”項色譜儀標(biāo)準(zhǔn)下氣相，檢驗獲得齊墩果酸的峰總面積的RSD為0.82%。說明供試品水溶液在12h內(nèi)平穩(wěn)。

2.8可重復(fù)性實驗

高精密稱量6份等品質(zhì)鎧甲草細(xì)粉2.00g，按“2.2”項下的方式平行面制取6份供試品水溶液，于“2.3”項的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)，檢驗獲得齊墩果酸峰總面積的RSD為1.47%。說明該方式可重復(fù)性優(yōu)良。

2.9加樣利用率實驗

高精密稱量已經(jīng)知道成分的等品質(zhì)鎧甲草細(xì)粉6份，每一份2.00g，各自高精密添加同一濃度值的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品，按以上“2.2”的獲取方式平行面制取成供樣品水溶液，于“2.3”項色譜儀標(biāo)準(zhǔn)下測量，測算獲得均值利用率結(jié)果為99.39%，RSD為1.53%。說明該方式測定的效果有優(yōu)良精確性。結(jié)果見表1。

2.10試品的含量測量

高精密稱量3份不一樣批中藥材各2.00g，依照“2.2”項的配制方式制取成供樣品水溶液，每一份試品各自在“2.3”項的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)下氣相三次，紀(jì)錄峰總面積，測算試品中齊墩果酸的成分。結(jié)果見表2。

3探討

在調(diào)查齊墩果酸的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)時，曾選用工業(yè)甲醇水，工業(yè)甲醇-0.1%苯甲酸和工業(yè)甲醇-PBS做為流動性相，調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)流動性相挑選為工業(yè)甲醇-PBS（85∶15）時，試品中齊墩果酸分離度更強，峰型平穩(wěn)，無雜峰影響。因為齊墩果酸與此同時帶有甲基和羧基官能團(tuán)，在偏堿情況下容易被獲取，在獲取標(biāo)準(zhǔn)的調(diào)查全過程中，發(fā)覺添加適量堿溶液使其pH值至8時，更有利于齊墩果酸成份的獲取。

本研究創(chuàng)建運用高效液相色譜色譜分析測量鎧甲草中齊墩果酸成分的方式 ，方式精度高、可靠性、可重復(fù)性、加樣利用率均合乎方法學(xué)認(rèn)證的規(guī)定。測出3批試品中，齊墩果酸的占比在3.67%～3.73%中間，成分較高，且齊墩果酸在臨床醫(yī)學(xué)上關(guān)鍵用以養(yǎng)肝降酶，與鎧甲草的作用相符合，表明齊墩果酸合適做為鎧甲草的質(zhì)量檢驗指標(biāo)值成份，該辦法可做為鎧甲草質(zhì)量管理的方式 ，進(jìn)而為鎧甲草產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定給予參照根據(jù)。