目地：創(chuàng)建超高效液相色譜色譜儀（UPLC）-微生物化學(xué)檢測（BCD）線上聯(lián)用技術(shù)性迅速挑選中藥材中的丁酰乙酰膽堿酯脂酶（BChE）緩聚劑的方式 。方式：應(yīng)用UPLC-DAD-BCD方式迅速挑選吳茱萸、鉤藤、玄參、山豆根（苗）提取液中的BChE緩聚劑。以蓮芯堿為陽性對照，調(diào)查UPLC-DAD-BCD方式用以BChE緩聚劑挑選的可行性分析。應(yīng)用超高效液相色譜-線形正離子阱/電場路軌阱高分辨質(zhì)譜（UHPLC-LTQ/Orbitrap MS）方式評定4種中藥材的70%工業(yè)甲醇提取液中的關(guān)鍵活力成份。結(jié)果：UPLC-DAD-BCD方式迅速挑選出12個BChE緩聚劑，在其中吳茱萸4個、鉤藤3個、玄參5個、山豆根（苗）2個，山豆根（苗）中的2個活力成份與玄參一共有，根據(jù)UHPLC-LTQ/Orbitrap MS評定出這其中的8個BChE緩聚劑，各自為去氫吳茱萸堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿、1-羥基-2–4(1H)-喹諾酮、去氫毛鉤藤堿、毛鉤藤堿、苦參堿和氧化苦參堿。結(jié)果：創(chuàng)建的UPLC-DAD-BCD線上統(tǒng)計分析方法敏感度高、再現(xiàn)性好，能迅速挑選中藥材中的BChE緩聚劑，為中藥材中澳的生物活性成份的迅速挑選給予了一種高效率、方便快捷的研究對策。

老年性癡呆病( Alzheimer’s disease，AD）是以漸行性的記憶力缺失和認(rèn)知功能障礙為臨床醫(yī)學(xué)特點(diǎn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病?，F(xiàn)階段，AD的準(zhǔn)確發(fā)病機(jī)制并未充分表明。AD 的病發(fā)與演變歷程中，膽堿能系統(tǒng)軟件損傷甚至膽堿( ACh)的降低與認(rèn)知功能降低立即有關(guān)，因而，堿性磷酸酶緩聚劑常見于AD臨床醫(yī)學(xué)病人的醫(yī)治。

現(xiàn)階段，用以醫(yī)學(xué)的堿性磷酸酶緩聚劑多見AChE緩聚劑，頸靜脈不良反應(yīng)比較大，長期性治療效果不理想化。研究表明，在人體內(nèi)中有2種膽堿核糖核苷酸，即膽堿脂酶（acetylcholinesterase，AChE）和丁酰堿性磷酸酶（butyrylcholinesterase，BChE），正常人人的大腦中具體由AChE新陳代謝膽堿，BChE的成分非常少，而AD病人腦中的狀況剛好反過來，AChE活力降低而BChE活力上升?？茖W(xué)研究表明，BChE緩聚劑不但可以提升膽堿水準(zhǔn)，改進(jìn)大白鼠記憶力，且難得少有或沒有AChE造成的頸靜脈膽堿能不良反應(yīng)。故與AChE對比，BChE可能是一個更適合的AD醫(yī)治靶標(biāo)，并在AD 中有著關(guān)鍵功效。早已發(fā)售用來醫(yī)治AD的藥品大部分全是黃酮類成份，吳茱萸、鉤藤、玄參和山豆根（苗）上都含有黃酮，可以用BChE緩聚劑的挑選。

近些年，學(xué)者專注于從天然藥物化學(xué)中找尋副作用小的堿性磷酸酶緩聚劑，已看到的一些活力成份有黃酮類、黃酮類化合物、多糖類、香豆素和萜類等，在其中以黃酮為主導(dǎo)。從綠色植物中挑選可選擇性強(qiáng)、副作用小的堿性磷酸酶緩聚劑已變成藥業(yè)行業(yè)分析的網(wǎng)絡(luò)熱點(diǎn)。為了更好地迅速挑選繁雜機(jī)質(zhì)中的活性物質(zhì)，各種各樣線上統(tǒng)計分析方法早已被創(chuàng)建并被運(yùn)用，如：HPLC-UV-DPPH用以生地黃中的抗氧劑的挑選和活力點(diǎn)評，HPLC-UV-AChE方式可快速檢測銀杏提取物于中的AChE緩聚劑，HPLC-BCD方式用以檢驗綠茶葉中的α-葡萄糖苷酶緩聚劑等。

本分析以蓮芯堿為陽性對照品，提升儀器設(shè)備聯(lián)用系統(tǒng)軟件，創(chuàng)建線上UPLC-DAD-BCD統(tǒng)計分析方法，迅速挑選中藥材中BChE緩聚劑，為中藥材中活性物質(zhì)的迅速挑選給予一種高效率、方便快捷的研究對策。

1 原材料

1.1 儀器設(shè)備

超高效率液相色譜UPLC（PDA探測器，英國Waters企業(yè)）；Ultimate 3000 UHPLC（英國Thermo Fisher企業(yè)）；Thermo Scientific LTQ-Orbitrap Elite組合型高分辨質(zhì)譜儀（英國Thermo Fisher企業(yè)）；柱后衍化儀（PCX）（英國Pickering Laboratcries企業(yè)）；Milli-Q 超純水系統(tǒng)凈化設(shè)備（英國Millipore公司）；Metter Toledo AL204電子分析天平（上海市速展計量儀器有限責(zé)任公司）；臺式一體機(jī)快速冷藏型少量離心脫水機(jī)（大龍興創(chuàng)實(shí)驗室儀器有限責(zé)任公司）；WD-94158型超聲波清洗器（昆山市美美噠超聲波儀器設(shè)備有限責(zé)任公司）。

1.2 中藥材與實(shí)驗試劑

吳茱萸（貴州省，生產(chǎn)批號1907051）、鉤藤（廣西省，生產(chǎn)批號18120081）、玄參（江蘇省，生產(chǎn)批號B2101009）和山豆根（苗）（廣西省，生產(chǎn)批號181201）中藥材中藥飲片購于湖南長沙老百姓大藥房，經(jīng)湖北藥品監(jiān)督檢測研究所丁曉萍研究者評定分成蕓香科綠色植物吳茱萸Euodia rutaecarpa (Juss.) Benth的干躁果子、茜草科綠色植物鉤藤Uncaria rhynchophylla (Miq.) Miq. ex Havil.的干躁帶鉤莖枝、豆類植物玄參Sophora flavescens Ait.的干躁根和豆類植物越南地區(qū)槐Sophora tonkinensis Gagnep.的干躁根和地下莖。

乙腈、工業(yè)甲醇為色譜純（英國，J.T.Baker）；5,5'-二硫代雙(2-氟苯苯甲醛) (DTNB) (英國Sigam，生產(chǎn)批號 SHBG2823V )、碘化硫代丁酰乙酰膽堿（BTCI）（英國Sigam企業(yè)，生產(chǎn)批號BCBT4812）；BChE（英國Sigam企業(yè)，生產(chǎn)批號SLBP0912V）；牛血清蛋白（英國Sigam企業(yè)，生產(chǎn)批號 SLBL2616V）；超純水系統(tǒng)（Milli-Q超純水系統(tǒng)提純系統(tǒng)軟件自做）；工業(yè)甲醇、三羥基羥基甲烷氣體（Tris）等實(shí)驗試劑均為分析純（國藥控股化學(xué)藥品有限責(zé)任公司）。蓮芯堿（我國食品藥品安全評定研究所，生產(chǎn)批號111696-201703）。

2 方式

2.1 試品溶劑的制取

各自高精密稱量吳茱萸、鉤藤、玄參、山豆根（苗）粉末狀4 g，于具塞錐形瓶中，高精密添加25 mL 70%工業(yè)甲醇，稱取凈重，超聲波（輸出功率350 W，頻率35 kHz）30 min，再稱取凈重，用70%工業(yè)甲醇補(bǔ)充損害的凈重，混勻過慮，取續(xù)滲瀝液，用0.22 μm微孔濾膜濾過，預(yù)留。

高精密稱量蓮芯堿高氯酸鹽，用色譜儀工業(yè)甲醇制取成含量為0.06，0.12，0.24，0.36，0.60，1.20和1.80 mg·mL-1的水溶液，立即氣相。

2.2 BChE水溶液和栽培基質(zhì)水溶液的制取

用0.1 moL·L-1 0.1%牛血清蛋白的Tris-HCl緩沖溶液（pH 8.0）制取0.3 U·mL-1的BChE水溶液；高精密稱量DTNB粉末狀適當(dāng)，用Tris-HCl緩沖溶液（0.1 moL·L-1、pH 8.0）制取成1.5×10-3 moL·L-1的水溶液；高精密稱量BTCI粉末狀適當(dāng)，用Tris-HCl緩沖溶液（0.1 moL·L-1、pH 8.0）制取成3×10-3 moL·L-1的水溶液。