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蛋清溶菌酶的提取及其酶學(xué)性質(zhì)探究(二)

來(lái)源:鄭州天順食品添加劑有限公司 發(fā)布時(shí)間:2021-09-19 14:50:11 關(guān)注: 0 次
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2.1.3 NaCl水溶液(過(guò)柱液)濃度值提升

由圖3得知,隨NaCl濃度值的上升,溶菌酶的比魅力先升高后降低,當(dāng)NaCl濃度值為1moL/L時(shí),所得的溶菌酶的比魅力最大,這時(shí)的過(guò)柱液濃度值適合獲取分離出來(lái)溶菌酶。當(dāng)NaCl濃度值高過(guò)1moL/L時(shí),酶的比魅力反倒降低,酶成分轉(zhuǎn)變卻并不大,很有可能因?yàn)槿芫冈跐舛容^高的溶液中產(chǎn)生蛋白質(zhì)變性功效造成。

2.1.4 過(guò)柱時(shí)間提升

由圖4得知,當(dāng)過(guò)柱時(shí)間為60min時(shí),所得的溶菌酶的比魅力最大,伴隨著過(guò)柱時(shí)間再次增加,酶成分提升遲緩,酶比魅力反倒降低,綜合性考慮到資金成本費(fèi),選中過(guò)柱時(shí)間為60min。

2.2 陽(yáng)離子交換標(biāo)準(zhǔn)提升

綜上所述,由單要素實(shí)驗(yàn)效果得知,陽(yáng)離子交換最佳加工工藝標(biāo)準(zhǔn)為:雞蛋清滲瀝液環(huán)氧樹脂之比10∶2.5,pH9.0,NaCl(過(guò)柱液)濃度值1mol/L,過(guò)柱時(shí)間60min。從而,進(jìn)一步做Box-Behnken實(shí)驗(yàn)提升正離子互換法標(biāo)準(zhǔn),試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如表2所顯示。

選用DesignExpert8.0.6手機(jī)軟件實(shí)現(xiàn)剖析,如表3所顯示。由表3得知,擬合模型的P=0.0014<0.05,表明實(shí)體模型與具體情況線性擬合優(yōu)良。依據(jù)上述剖析獲知溶菌酶比魅力R1對(duì)變量每100mL雞蛋清滲瀝液中環(huán)氧樹脂使用量(A)、NaCl濃度值(B)、雞蛋清滲瀝液pH值(C)、過(guò)柱時(shí)間(D)的多元線性回歸方程式為:

R1=20866.66-1432.26A 194.18B 486.75C 539.58D-961.62AB-1252.19AC-2929.88AD-21.46BC-2724.86BD 90.11CD-6079.24A2-5995.65B2-3410.58C2-3903.162。

由式子得知,溶菌酶比魅力和4個(gè)變量中間具備明顯線性相關(guān)。線性回歸方程的二次項(xiàng)系數(shù)較為大,交互項(xiàng)指數(shù)中AD、BD的互動(dòng)指數(shù)非常大,表明環(huán)氧樹脂使用量和過(guò)柱時(shí)間、NaCl濃度值和過(guò)柱時(shí)間之間的互動(dòng)效用非常大,AB、AC的互動(dòng)指數(shù)比較大,表明環(huán)氧樹脂使用量和NaCl濃度值中間、環(huán)氧樹脂使用量和pH值中間互動(dòng)效用比較大,而BC、CD的互動(dòng)指數(shù)較為小,表明NaCl濃度值和pH值中間、pH值和過(guò)柱時(shí)間之間的互動(dòng)效用小。

為了更好地檢測(cè)方程式的實(shí)效性,對(duì)測(cè)量的溶菌酶的比魅力的分析模型開(kāi)展方差分析,并對(duì)各因素的偏回歸系數(shù)開(kāi)展檢驗(yàn)。一次項(xiàng)中A的回歸系數(shù)較明顯,P=0.0806,表明雞蛋清環(huán)氧樹脂核對(duì)獲取的溶菌酶比魅力有較明顯功效。二次項(xiàng)中A、B、C、D的偏回歸系數(shù)均做到極明顯水準(zhǔn)。交互項(xiàng)AD、BD回歸系數(shù)較其他要素明顯,表明環(huán)氧樹脂使用量和過(guò)柱時(shí)間、NaCl濃度值和過(guò)柱時(shí)間之間的交互項(xiàng)對(duì)溶菌酶比魅力危害比較明顯。

為了更好地獲得最大的溶菌酶比魅力,吸咐和過(guò)柱的各標(biāo)準(zhǔn)必須適合的交叉式挑選。響應(yīng)面圖可直接體現(xiàn)各要素及配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)酶魅力的危害,故取3項(xiàng)顯著性差異較高的交互項(xiàng)制做響應(yīng)面圖,依據(jù)圖5~7的Box-Behnken提升實(shí)驗(yàn)線性擬合回應(yīng)斜面圖和方差分析獲知,對(duì)溶菌酶比魅力危害尺寸次序?yàn)锳D>BD>AC。

對(duì)二次線性回歸方程求一階偏導(dǎo),當(dāng)響應(yīng)值R1(溶菌酶比魅力)為最高值時(shí),各因素水準(zhǔn)為每100mL雞蛋清滲瀝液中,環(huán)氧樹脂使用量(A)為24.20mL、NaCl濃度值(B)為1.00mol/L、雞蛋清滲瀝液pH值(C)為9.10、過(guò)柱時(shí)間(D)為62.61min。這時(shí)基礎(chǔ)理論預(yù)測(cè)分析溶菌酶比魅力為21041.1U/mg。

對(duì)所獲取的陽(yáng)離子交換各最佳標(biāo)準(zhǔn)做平行面認(rèn)證實(shí)驗(yàn),反復(fù)5次,如表4所顯示,獲得的溶菌酶比魅力為20509.58U/mg,與標(biāo)準(zhǔn)偏差貼近。

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