6、AFB₁最佳溶解標準的明確

由表4得知，二次線性回歸方程的實體模型極明顯，且方程式的回歸系數R²為0.8992，因而方程式的擬合程度高，可以恰當體現AFB₁溶解率與孵育時間、孵育溫度和酶魅力中間的關聯(lián)，根據DesignExpertv8.0.6手機軟件剖析AFB₁較大溶解率相匹配的反映情況為孵育時間15.030h、孵育溫度33.985℃、酶魅力2.107U，估計值為91.866%，考慮到操作過程，相匹配的孵育時間15h、孵育溫度34℃、酶魅力2U，獲得的AFB₁溶解率是91.08%，說明AFB₁溶解率與估計值基本上符合，表明該實體模型能夠預測分析AFB₁較大溶解率。

7、AFB₁溶解物質的總離子流色譜儀

如圖所示7所顯示，AFB₁經漆酶溶解后檢驗到4個新的色譜儀峰，由峰形和分離度可看得出，各物質分離出來實際效果不錯，且由保存期不一樣推斷溶解物質不一樣。依據AFB₁和溶解物質的保存期分辨5種化學物質的正負極尺寸為A＞B＞C＞AFB₁＞D。

8、AFB₁溶解物質的化學式及結構特征

為進一步明確4種溶解物質的化學結構式，運用Q-TOF-MS開展剖析。在所有反映系統(tǒng)中，AFB₁只含C、H、O3元素表，酶的本質為蛋白，運用酶溶解則很有可能引進N原素。運用收集到的各溶解物質的質譜分析數據信息，預測分析各物質很有可能的元素組成和化學式，如表5所顯示。

AFB₁關鍵由4個不一樣的溶解功效結構域:1）香豆素內酯環(huán)不穩(wěn)定，在外部標準下能脫羰基）能與核苷酸、蛋白等融合的咪唑環(huán)烴基和H₂O、H等產生加成反應。3）環(huán)戊烯酮環(huán)根據加成反應、取代反應危害AFB1的毒副作用。4）苯環(huán)上的-0CH₃能夠與-OH、H、-CHO產生取代反應。與此同時，AFB₁的一部分溶解物質中間還可以互相轉換。如圖所示8A所顯示，溶解物質A在撞擊中造成[M H] 為m/z279.0932的磷酸激酶正離子，依據高分辨質譜結果線性擬合的化學結構式為C₁₆H₂₂O₄，與此同時造成[M H] 為m/z201.0465、149.0236、121.0311的特點殘片正離子。依據二級質譜分析特點正離子m/z149，并運用Scifinder和Reaxy數據庫查詢查找。由溶解物質A的特點殘片正離子[M H] 為m/z149.0236推斷的結構特征與Samuel等分析出的Pseudomonasputida溶解AFB₁獲得的AFD3物質構造一致，而且經試驗認證該化學物質對Hela體細胞的毒副作用遠低于AFB₁。如圖所示8B所顯示，溶解物質B在撞擊中造成[M H] 為m/z245.1282的磷酸激酶正離子，依據高分辨質譜結果線性擬合的化學結構式為C₁₄H₁₆N₂O₂，與此同時造成[M H] 為m/z217.1332、120.0811、154.0735、70.0680的特點殘片正離子。依據二級質譜分析特點正離子m/z271，推斷該化學物質構造中存有一個羰基，并運用Scifinder和Reaxy數據庫查詢查找。如圖所示8C所顯示，溶解物質A在撞擊中造成[M H] 為m/z197.1145的磷酸激酶正離子，依據高分辨質譜結果線性擬合的化學結構式為C₇H₁₂N₆O₁與此同時造成[M H] 為m/z70.0678的特點殘片正離子。依據二級質譜分析特點正離子，推斷該化學物質中有吡咯烷構造，并運用Scifinder和Reaxy數據庫查詢查找。如圖所示8D所顯示，溶解物質C在撞擊中造成[M H] 為m/z415.2427的磷酸激酶正離子，依據高分辨質譜結果線性擬合的化學結構式為C₂₄H₃₀O₆，與此同時造成[M H] 為m/z397.1455、109.0863的特點殘片正離子。依據二級質譜分析特點正離子m/z397和m/z109，推斷該化學物質構造中存有一個甲基和苯甲醇結構單元，并運用Scifinder和Reaxy數據庫查詢查找。AFB₁經漆酶溶解后的各物質構造見圖9。

有研究表明持續(xù)損害-CO是AFB₁的具體的破裂方式，苯環(huán)上的叔丁基也會產生二甲苯和工業(yè)甲醇遺失。依據溶解方法的不一樣，AFB₁可產生甲基化、環(huán)空氣氧化、復原和脫氫等反映。AFB₁的生物溶解關鍵涉及到內毒素咪唑環(huán)或香豆素內酯環(huán)構造的裝飾，這2種構造是AFB₁具備高致癌物質和高毒素的首要緣故。WangJianqiao等初次報導錳乳酸脫氫酶能夠根據將AFB₁轉換為AFB₁-8，9-二氫二醇而合理除去AFB₁的誘變活力。LiJianlong等運用抗鹽CandidaversatilisCGMCC3790溶解AFB₁獲得4種溶解物質，推斷AFB₁有2種溶解方式，一種是內酯環(huán)和苯環(huán)被水解反應，另一種是利用加氫裂化毀壞內酯環(huán)的酯鍵和醛基。Samuel等19發(fā)覺AFB₁的咪唑環(huán)、內酯羰基和環(huán)戊烯酮環(huán)被Pseudomonasputida裝飾、毀壞而轉換成不一樣構造的化學物質。

Afsharmanesh等22發(fā)覺F₄₂₀H₂還原酶能夠催化反應α-和β-不飽和脂肪酯一部分的烴基復原，BacC空氣氧化還原酶能夠催化反應香豆素內酯環(huán)烴基水解反應造成羧基，接著產生脫羧基反映轉化成物質。

酶溶解管理體系繁雜，漆酶在所有系統(tǒng)中起到催化反應，裂化成包括-NH2、R-NH2等官能團異構的小分子多肽、碳水化合物等化學物質，能夠與AFB₁的活力結構域產生加持、替代等一系列反映，因而AFB₁的溶解途徑比較繁雜。本試驗獲得的4種溶解物質均沒有咪唑環(huán)烴基、香豆素內酯環(huán)和環(huán)戊酮烯環(huán)，且含有烴基總數均低于AFB₁很有可能在AFB₁分子結構的以上毒副作用位置根據加持、替代或氧化還原反應造成了新的碳鍵。溶解物質A（C₁₆H₂₂O₄）比AFB₁少一個-CO₂，多10個H，推斷有可能為AFB₁遺失-CO后產生脫羰基反映，構造中的烴基與H分子產生加持。溶解物質B（C₇H₁₂N₆O）和C（C₁₄H₁₆N₂O₂）均帶有N原素，可能是管理體系中的含N小分子水化學物質參加反映，且發(fā)覺相仿的裂化殘片，推斷有可能為AFB1產生持續(xù)的-CO遺失后，與H₂O和-NH₂產生加持和取代反應，轉化成物質C和D。推斷溶解物質D（C₂₄H₃₀O₆）的轉化成方式為咪唑環(huán)烴基產生加成反應而破裂，持續(xù)遺失-CO，烴基與H₂O和H產生加成反應。

AFs的毒素和致癌物質體制早已被普遍科學研究，關鍵與二氫咪唑環(huán)和香豆素構造相關，根據對本科學研究溶解物質構造的剖析，發(fā)覺咪唑環(huán)烴基和香豆素內酯環(huán)均被毀壞，因而推斷漆酶溶解AFB₁獲得的物質毒副作用明顯小于親本內毒素。也是有研究表明AFB₁經漆酶解決后，咪唑環(huán)烴基或內酯環(huán)裂化，物質的瑩光性和誘變性變弱，且未監(jiān)測到與AFB₁相仿的構造類似物?？墒且驗槠崦傅膩碓础⑷芙鈽藴蚀嬗胁町?，也有可能導致減價物質的毒副作用存有差別，必須 開展身體之外細胞毒性、基因遺傳毒副作用試驗及其身體臨床實驗進一步認證，評定溶解物質的安全系數。

本分析挑選與栓菌漆酶lac3遺傳基因開放閱讀框最大的3KW7做為模版開展同宗模建，將AFB₁對收到漆酶的活性位置，數據顯示漆酶與AFB₁能夠相互影響，共價鍵是重要相互作用力，說明漆酶可用以AFs的溶解。根據具體的溶解試驗認證，響應面提升得到AFB₁溶解率最佳的情況為應時間15h，孵育溫度34℃，酶魅力2U，溶解率可以達到91.08%。在這里前提下運用UPLC-Q-TOF-MS剖析AFB₁溶解物質構造，發(fā)現4個關鍵溶解物質，依據其二級質譜分析信息內容和精準分子質量，推斷出溶解物質的化學式各自為C₁₆H₂₂O₄、C₁₄H₁₆N₂O₂、C₇H₁₂N₆O和C₂₄H₃₀O₆。

本試驗只對于最佳溶解情況下物質的轉化成方式及構造開展分析，針對不一樣溶解情況下物質的差異未開展討論，蛋白質酶的來源及功效時間、溫度和酶魅力等外部要素也許會危害溶解方式及物質構造，需進一步開展深入分析科學研究。海外對黃曲霉微生物樹脂吸附的分析較多聚集在乳酸菌飲料、芽孢桿菌和一些細菌中如樹形結構指孢霉（Dactyliumdendroide）、內寄生曲霉（Aspergillusparasiticus）、糙皮耳尖（Pleurotusostreatus）、莖點霉（Phomasp）、白腐菌掉色栓菌（Trametesversicolor）等。對乳酸菌飲料的科學研究大部分覺得乳酸菌飲料溶解AFB₁是根據微生物吸咐功效，Eshelli等科學研究了芽孢桿菌對AFB₁溶解推論其溶解方式很有可能和油酸及糖酵解途徑正中間產品的積累相關，而對細菌的研究表明其對AFB₁的溶解大部分為降解，關鍵利用微生物菌種代謝胰蛋白酶的酶促反應；如左文凱、楊文華等各自從細菌假蜜環(huán)菌（Armillariellatabescens）、黏病菌（Myxococcusfulvus）、施氏假單胞菌（Pseudomonasstutzeri）F4中獲得了能溶解AFs的胰蛋白酶，前二者還試著了其在大腸埃希菌和畢赤酵母中實現表述，并開展一些酶學基本上特性的剖析?？傮w來說，現階段早已發(fā)覺能使AFs成分減少包含病菌、細菌和酵母以內的大概有上千百種微生物菌種，可是大部分的分析關鍵注重在AFs溶解菌種的挑選和粗提液溶解功能的剖析上，針對不一樣微生物菌種來源于的胰蛋白酶的特性、構造和底物功效方式、溶解原理、物質構造及溶解物質毒副作用的認知仍欠缺進一步的探討與討論。這很有可能與微生物菌種產酶量低，分離純化艱難，酶特性不穩(wěn)定及功效標準嚴苛等因素相關。但伴隨著細胞生物學、生物學、基因工程技術及酶工程等技術應用的發(fā)展完善，大家對酶的了解愈來愈清楚，資產重組載體構建、異源表述、電子自旋共震、同宗模建、分子模擬、分子結構分析等方法的創(chuàng)建使以上研究過程中的短板很有可能得到提升，有越多的方式和方式分析難題后面的實質。