2.5 病菌素粗提

硫酸銨獲取獲得的病菌素粗提物對(duì)蠟樣枯草芽孢菌有顯著的抗菌實(shí)際效果。用PBS和0.2mol/LNaCl水溶液過(guò)柱經(jīng)硫酸銨獲得的病菌素粗提物并各自搜集其過(guò)柱液隨后干凍。經(jīng)抗菌實(shí)驗(yàn)發(fā)覺(jué)歷經(jīng)PBS和0.2mol/LNaCl過(guò)柱的成分能夠比較好地抑止蠟樣枯草芽孢菌（圖3）。

2.6 三羥甲基甘氨酸-SDS-PAGE電泳原理結(jié)果

圖4是產(chǎn)病菌素枯草芽孢菌的Ｔricine-SDSPAGE電泳原理結(jié)果。因?yàn)椋詒icine-SDS-PAGE電泳原理能夠比較好地分離出來(lái)＜30ku的蛋白質(zhì)，因而采用3.3～20.1ku的規(guī)范蛋白質(zhì)做對(duì)比。與Marker雜帶比照得知菌種O在14.4ku上下時(shí)有一條比較突出的雜帶。菌種19在8ku和18ku上有突出的蛋白質(zhì)雜帶。菌種F則在8ku處、14.4ku上下均發(fā)生顯著的雜帶。菌種4-1在14.4ku上下時(shí)有一條蛋白質(zhì)雜帶。4株枯草芽孢菌的Ｔricine-SDS-PAGE電泳原理結(jié)果能夠分析判斷出其所產(chǎn)病菌素的分子質(zhì)量均低于20ku。該結(jié)論也說(shuō)明這種菌種生產(chǎn)病菌素很有可能為耐熱性不錯(cuò)的II類小分子水蛋白質(zhì)。

2.7 LC-MS/MS評(píng)定結(jié)果

表4為產(chǎn)病菌素枯草芽孢菌的LC-MS/MS評(píng)定結(jié)果。融合Ｔricine-SDS-PAGE電泳原理實(shí)驗(yàn)最后能夠分析判斷菌種O生產(chǎn)病菌素很有可能為13ku尺寸的帶有DUF1093結(jié)構(gòu)域的蛋白、13.506ku尺寸的YlbF大家族管控蛋白質(zhì)及18.877ku的1型谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶；菌種19造成的病菌素很有可能為8.969ku的假定蛋白質(zhì)CXF51_07005、16.871ku尺寸的SPBc2原噬菌體衍化的蛋白YolA及其18.001ku尺寸的假定蛋白質(zhì)BESＴ7613_2224；菌種F生產(chǎn)病菌素很有可能為分子質(zhì)量尺寸為8.089ku的假定蛋白質(zhì)C1Ｔ28_21195、13.011ku尺寸的溶解酶（加氧酶）、15.786ku尺寸的holin大家族蛋白及其分子質(zhì)量為17.082ku的SMI1/KNR4大家族蛋白質(zhì)；菌種4-1造成的病菌素很有可能相匹配為9.439ku的小分子質(zhì)量的酸可溶胞子蛋白質(zhì)Ｔlp或者分子質(zhì)量為22.529ku的3-己酮糖-6-硫酸銨合酶?，F(xiàn)階段的結(jié)論與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢內(nèi)已編碼的蛋白質(zhì)較為，沒(méi)有完全一致的蛋白質(zhì)相符合，說(shuō)明本分析中看到的病菌素不清除為新式病菌素的很有可能。病菌素進(jìn)一步提純，碳水化合物序列比對(duì)和產(chǎn)病菌素的病菌全基因組序列開(kāi)展轉(zhuǎn)錄組測(cè)序剖析，進(jìn)而精確分辨這4株枯草芽孢菌生產(chǎn)病菌素是不是為新式病菌素。

3 結(jié)果

本分析從福建省杜蠣中分離出來(lái)挑選出14株對(duì)普遍病原菌有抗菌活力的枯草芽孢菌菌種，根據(jù)抗菌實(shí)驗(yàn)發(fā)覺(jué)這種枯草芽孢菌對(duì)橙黃色鏈球菌、蠟樣枯草芽孢菌、乳酸菌等革蘭氏陽(yáng)性菌及弗氏檸檬酸鈉鏈球菌、副血溶弧菌、大腸埃希菌、腸胃沙門(mén)菌、志賀氏菌等革蘭氏陽(yáng)性菌陰性菌均有一定的殺菌作用。與此同時(shí)，這種枯草芽孢菌產(chǎn)的病菌素具備耐熱性強(qiáng)、易被胰蛋白酶溶解和由核糖體編號(hào)生成造成病菌素等典型性病菌素特點(diǎn)。依據(jù)14株菌的抗菌譜范疇和rep-PCR結(jié)果，分析判斷4種菌種很有可能有別于其他枯草芽孢菌。因而，選擇這4株菌O（解木薯淀粉枯草芽孢菌），4-1（死谷枯草芽孢菌），19和F（枯草枯草芽孢菌）開(kāi)展下一步實(shí)驗(yàn)。根據(jù)Ｔricine-SDSPAGE電泳原理實(shí)驗(yàn)，這4株枯草芽孢菌產(chǎn)的病菌素分子質(zhì)量均不超20ku。表明以上4株病菌很有可能產(chǎn)II類乳酸菌飲料病菌素。運(yùn)用LC-MS/MS評(píng)定并核對(duì)目前蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)查詢，數(shù)據(jù)顯示這4株枯草芽孢菌生產(chǎn)病菌素未在目前數(shù)據(jù)庫(kù)查詢中發(fā)覺(jué)，病菌素進(jìn)一步提純，碳水化合物序列比對(duì)和產(chǎn)病菌素的病菌全基因組序列開(kāi)展轉(zhuǎn)錄組測(cè)序剖析仍需在未來(lái)實(shí)驗(yàn)中開(kāi)展，進(jìn)而精確明確這4株枯草芽孢菌的病菌素特性。