將聚集塑造的泥樣梯度方向稀釋液后,施膠于加上柚皮苷的挑選培養(yǎng)液,30℃顛倒塑造,每日觀查冒出的菌體形狀及全透明圈發(fā)生狀況。挑菌初篩發(fā)生全透明圈的菌體,分離純化后挑菌單菌體點(diǎn)樣至挑選平板電腦。挑選平板電腦分四塊地區(qū)點(diǎn)樣后放進(jìn)30℃恒溫箱顛倒塑造,7d后得到1株有顯著全透明圈菌種,如圖所示1。將該菌種取名為DTC03。
觀查平板電腦中的菌體形狀,其菌體呈乳白色,不全透明,邊沿不規(guī)律,表層不光滑的半球形菌體(圖2a)。革蘭氏染色后發(fā)覺(jué)菌種DTC03為長(zhǎng)桿狀的革蘭氏陽(yáng)性菌(圖2b)。芽胞上色說(shuō)明該菌種DTC03能夠造成芽胞(圖2c)。依據(jù)菌體形狀,菌體形狀,基本判斷菌種DTC03歸屬于枯草芽孢菌屬。
菌種DTC03明膠液化實(shí)驗(yàn)、吲哚實(shí)驗(yàn)、葡萄糖水、甘油果糖實(shí)驗(yàn)均呈陽(yáng)性,甲基紅實(shí)驗(yàn)為呈陰性(表1)。
將PCR擴(kuò)增物質(zhì)送至南京市思普金生物技術(shù)有限責(zé)任公司轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,測(cè)得菌種DTC03的16SrDNA的編碼序列為1392bp。將編碼序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)開(kāi)展比照,數(shù)據(jù)顯示該菌種DTC03的16SrDNA序列與貝萊斯枯草芽孢菌(Bacillusvelezensis)的16SrDNA序列相似性達(dá)99.93%。挑選與其說(shuō)親緣關(guān)系較近的菌種開(kāi)展核對(duì),并應(yīng)用MEGA7搭建進(jìn)化樹(shù),結(jié)果如圖所示3所顯示,該菌是芽胞菌屬,且與Bacillusvelezensis同宗相似度最大。融合形狀和生理學(xué)生物化學(xué)特點(diǎn),將評(píng)定菌種DTC03為Bacillusvelezensis。現(xiàn)階段世界各國(guó)還沒(méi)有Bacillusvelezensis產(chǎn)α-L-鼠李甘酶的有關(guān)報(bào)導(dǎo)。