目地研發(fā)苞米全粉中黃曲霉B1化學(xué)成分分析的國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。方式 選用高效液相色譜色譜法對苞米全粉中黃曲霉B1備選物開展均衡性檢測、可靠性調(diào)查,選擇8家具有較高檢驗?zāi)芰Φ脑囼炇疫M(jìn)行好幾家試驗室協(xié)同時間常數(shù)。結(jié)果勻稱性檢測的方差分析數(shù)據(jù)顯示F統(tǒng)計分析值<f臨界點?？煽啃詸z測結(jié)果剖析表明,備選物中黃曲霉b1未觀察到多變性。該國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具備優(yōu)良的勻稱性,可在常溫下(</f臨界點。可靠性檢測結(jié)果剖析表明,備選物中黃曲霉b1未觀察到多變性。該國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具備優(yōu)良的勻稱性,可在常溫下(

0前言

黃曲霉B1(aflatoxinB1)是二氫咪唑氧雜萘鄰?fù)幕衔?帶有一個雙咪唑環(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)?香豆素)。黃曲霉B1是給定的化合物中致癌物質(zhì)最強(qiáng)的一種,被世衛(wèi)組織列入I類致癌物質(zhì)。其普遍出現(xiàn)于棉籽油、苞米、花生仁、干果食品類和精飼料中,嚴(yán)重危害人們及家禽的身心健康,遭受世界各地的普遍關(guān)心。為操縱黃曲霉的傷害,在我國GB2761—2017《食品中真菌毒素限量》要求糧油食品以及成品中黃曲霉B1的限定值,在其中苞米、棒子面及苞米產(chǎn)品限定數(shù)值20μg/kg。黃曲霉B1的檢查辦法許多,關(guān)鍵有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、膠體金試小紙條法、高效液相色譜色譜法和液相色譜儀–質(zhì)譜分析聯(lián)使用方法等。為保證檢驗效果的精確性、穩(wěn)定性,必須具備溯源性的高準(zhǔn)確性的黃曲霉B1基材國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)做為日常質(zhì)量控制方法。

近些年伴隨著無損檢測技術(shù)的提升及真菌毒素檢驗量的提升,對檢測結(jié)果穩(wěn)定性和溯源性要求日益提高。國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用以量值溯源及試驗室品質(zhì)保證工作能力的點評,在試驗室的檢測主題活動中激發(fā)著關(guān)鍵功效。依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)數(shù)據(jù)庫查詢查找,真菌毒素的有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不管從種類上也是從總數(shù)上面不能滿足檢驗必須。因而必須進(jìn)行操作系統(tǒng)的真菌毒素類國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研發(fā)工作中,對確保檢驗效果精確穩(wěn)定性有著關(guān)鍵實際意義。本分析利用對全國各地象征性地區(qū)苞米開展篩選,挑選合適的苞米備選物,經(jīng)破碎、勻稱化技術(shù)性、勻稱性和可靠性檢測及好幾家試驗室時間常數(shù),研發(fā)成苞米全粉中黃曲霉B1基材國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),以求能為糧油食品以及成品中黃曲霉B1檢驗質(zhì)量管理、校正檢測儀器、考評工作人員實際操作能力等給予標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)物質(zhì),對在我國糧食作物品質(zhì)安全管理具備關(guān)鍵的實際意義。

1原材料與方式

1.1儀器設(shè)備與實驗試劑

Agilent1260高效率液相色譜(英國Agilent企業(yè));AutoEVA-60自動式濃縮氮吹儀;固相萃取儀(上海安譜試驗科技發(fā)展有限責(zé)任公司);GT10-1快速臺式離心機(jī)(北京時代北利離心脫水機(jī)有限責(zé)任公司);HY-2變速常用震蕩器(常州市國華家用電器有限責(zé)任公司)。

工業(yè)甲醇、乙腈(色譜純,法國Merk企業(yè));氧化鈉(分析純,我國醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司);超純水系統(tǒng)(中國香港Waston企業(yè));AflaTest免疫力親和柱(3mL,英國VICAN企業(yè));0.2?mPTFE膜針管過濾裝置(英國PALL企業(yè));有證國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)100302工業(yè)甲醇中黃曲霉B1、苞米全粉空缺(國家糧食和物資儲備局科學(xué)院)。

1.2實驗方法

1.2.1國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制取

依據(jù)JJF1006—1994《一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范》規(guī)定,從全國各地象征性地區(qū)試品挑選出指標(biāo)值成分符合要求的苞米備選試品,備選試品經(jīng)去雜、破碎、篩粉、混和,用遮光箔袋真空泵封裝,按100g/袋包裝,共包裝500個模塊,開展輻照度解決,(20±5)℃儲存。

1.2.2勻稱性檢測

勻稱性是標(biāo)樣的主要特性,用以敘述國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特點的空間結(jié)構(gòu)特點。在國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研發(fā)(生產(chǎn)制造)全過程中需要開展均衡性評定。勻稱性檢測依照J(rèn)JF1343—2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理》技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,從早已散裝好的國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中提取15個模塊開展均衡性檢測。檢測方式與時間常數(shù)方式同樣,每袋反復(fù)測量3次。

1.2.3可靠性調(diào)查

可靠性是標(biāo)樣的另一個基本上特性,用以敘述國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特點值隨時間變動的特性,即敘述國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特點的時間遍布特點。國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的可靠性包含長期性穩(wěn)定和短期內(nèi)可靠性2一部分。長期性可靠性關(guān)鍵調(diào)查存儲情況下的可靠性,本國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)存儲于室內(nèi)溫度(20±5)℃遮光儲存的標(biāo)準(zhǔn)下,各自在第0、1、2、3、6個月開展試驗,每一次選擇兩個包裝模塊包裝模塊。

短期內(nèi)可靠性試驗仿真模擬運送全過程中產(chǎn)生的惡劣自然環(huán)境做好調(diào)查,將試樣放置60℃標(biāo)準(zhǔn)下,各自在0、1、3、5、7d開展檢測,測定法與時間常數(shù)方式同樣。

1.2.4時間常數(shù)方式科學(xué)研究

國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)試品用工業(yè)甲醇獲取,以免疫力親和柱凈化處理聚集,選用液相色譜儀法對苞米全粉中黃曲霉B1開展時間常數(shù)。

前解決方式:稱量玉米面粉(5g,精準(zhǔn)至0.001g)于50mL離心管架中,添加1g氧化鈉,精確添加20mL70%工業(yè)甲醇水,渦流獲取30min,7000r/min離心式5min,取2mL上清液于清潔50mL離心管架中,添加18mL水稀釋液。將以上樣液過免疫力親和柱,上樣后加10mL水滲濾2次,滲濾后用機(jī)械泵排干親和柱,用2mL工業(yè)甲醇過柱親和柱,機(jī)械泵排干后,用N2烘干,用1mL流動性相水溶液滴定劑,過0.22μm濾紙,待上機(jī)操作檢驗。

液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn):Agilent1260高效率液相色譜配光化學(xué)反應(yīng)衍化器;AgilentZORBAXEclipsePlusC18液相色譜儀柱(4.6mm×150mm,5μm),柱溫:40ºC;流動性相:A相:乙腈:工業(yè)甲醇(V:V=1:1),B相:水;A:B=35:65(V:V),等梯度方向過柱;流動速度為1.0mL/min,氣相量為50µL;激起光波長為360nm,發(fā)送光波長為440nm。

1.2.5好幾家試驗室協(xié)同時間常數(shù)

挑選具備我國質(zhì)量認(rèn)證國家認(rèn)可委員會/我國認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)管聯(lián)合會等計量檢定認(rèn)同的試驗室為合作時間常數(shù)企業(yè)。時間常數(shù)全過程中采用的實驗儀器、容積器材都借助了計量檢測或校正。幫助時間常數(shù)企業(yè)應(yīng)用具備量值溯源的標(biāo)液制作工作中曲線圖,并且用加標(biāo)回收開展品質(zhì)監(jiān)管,保證數(shù)值的溯源性和精確性。