2、色譜儀和質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)的提升
（1）流動(dòng)性相的挑選
正相反色譜儀的流動(dòng)性相一般由水和有機(jī)溶液（如工業(yè)甲醇、乙腈）等構(gòu)成，因?yàn)橐恍┍粶y(cè)物正負(fù)極較強(qiáng)，流動(dòng)性相的過(guò)柱工作能力不適合過(guò)強(qiáng)，與此同時(shí)待分離出來(lái)的16種添加物有一些正負(fù)極相仿，保存期相仿，選用乙腈為有機(jī)相時(shí)造成 好多個(gè)成分“共排出”狀況較工業(yè)甲醇比較嚴(yán)重，而工業(yè)甲醇可讓16種添加物的保存期相對(duì)性延遲時(shí)間，與此同時(shí)工業(yè)甲醇能夠 提升離子化水平，峰總面積相比乙腈為流動(dòng)性相時(shí)大，故挑選工業(yè)甲醇為研究的有機(jī)相；又因?yàn)榱鲃?dòng)性相要進(jìn)到質(zhì)譜儀器，加上一定量的緩沖液能夠 提升響應(yīng)值，因此考慮到工業(yè)甲醇-苯甲酸溶液、工業(yè)甲醇-乙酸銨水溶液、工業(yè)甲醇-甲酸溶液3種流動(dòng)性相管理體系。

以被測(cè)物在離子交換柱上的分離度、峰形、敏感度等為調(diào)查指標(biāo)值對(duì)3種流動(dòng)性相管理體系實(shí)現(xiàn)了較為。結(jié)果顯示，管理體系中加入了乙酸銨不但更有益于分離出來(lái)化學(xué)物質(zhì)在離子交換柱上的保存，并且可以提升黑色素類化合物的水解化水平，提升數(shù)據(jù)信號(hào)回應(yīng)，從各化學(xué)物質(zhì)分離度、峰形、響應(yīng)值及其保存期的可靠性等標(biāo)準(zhǔn)開(kāi)展整體考量，工業(yè)甲醇-10mmol/L乙酸銨做為流動(dòng)性相時(shí)，好于其他二種流動(dòng)性相，故試驗(yàn)采用工業(yè)甲醇-10mmol/L乙酸銨為流動(dòng)性相開(kāi)展梯度方向過(guò)柱。
（2）柱溫的挑選
柱溫可以危害離子交換柱的柱效、可選擇性、敏感度和可靠性，柱溫的更改立即危害分離出來(lái)作用及分離出來(lái)速度。上升柱溫，離子交換柱內(nèi)離子交換法速度隨著上升，有益于提升柱效、減少剖析時(shí)間。本試驗(yàn)調(diào)查了柱溫各自為30℃、35℃、40℃時(shí)，16種添加物保存期及響應(yīng)值的區(qū)別，發(fā)覺(jué)當(dāng)柱溫為30℃時(shí)，16種添加物有13種出峰時(shí)間均匯集在3～4min，分離度差；提升柱溫至35℃時(shí)，柱效提升，分離度和敏感度均有改進(jìn)，再次提升柱溫，分離出來(lái)狀況無(wú)顯著轉(zhuǎn)變。充分考慮離子交換柱在相比較低氣溫下使用期限較長(zhǎng)，本試驗(yàn)設(shè)置柱溫為35℃。提升情況下16種添加物的MRM質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1。

（3）質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)的挑選
為取得最好的精確度和分離出來(lái)實(shí)際效果，依據(jù)16種添加物的分子式特點(diǎn)，在正、負(fù)二種水解方式下提升被測(cè)物的母正離子和特點(diǎn)子離子及其對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜分析主要參數(shù)。取濃度值為1mg/L的16種化學(xué)物質(zhì)單標(biāo)液先后選用不接離子交換柱立即氣相方法開(kāi)展質(zhì)譜分析全掃描儀檢驗(yàn)，獲得總體目標(biāo)剖析物一級(jí)質(zhì)譜圖，再用氬氣負(fù)電子該母正離子，獲得其二級(jí)質(zhì)譜圖，運(yùn)用設(shè)備的全自動(dòng)調(diào)優(yōu)作用，各自對(duì)Q1、Q3、CE等完成提升，明確16種添加物的母正離子和子離子的最好質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)，以硬度比較大的子離子做為定量分析正離子，抗壓強(qiáng)度稍小的子離子為判定正離子。
3、方法學(xué)點(diǎn)評(píng)
（1）方式的線形范疇和方法檢出限
將含16種被測(cè)物的混和規(guī)范貯備液加上至稀釋液5倍的空缺紅酒試品中，各自配置系列產(chǎn)品混和規(guī)范切削液。

離子交換柱：AcquityUPLCHSST₃柱（100mm×2.1mm,1.8µm，英國(guó)Waters企業(yè)）。流動(dòng)性相：（A）工業(yè)甲醇和（B）10mmol/L乙酸銨溶液，流動(dòng)速度0.35mL/min；梯度方向過(guò)柱程序流程為：0min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)為10%；0～3min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從10%升到90%，并維持2.5min，5.5～5.51min；工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從90%降到10%；5.51min～6.5min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)維持10%。柱溫為35℃；氣相容積：2μL。

分析儀：LCMS-8050；離子源：電噴霧器離子源（ESI）；掃描儀方法：正空氣負(fù)離子與此同時(shí)掃描儀；離子源插口工作電壓：0.5kV；做霧化氣：N23.0L/min；干躁氣：N210L/min；撞擊氣：氬氣；DL溫度：250℃；加熱器溫度：400℃；逐行掃描：多反映檢測(cè)(MRM)；停留時(shí)間：15ms；時(shí)間延遲：3ms；以各成分定量分析離子色譜儀峰范圍對(duì)相對(duì)的濃度值制作各被測(cè)物的規(guī)范工作中曲線圖，結(jié)果顯示，線性相關(guān)優(yōu)良，相關(guān)系數(shù)r（r²）都是在0.995之上。

用紅酒試品低加標(biāo)水準(zhǔn)測(cè)算各成分的方法檢出限和定量限，用頻率穩(wěn)定度為3明確方式的方法檢出限（LOD），用頻率穩(wěn)定度為10明確方式的定量限（LOQ），各成分在紅酒試品中的方法檢出限范疇在0.2～2μg/L中間。結(jié)果見(jiàn)表2。

（2）精度和利用率
用少量移液器向空缺紅酒試品中精確添加一定量的16種待測(cè)物混和標(biāo)液，配出低、中、高3個(gè)濃度值水準(zhǔn)開(kāi)展利用率試驗(yàn)。各自精確稱量16種添加物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10mL深棕色容量瓶中，自來(lái)水或工業(yè)甲醇融解并滴定劑，配置成濃度值為1mg/mL的單標(biāo)貯備液，于-18℃下遮光儲(chǔ)存。用工業(yè)甲醇稀釋液并配置正中間濃度值的規(guī)范切削液，于4℃遮光儲(chǔ)存。

依據(jù)須要用流動(dòng)性相逐步稀釋液，配置成合理含量的混和規(guī)范切削液，現(xiàn)配現(xiàn)用。取紅酒試品2.0mL于10mL容量瓶中，用超純水系統(tǒng)滴定劑，超聲波攪拌，過(guò)0.22μm濾紙，滲瀝液供測(cè)量。

離子交換柱：AcquityUPLCHSST3柱（100mm×2.1mm,1.8µm，英國(guó)Waters企業(yè)）。

流動(dòng)性相：（A）工業(yè)甲醇和（B）10mmol/L乙酸銨溶液，流動(dòng)速度0.35mL/min；梯度方向過(guò)柱程序流程為：0min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)為10%；0～3min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從10%升到90%，并維持2.5min，5.5～5.51min；工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從90%降到10%；5.51min～6.5min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)維持10%。

柱溫為35℃；氣相容積：2μL。

分析儀：LCMS-8050；離子源：電噴霧器離子源（ESI）；掃描儀方法：正空氣負(fù)離子與此同時(shí)掃描儀；離子源插口工作電壓：0.5kV；做霧化氣：N23.0L/min；干躁氣：N210L/min；撞擊氣：氬氣；DL溫度：250℃；加熱器溫度：400℃；逐行掃描：多反映檢測(cè)(MRM)；停留時(shí)間：15ms；時(shí)間延遲：3ms。

開(kāi)展6次反復(fù)試驗(yàn)，測(cè)算其利用率及相對(duì)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果顯示，各總體目標(biāo)物均值利用率在89.1%～106.4%中間，相對(duì)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于9.7%，方式的準(zhǔn)確性和精度均合乎多殘余剖析的規(guī)定。
4、具體試品的測(cè)量
按所確立的辦法對(duì)購(gòu)置的10批號(hào)紅酒試品做好了16種添加物的篩選，每一個(gè)試品反復(fù)測(cè)量3次。所檢紅酒試品中有1個(gè)驗(yàn)出糖精鈉和甜蜜素，成分各自為26.3μg/L、38.9μg/L，其他試品的檢驗(yàn)結(jié)論均為呈陰性。呈陽(yáng)性試品的MRM質(zhì)譜圖見(jiàn)圖2。

三、結(jié)果
本科學(xué)研究創(chuàng)建了高效率液相色譜儀-串連質(zhì)譜儀器與此同時(shí)測(cè)量紅酒中甜味素、添加劑和黑色素成分的方式 ，前解決簡(jiǎn)易、剖析速度更快、精確度和敏感度高。具體試品的檢驗(yàn)說(shuō)明，該辦法可以達(dá)到紅酒甜味素、添加劑和黑色素殘余的剖析規(guī)定，與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方式對(duì)比，進(jìn)一步提高了剖析工作效率和減少了剖析成本費(fèi)，可以達(dá)到紅酒中痕量元素剖析規(guī)定，特別適合大批紅酒試品中16種添加物的判定和定性分析。