黃皮膚屬綠色植物歸屬于蕓香科Rutaceae，全球約有30種，關(guān)鍵分散于東半球的亞熱帶和亞熱帶地區(qū)。遍布于國(guó)內(nèi)的黃皮膚屬綠色植物約有10種及其2變異，在其中1種為引入種植種，集中化遍布于海南省、廣西省、廣東省及其云南省等南邊省份。黃皮膚屬綠色植物大多數(shù)為民俗藥用價(jià)值，藥用價(jià)值有悠久的歷史，效果明顯，具備理氣止疼、祛毒消結(jié)的作用，常見于治感冒、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及其胃疼等。當(dāng)代綠色植物有機(jī)化學(xué)研究表明黃皮膚屬綠色植物中含有香豆素類、黃酮類、木脂素類、倍半萜類、黃酮類苷類、二萜類及其檸檬苦素類等多種多樣結(jié)構(gòu)的化學(xué)物質(zhì)，當(dāng)代藥學(xué)研究表明黃皮膚屬綠色植物中剝離獲得的成分具備抗感染活力、抗癌活力、抗真菌藥活力、抗病毒治療活力、神經(jīng)系統(tǒng)維護(hù)活力及其護(hù)肝活力等各種生物活性。假黃皮膚Clausena excavata為蕓香科黃皮膚屬綠色植物，遍布于國(guó)內(nèi)的海南省、云南省、廣東省、廣西省、福建省、中國(guó)臺(tái)灣等省份。假黃皮膚為民俗藥植，具備理氣、止疼、祛風(fēng)、祛濕的作用。當(dāng)代綠色植物有機(jī)化學(xué)和藥理學(xué)活力研究表明假黃皮膚中含有結(jié)構(gòu)特征豐富多彩、生物活性明顯的成分。

本研究組在早期分析中對(duì)假黃皮膚枝干的90%酒精提取液的抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活力實(shí)現(xiàn)了基本點(diǎn)評(píng)，結(jié)果顯示假黃皮膚枝干的90%酒精提取液具備明顯的抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活力。為了更好地更有效地綜合利用該藥植資源，充分運(yùn)用其功效與作用，本研究組對(duì)假黃皮膚枝干的90%酒精提取液中的成分開展了體系科學(xué)研究，從這當(dāng)中分離出來獲得了19個(gè)化學(xué)物質(zhì)，各自評(píng)定為：苔色酸甲酯(1)、丁香花脂素(2)、lenisin A(3)、東莨菪素(4)、歐前胡素酚(5)、N-benzoyltyrarnine methyl ether(6)、N-p-coumaroyltyramine(7)、aurantiamide acetate(8)、1H-indole-3-carboxaldehyde(9)、furostifoline(10)、clausenalansine E(11)、3-formylcarbazole(12)、clausine L(13)、clausine E(14)、methyl carbazole-3-carboxyaate(15)、glycosinin(16)、murrayafoline A(17)、clausine H(18)和2, 7-dihydroxy-3-formyl-1-(3'-methyl-2'-butenyl)carbazole(19)。在其中化學(xué)物質(zhì)1～11為初次從假黃皮膚中剝離獲得，化學(xué)物質(zhì)1、2、10為初次從黃皮膚屬綠色植物中剝離獲得。除此之外，根據(jù)對(duì)化學(xué)物質(zhì)1～19的身體之外抑止MH7A滑囊纖維細(xì)胞繁衍的活力開展點(diǎn)評(píng)化學(xué)物質(zhì)1～19的抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活力，結(jié)果顯示化學(xué)物質(zhì)10～19主要表現(xiàn)出了比較明顯的抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活力，他們對(duì)MH7A滑囊纖維細(xì)胞繁衍的抑止活力的IC50為(27.63±0.18)～(235.67±2.16) μmol·L^-1。

1 原材料

中低電壓制取色譜儀(法國(guó)Buchi企業(yè))；Agilent 1200分析型高效率液相色譜(英國(guó)Agilent Technologies有限責(zé)任公司)；Cosmosil C18剖析型離子交換柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；Cosmosil C18制取型離子交換柱(20 mm×250 mm，5 μm)；Thermo Fisher UltiMate 3000制取型高效率液相色譜(英國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)；Finnigan LCQ Advantange MAX 質(zhì)譜儀器(英國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)；Bruker AV-400型超導(dǎo)體數(shù)字乳腺機(jī)(法國(guó)Bruker企業(yè))；Sephadex LH-20疑膠(英國(guó)Amersham Blosclences企業(yè))；層析硅橡膠GF254和柱色譜儀硅橡膠(青島海洋化工企業(yè))；ODS色譜原材料(C18，10～40 μm，法國(guó)Merck企業(yè))；N-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(日本EYELA企業(yè))；YOKO-ZX紫外線剖析暗箱(武漢市藥科新科研開發(fā)有限責(zé)任公司)；4001N電子分析天平(上海市民橋高精密高新科技儀器設(shè)備有限責(zé)任公司)；OLYM PUS-IX70型微生物倒置顯微鏡(日本Olym-pus企業(yè))；Tecan Infinite Pro全光波長(zhǎng)多用途酶標(biāo)儀(法國(guó)Tecan企業(yè))；BHC-1300B2型凈化工作臺(tái)(蘇州市萬(wàn)通氣體技術(shù)性有限責(zé)任公司)；Thermo HERAcell 240i型CO2控溫細(xì)胞培養(yǎng)箱(英國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)；噻唑藍(lán)(英國(guó)Sigma企業(yè))；F12培養(yǎng)液、聚磷酸鹽緩沖溶液、蛋白酶、胎牛血清和法抗(英國(guó)Hyclone公司)；MH7A滑囊纖維細(xì)胞來自英國(guó)方式塑造物集庫(kù)存ATCC(American type culture collection)細(xì)胞庫(kù)，購(gòu)自于上海市冠導(dǎo)生物技術(shù)有限責(zé)任公司。別的實(shí)驗(yàn)試劑均為分析純實(shí)驗(yàn)試劑或是色譜儀實(shí)驗(yàn)試劑 (西隴化工股權(quán)有限責(zé)任公司)。

假黃皮膚枝干于2019年10月收集于云南省西雙版納傣族自治州云南西雙版納國(guó)家保護(hù)區(qū)，經(jīng)海南省師范學(xué)校亞熱帶藥用價(jià)值資源有機(jī)化學(xué)國(guó)家教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室付艷輝研究者評(píng)定為蕓香科黃皮膚屬綠色植物假黃皮膚C. excavata的枝干，憑據(jù)標(biāo)本采集(No.CLEX20191002)儲(chǔ)存于海南省師范學(xué)校海南省師范學(xué)校亞熱帶藥用價(jià)值資源有機(jī)化學(xué)國(guó)家教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室綠色植物標(biāo)本室。

2 獲取分離出來

將晾干的假黃皮膚枝干19.8 kg破碎完用90%酒精浸法獲取3次，每一次獲取7 d，得酒精獲取總中藥浸膏(1 113.8 g)。酒精獲取總中藥浸膏(1 110.0 g)經(jīng)硅橡膠柱色譜儀分離出來，以乙醚-工業(yè)甲醇管理體系為過柱劑開展梯度方向過柱(100:0～35:65)，獲得八個(gè)流分Fr.1～Fr.8。Fr. 2(48.7 g)經(jīng)正相反ODS柱色譜儀分離出來，以工業(yè)甲醇-水管理體系為過柱劑開展梯度方向過柱(65:35～100:0)，獲得6個(gè)亞流分(Fr.2A～Fr.2F)。Fr.2B(6.2 g)經(jīng)硅橡膠柱色譜儀開展分離出來，以乙醚-甲苯管理體系為過柱劑開展梯度方向過柱(95:5～30:70)，再經(jīng)制取型HPLC(DAD探測(cè)器；檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為210、230、254、280 nm)制取(乙腈-水65:35)獲得化學(xué)物質(zhì)1 (21.3 mg)、7 (54.2 mg)、12 (63.6 mg)、14 (6.3 mg)和17 (21.5 mg)；Fr.2C(5.7 g)經(jīng)硅橡膠柱色譜儀開展分離出來，以乙醚-甲苯(80:20～25:73)為過柱劑開展梯度方向過柱，再經(jīng)制取型HPLC(DAD探測(cè)器；檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為210、230、254、280 nm)制取(工業(yè)甲醇-水73:27)獲得化學(xué)物質(zhì)2 (42.1 mg)、8 (7.9 mg)、13 (8.6 mg)、16 (53.5 mg)、18 (74.1 mg)；Fr. 3(55.3 g)經(jīng)正相反ODS柱色譜儀分離出來，以工業(yè)甲醇-水管理體系為過柱劑開展梯度方向過柱(55:45～100:0)，獲得七個(gè)亞流分(Fr.3A～Fr.3G)；Fr.3B(6.7 g)經(jīng)硅橡膠柱色譜儀開展分離出來，以乙醚-甲苯管理體系為過柱劑開展梯度方向過柱(85:15～20:80)，再經(jīng)制取型HPLC(DAD探測(cè)器；檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為210、230、254、280 nm)制取(乙腈-水58:42)獲得化學(xué)物質(zhì)3 (7.8 mg)、4 (9.3 mg)、9 (15.8 mg)、15 (87.3 mg)；Fr. 4(64.6 g)經(jīng)正相反ODS柱色譜儀分離出來，以工業(yè)甲醇-水管理體系為過柱劑開展梯度方向過柱(45:55～100:0)，獲得6個(gè)亞流分(Fr.4A～Fr.4F)；Fr.4B (8.3 g)經(jīng)硅橡膠柱色譜儀分離出來，以乙醚-甲苯為過柱劑開展梯度方向過柱(80:20～30:70)，經(jīng)Sephadex LH-20疑膠柱色譜儀(工業(yè)甲醇-水70:30)提純后寄內(nèi)制取型HPLC(DAD探測(cè)器；檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為210、230、254、280 nm)制取(工業(yè)甲醇-水60:40)獲得化學(xué)物質(zhì)5 (8.7 mg)、6 (9.7 mg)、10 (31.6 mg)、11 (42.5 mg)、19 (22.3 mg)。

3 構(gòu)造評(píng)定

化學(xué)物質(zhì)1 乳白色無定形粉末狀，三氯化鐵顯色反應(yīng)呈陽(yáng)性；C9H10O4，ESI-MS m/z 183 ；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 11.78 (1H, s, 2-OH), 6.28 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-5), 6.23 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-3), 3.91 (3H, s, 7-OCH3), 2.47 (3H, s, 6-CH3)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 172.3 (C-7), 165.5 (C-2), 160.9 (C-4), 144.0 (C-6), 111.6 (C-5), 105.6 (C-1), 101.4 (C-3), 52.0 (7-OCH3), 24.4 (6-CH3)。之上數(shù)據(jù)信息與資料中消息的苔色酸甲酯的波譜數(shù)據(jù)信息基本一致，故評(píng)定化學(xué)物質(zhì)1為苔色酸甲酯。

化學(xué)物質(zhì)2 乳白色無定形粉末狀，三氯化鐵顯色反應(yīng)呈陽(yáng)性；C22H26O8，ESI-MS m/z 419 ；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 5.59 (1H, s, H-10, 14, 16, 20), 4.72 (1H, d, J = 4.2 Hz, H-2), 4.28 (1H, dd, J = 9.0, 7.2 Hz, H-4β, 8β), 3.91 (1H, dd, J = 9.0, 3.6 Hz, H-4α, 8α), 3.89 (3H, s, 11, 13, 17, 19-OCH3), 3.10 (1H, m, H-5)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 147.3 (C-11, 13, 17, 19), 134.4 (C-12, 18), 132.2 (C-9, 15), 102.8 (C-10, 14, 16, 20), 86.2 (C-2, 7), 71.9 (C-4, 8), 56.5 (11, 13, 17, 19-OCH3), 54.4 (C-1)。之上數(shù)據(jù)信息與資料中消息的丁香花脂素的波譜數(shù)據(jù)信息基本一致，故評(píng)定化學(xué)物質(zhì)2為丁香花脂素。

化學(xué)物質(zhì)3 乳白色無定形粉末狀；C16H24O5, ESI-MS m/z 297 ；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 6.41 (2H, s, H-2, 6), 5.94 (1H, m, H-8), 5.10 (2H, m, H-9), 4.41 (1H, dd, J = 10.6, 2.5 Hz, H-1'α), 3.86 (1H, dd, 10.6, 8.2 Hz, H-1'β) 3.63 (1H, dd, J = 8.2, 2.5 Hz, H-2'), 3.85 (6H, s, 3, 5-OCH3), 3.33 (2H, d, J = 6.8 Hz, H-7), 1.25(3H, s, H-5'), 1.25 (3H, s, H-4')；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 152.9 (C-3, 5), 137.1 (C-1), 136.4 (C-8), 135.3 (C-4), 116.3 (C-9), 105.5 (C-2, 6), 75.9 (C-2'), 75.7 (C-1'), 71.5 (C-3'), 56.2 (3, 5-OCH3), 40.7 (C-7), 26.9 (C-5'), 25.1 (C-4')。之上數(shù)據(jù)信息與資料中消息的lenisin A的波譜數(shù)據(jù)信息基本一致，故評(píng)定化學(xué)物質(zhì)3為lenisin A。

化學(xué)物質(zhì)4 淺黃色不定形粉末狀，異羥肟酸鐵顯色反映呈陽(yáng)性；C10H8O4, ESI-MS m/z 193 ；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 7.60 (1H, d, J = 9.8 Hz, H-4), 6.91 (1H, s, H-8), 6.84 (1H, s, H-5), 6.26 (1H, d, J = 9.8 Hz, H-3), 3.95 (3H, s, 6-OCH3)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 161.5 (C-2), 150.3 (C-6), 149.7 (C-9), 144.0 (C-7), 143.3 (C-4), 113.4 (C-3), 111.5 (C-10), 107.5 (C-5), 103.2 (C-8), 56.4 (6-OCH3)。之上數(shù)據(jù)信息與資料中消息的東莨菪素的波譜數(shù)據(jù)信息基本一致，故評(píng)定化學(xué)物質(zhì)4為東莨菪素。

化學(xué)物質(zhì)5 淺黃色不定形粉末狀，異羥肟酸鐵顯色反映呈陽(yáng)性；C14H14O3, ESI-MS m/z 231 ；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 7.63 (1H, d, J = 9.8 Hz, H-4), 7.22 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-5), 6.81 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-6), 6.24 (1H, d, J = 9.8 Hz, H-3), 5.28 (1H, dd, J = 7.2, 5.7 Hz, H-2'), 3.61 (2H, d, J = 7.2 Hz, H-1'), 1.85 (3H, s, H-4'), 1.75 (3H, s, H-5')；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 161.9 (C-2), 158.5 (C-7), 153.3 (C-9), 144.3 (C-4), 136.0 (C-3'), 126.7 (C-5), 120.5 (C-2'), 115.0 (C-8), 113.3 (C-3), 112.9 (C-10), 112.6 (C-6), 26.0 (C-4'), 22.2 (C-1'), 18.1 (C-5')。之上數(shù)據(jù)信息與文獻(xiàn)資料報(bào)導(dǎo)的歐前胡素酚的波譜數(shù)據(jù)信息基本一致，故評(píng)定化學(xué)物質(zhì)5為歐前胡素酚。

化學(xué)物質(zhì)6 乳白色不定形粉末狀，改進(jìn)碘化鉍鉀顯色反應(yīng)呈陽(yáng)性；C16H17NO2, ESI-MS m/z 256 ；1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 8.54 (1H, br t, NH), 7.81 (2H, m, H-2, 6), 7.50 (1H, m, H-4), 7.45 (2H, m, H-3, 5), 7.15 (2H, d, J = 8.6, H-2', 6'), 6.86(2H, d, J = 8.6, H-3', 5'), 3.71 (3H, s, 4'-OCH3), 3.45 (2H, t, J = 7.0, H-8'), 2.77 (2H, t, J = 7.0, H-7')；13C-NMR (DMSO-d6, 100 MHz) δ: 166.2 (C-7), 157.8 (C-4'), 134.7 (C-1), 131.5 (C-4), 131.2 (C-1'), 129.7 (C-2, 6), 128.4 (C-3, 5), 127.2 (C-2', 6'), 113.9 (C-3', 5'), 55.1 (4'-OCH3), 41.2 (C-8'), 34.3 (C-7')。之上數(shù)據(jù)信息與文獻(xiàn)資料報(bào)導(dǎo)的N-benzoyltyrarnine methyl ether的波譜數(shù)據(jù)信息基本一致，故評(píng)定化學(xué)物質(zhì)6為N-benzoyltyrarnine methyl ether。

化學(xué)物質(zhì)7 乳白色不定形粉末狀，改進(jìn)碘化鉍鉀顯色反應(yīng)呈陽(yáng)性；C17H17NO3, ESI-MS m/z 284 ；1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 7.37 (2H, d, J = 8.2 Hz, H-2', 6'), 7.29 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-β), 7.00 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-2'', 6''), 6.67 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-3'', 5''), 6.77 (2H, d, J = 8.2 Hz, H-3', 5'), 6.38 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-α), 3.30 (2H, t, J = 7.4 Hz, H-2), 2.63 (2H, t, J = 7.4 Hz, H-l)；13C-NMR (DMSO-d6, 100 MHz) δ: 165.6 (C=O), 159.0 (C-4''), 155.7 (C-4'), 138.9 (C-β), 129.7 (C-2', 6'), 129.7 (C-1'), 129.4 (C-2'', 6''), 126.0 (C-1''), 118.7 (C-α), 115.9 (C-3', 5'), 115.3 (C-3'', 5''), 40.9 (C-1), 34.5 (C-2)。之上數(shù)據(jù)信息與文獻(xiàn)資料報(bào)導(dǎo)的N-p-coumaroyltyramine的波譜數(shù)據(jù)信息基本一致，故評(píng)定化學(xué)物質(zhì)7為N-p-coumaroyltyramine。

化學(xué)物質(zhì)8 乳白色不定形粉末狀，改進(jìn)碘化鉍鉀顯色反應(yīng)呈陽(yáng)性；C27H30N2O4, ESI-MS m/z 447 ；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 7.72 (2H, m, H-3', 7'), 7.52 (1 H, m, H-5'), 7.44 (2H, m, H-4', 6'), 7.31 (2H, m, H-19), 7.29 (1H, m, H-17), 7.27 (2H, m, H-18), 7.26 (2H, m, H-16), 7.24 (2H, m, H-15), 7.17 (1H, m, H-10), 7.14 (2H, m, H-8, 12), 7.06 (2H, m, H-9, 11), 6.81 (1H, d, J = 7.7 Hz, 1-NH), 6.07 (1 H, d, J = 8.6 Hz, 4-NH), 4.78 (1H, d, J = 8.1, 5.9 Hz, H-2), 4.34 (1H, d, J = 8.1, 5.9 Hz, H-5), 3.82 (1H, dd, J = 11.3, 4.2 Hz, H-20), 3.93 (1H, dd, J = 11.3, 4.9 Hz, H-20), 3.06 (1H, dd, J = 13.7, 8.3 Hz, H-13), 3.21 (1H, dd, J = 13.7, 5.9 Hz, H-13), 2.76 (2H, m, H-6), 2.02 (3H, s, H-2'')；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 170.9 (C-1''), 170.4 (C-3), 167.3 (C-1'), 136.8 (C-7), 136.7 (C-14), 133.8 (C-2'), 132.1 (C-5'), 129.4 (C-16, 18), 129.3 (C-9, 11), 129.0 (C-15), 128.9 (C-4', 6'), 128.8 (C-8), 128.6 (C-19), 127.3 (C-13), 127.2 (C-3', C-7'), 126.9 (C-10), 64.7 (C-20), 55.1 (C-2), 49.6 (C-5), 38.6 (C-13), 37.6 (C-6), 20.94 (C-2'')。之上數(shù)據(jù)信息與文獻(xiàn)資料報(bào)導(dǎo)的aurantiamide acetate的波譜數(shù)據(jù)信息基本一致，故評(píng)定化學(xué)物質(zhì)8為aurantiamide acetate。