2.4病菌16SrRNA分子結(jié)構(gòu)評(píng)定

16S rRNA PCR物質(zhì)電泳原理結(jié)果(圖4)說(shuō)明,從病菌 菌種的DNA模版中增加出尺寸約為1400 bp上下的片 段,合乎預(yù)期成果,系列號(hào)為MN736843,將基因序列根據(jù)NCBI開展同宗核對(duì)剖析,數(shù)據(jù)顯示與該編碼序列同 源性能比最大的菌種均是豚鼠氣單胞菌，將編碼序列與已經(jīng)知道 編碼序列搭建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖5),能夠 看得出,該菌種與豚鼠氣單胞菌(A. caviae)聚為一個(gè)支系,融合生化實(shí)驗(yàn)和革 蘭氏上色等結(jié)果,可明確該分離出來(lái)菌種為豚鼠氣單胞菌。

2.5人力感柒

歷經(jīng)人力感柒的羅氏沼蝦發(fā)生與當(dāng)然海域生病蝦 類似的病癥,感柒羅氏沼蝦發(fā)生鰓絲腫脹,鰓絲表層出 現(xiàn)黑色斑等病癥(圖6),感柒組到7日內(nèi)所有身亡，而對(duì) 照組沒(méi)有發(fā)現(xiàn)異常。從人力感柒瀕臨死亡的羅氏沼蝦 肝肝脹機(jī)構(gòu)內(nèi)再度開展病菌分離純化，將分離出來(lái)菌種再 次開展生理學(xué)生化實(shí)驗(yàn)及其分子結(jié)構(gòu)學(xué)評(píng)定等,獲得與原分 離菌種同樣的研究結(jié)果,證實(shí)該分離出來(lái)菌種為羅氏沼蝦病原菌-豚鼠氣單胞菌(A.caviae).

3探討

豚鼠氣單胞菌(A.caviae)歸屬于氣單胞菌科.氣單 胞菌屬，是威協(xié)我國(guó)水產(chǎn)品養(yǎng)殖小動(dòng)物身體健康的首要病原菌之一,可以造成 日本鰻鱺(Anguillajaponica).胡子鯰(Clarias fuscus).中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis). 我國(guó) 草蝦(Penaeus chinensis). 南方地區(qū)鲇(Silurus meriordinalis Chen)、中華鱉(Triongxsinensis)等多種多樣水產(chǎn)品小動(dòng)物感柒。此次科學(xué)研究從生病的羅氏沼蝦身體分離出來(lái)出發(fā)病 菌，井將獲得的優(yōu)點(diǎn)菌種根據(jù)病菌形狀觀查.革蘭氏陽(yáng)性菌染 色、溶血癥實(shí)驗(yàn)及其生理學(xué)生物化學(xué)剖析可判斷該分離出來(lái)菌 株為豚鼠氣單胞菌(A. caniae).其16S rRNA基因序列 搭建進(jìn)化樹,數(shù)據(jù)顯示該分離出來(lái)菌種與豚鼠氣單胞菌聚 為一族,綜合性全部試驗(yàn)結(jié)論可明確該分離出來(lái)菌種為豚鼠 氣單胞菌。應(yīng)用該分離出來(lái)菌種對(duì)身心健康羅氏沼蝦開展人力 感柒.感柒后的羅氏沼蝦主要表現(xiàn)出與當(dāng)然福泉標(biāo)準(zhǔn)下患 病蝦類似的病癥,并對(duì)感柒后的羅氏沼蝦再度開展細(xì) 菌分高提純.獲得與豚鼠氣單胞菌類似的菌種,進(jìn)一一步: 證實(shí)了該病菌在羅氏沼蝦身體的高致病,與此同時(shí)也對(duì)豚 鼠氣單胞菌的病源科學(xué)研究材料完成了一定的填補(bǔ)。

對(duì)分離出來(lái)菌種的身理生物化學(xué)特點(diǎn)開展評(píng)定,該病菌 對(duì)抗霉素、阿拉伯糖、葡萄糖水產(chǎn)酸、蛋白胨水.精氨酸水 解酶、果膠.苯丙氨酸為呈陽(yáng)性:氯化氫.丙二酸鹽.賴氨 酸掉發(fā)酶。鳥氨酸脫羧酶。枸緣磷酸鹽.V-P .葡萄糖酸鹽 為呈陰性,豚鼠氣單胞菌的身理生物化學(xué)特點(diǎn)存有菌種差別 性，本科學(xué)研究分高的豚鼠氣單胞菌對(duì)枸櫞酸鹽和蛋白胨 水的評(píng)定結(jié)論與方式氣單胞菌反過(guò)來(lái),發(fā)生以上差別的 緣故可能是因?yàn)轱曫B(yǎng)自然環(huán)境、氣候條件.所在位置.宿主 體不一樣引起的?，F(xiàn)階段.,在海產(chǎn)小動(dòng)物中廣泛應(yīng)用抗菌藥物 物對(duì)病癥開展預(yù)防，此次分析的藥敏試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果顯示,該 分離出來(lái)菌種對(duì)頭孢曲松鈉.氣菌素、氟苯尼考四環(huán)素、多西 環(huán)素s種藥品高寬比比較敏感,對(duì)卡那霉素1種藥品輕中度敏 感.對(duì)環(huán)丙沙星。環(huán)丙沙星、羅紅霉素.羅紅霉素新生兒霉 素.氨芐青霉素.復(fù)方新諾明和利福平8種藥品耐藥性。此次 科學(xué)研究結(jié)果與已報(bào)導(dǎo)的其它種類分高于的脈鼠氣單胞菌 的藥品敏感度存有一-定差別1,這說(shuō)明豚鼠氣單胞菌 對(duì)藥品敏感度存有一-定的差別,這也許和不一樣的地域。 不一樣飼養(yǎng)條件中藥品類型及其藥品應(yīng)用水平不一樣有關(guān)于病菌的評(píng)定方式有很多,比如環(huán)受體等溫過(guò)程擴(kuò) 增技術(shù)性.單抗和間接性ELISA法等.16SrRNA在 病菌性染色體的基因中普遍現(xiàn)象,含高寬比傳統(tǒng)區(qū)城且 分子大小自始至終。根據(jù)I6SrRNA基因序列剖析具備簡(jiǎn) 易、高效率等優(yōu)勢(shì)，早已變成病菌評(píng)定及其親緣關(guān)系分辨 的一一種合理的專用工具,可是由于I6SrRNA很有可能存有一一些 不清楚的結(jié)構(gòu)域且遺傳基因數(shù)量比較有限,因此給編碼序列的剖析帶 來(lái)不方便，此次分析對(duì)分離出來(lái)病菌的16SrRNA遺傳基因以及系 統(tǒng)進(jìn)化樹開展剖析,并與生理學(xué)生物化學(xué)特點(diǎn)和革蘭氏染色 等方式緊密結(jié)合,從而判定該分離出來(lái)菌種為脈鼠氣單胞菌， 提升了病菌評(píng)定結(jié)論的準(zhǔn)確度和真實(shí)度。

現(xiàn)階段，已評(píng)定的氣單胞菌屬關(guān)鍵分離出來(lái)自人與不一樣 的小動(dòng)物宿主:從生病水生物及其人感柒的創(chuàng)口中分離出來(lái)-有的還能在食品中分離純化獲得PPABLOS等 從拉肚子患者.飲用水及其食品類分離出來(lái)的氣單型菌開展評(píng)定﹐ 結(jié)果顯示,人源氣單胞菌和飲水資源氣單型菌比較貼近， 表明氣單型菌能夠 根據(jù)水資源散播到人們,進(jìn)而造成人 癸造成病癥P樊海公平*從產(chǎn)生白血病的中國(guó)對(duì)蝦 分離純化出豚鼠氣單胞菌和嗜水汽單胞菌,可是有關(guān) 從羅氏沼蝦中分開到豚鼠氣單胞菌及其以豚鼠氣單胞 菌感柒為主導(dǎo)的羅氏沼蝦病癥的消息較少,羅氏沼蝦豚 鼠氣單胞菌是不是可以造成 人與別的水生物病發(fā)﹐它 與人玄氣單胞菌有沒(méi)有親緣關(guān)系,及其其發(fā)病原理均有 特進(jìn)一步科學(xué)研究。因而,中后期還必須進(jìn)一步開展此病璧 菌的臨床流行病學(xué)調(diào)研，掌握其患病的規(guī)律性,并確定其傷害 的目標(biāo)及其科學(xué)研究其致胸原理等,將更有助于對(duì)該發(fā)病 菌造成的羅氏沼蝦病癥實(shí)現(xiàn)合理的防治,推動(dòng)羅氏沼 蝦產(chǎn)業(yè)鏈的身心健康發(fā)展趨勢(shì)-

抗菌素等藥品是維持養(yǎng)魚業(yè)小動(dòng)物身心健康生產(chǎn)制造以 及病 例治的有效途徑。但是因?yàn)楫?dāng)今水產(chǎn)市場(chǎng)抗生素 素類型過(guò)多,及其服藥習(xí)慣性不一樣，導(dǎo)政漁藥應(yīng)用相對(duì)性 錯(cuò)亂,病菌的耐藥性狀況也越來(lái)越嚴(yán)重,因此在海產(chǎn)小動(dòng)物 中對(duì)抗生素藥物的選用和應(yīng)用一定要有合理性,對(duì)病 甌菌揉應(yīng)用抗菌素等用藥治療,務(wù)必參照其藥敏試驗(yàn)試驗(yàn) 結(jié)果,嚴(yán)苛遵循水產(chǎn)品藥品應(yīng)用的有關(guān)要求﹐與此同時(shí)還需要注 愈穿行服藥及其藥品應(yīng)用濃度值.盡量減少藥品的殘余， 此次科學(xué)研究為羅氏沼蝦豚鼠氣單廄菌評(píng)定及其病蟲害劭治 給予一定的參考資料和理論基礎(chǔ)-

4結(jié)果

本分析從生病的羅氏沼蝦中分離出來(lái)出一糅病原菌- 豚鼠氣單胞菌,并根據(jù)對(duì)其菌體形狀特點(diǎn).生理學(xué)生物化學(xué)鑒 定并融合16SrRNA編碼序列剖析,可判定該病原菌為豚鼠 氣單慰菌.人力感柒試驗(yàn)驗(yàn)證了該病原菌對(duì)羅氏沼蝦 具備極強(qiáng)的高致病.藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該病原菌死對(duì)頭 泡曲松.氯霉素.氟苯尼考.四環(huán)素.鹽酸多西環(huán)素5種藥品 高寬比比較敏感,而對(duì)環(huán)丙沙星.環(huán)丙沙星.羅紅霉素.阿奇霉 素.新生兒菌素氨芐青霉素.復(fù)方新諾明和利福平8種藥品 耐藥性,因而可參照藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)羅氏沼蝦豚鼠氣單 巍菌應(yīng)用適宜的藥品開展醫(yī)治﹐以達(dá)到最佳醫(yī)治效 果-水研究室選的環(huán)丙沙星和氯霉素僅用于科學(xué)研究菌棵 的耐藥性，并不可以用來(lái)生產(chǎn)制造,面氟苯尼考能夠 做為羅氏 沼蝦豚鼠氣單脫菌的首要醫(yī)治藥品。這也握醒養(yǎng)殖場(chǎng) 和科研生產(chǎn)制造員工在羅氏沼蝦飼養(yǎng)環(huán)節(jié)中,要在我國(guó)覺 許藥品應(yīng)用范疇以內(nèi),選擇最好眩感藥品用于開展病 害預(yù)防,提升服藥的目的性，保證有效謹(jǐn)慎服藥,盡可能 降低藥品殘余.o研籠為進(jìn)一步討論羅氏沼蝦豚鼠氣 單胞菌的評(píng)定和預(yù)防給予一定的參照.