克霉唑栓為咪唑類廣譜抗真芮藥，是醫(yī)治真蔭感柒病癥的生成抗菌藥物，對(duì)各種細(xì)菌尤其是白色念珠菌具備不錯(cuò)的抑菌功效?？嗣惯蛩w屬于第二代咪唑類的抗真菌藥物，1981年和咪康嘩、酮康嘩、益康嘩等抗真菌藥物在赴美上市。英國(guó)食品類和藥監(jiān)局(FDA)現(xiàn)階段只準(zhǔn)許了嘩類、嘧啶類和多烯類等抗真菌藥物用以身體的全身細(xì)菌醫(yī)治。現(xiàn)階段已發(fā)覺(jué)大部分抗真菌藥物具備細(xì)胞毒性極強(qiáng)的難題。因而必須進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)小動(dòng)物源食物中克霉唑栓含量的檢驗(yàn)。

現(xiàn)階段世界各國(guó)對(duì)克霉唑栓的測(cè)量關(guān)鍵聚集在藥物層面，選用的方式多見(jiàn)高效液相色譜色譜法。關(guān)于環(huán)境和食品類克霉唑栓測(cè)量科學(xué)研究較少，Assress等使用了UHPLC-QTOF-MS對(duì)污水處理中克霉唑栓以內(nèi)的嘩類農(nóng)藥殺菌劑開(kāi)展總體目標(biāo)定量分析以及他新起污染物質(zhì)的挑選，張凱等選用UPLC-MS/MS測(cè)定方法了牛肉中克霉嘩以內(nèi)的8種抗真菌藥物含黃。加快有機(jī)溶劑獲取(ASE)具備獲取高效率、常用有機(jī)溶劑少、再現(xiàn)性好等優(yōu)勢(shì)，氣象色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)將色譜儀高效率的分離出來(lái)效率和質(zhì)潛的高靈敏、強(qiáng)抗十?dāng)_的臨測(cè)工作能力緊密結(jié)合，完成了在繁雜栽培基質(zhì)環(huán)境下對(duì)目的物的精確測(cè)量。相關(guān)小動(dòng)物源食物中克霉唑栓殘余的GC-MS/MS測(cè)量世界各國(guó)并未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。文中以環(huán)己烷/乙酸丁酯為獲取有機(jī)溶劑，加快有機(jī)溶劑獲取小動(dòng)物源食物中殘存的克霉唑栓，萃取液經(jīng)疑膠滲入色譜儀凈化處理后開(kāi)展GC-MS/MS剖析，放射性核素內(nèi)標(biāo)法定量分析，該辦法可以考慮小動(dòng)物源食物中克霉唑栓殘余最的確診和現(xiàn)蕾期剖析。

1原材料與方式

1.1原材料與儀器設(shè)備

生豬肉、雞脯肉、豬人體脂肪、豬腰、牛肝、豬腰子試品市面上；克霉嘩標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(CASN0.23593-75-1，99.9％純凈度)法國(guó)Dr.EhrenstorferCml)H；克霉唑栓-d5(99.0％純凈度)澳大利亞CDN企業(yè)；色譜純乙腈、正己烷和乙酸丁酯法國(guó)Merck企業(yè)。
Milli-QAdvantageA10超純水系統(tǒng)：英國(guó)Millipore公司；STl6R離心脫水機(jī)：英國(guó)Thermo企業(yè)；GM300組織搗碎機(jī)：法國(guó)萊馳企業(yè)；MS105DU電子分析天平、PL203電子分析天平：梅特勒企業(yè)；T18型均質(zhì)器法國(guó)IKA企業(yè)；DionexASE350加快有機(jī)溶劑獲取儀：英國(guó)Dionex企業(yè)；GPCVario疑膠滲入色潛儀：法國(guó)LC-Tech企業(yè)；ThermoFisherTrace1300-TSQ8000三重四極桿液相色潛-質(zhì)譜分析液質(zhì)儀：英國(guó)Therrno企業(yè)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)液配置

取克霉唑栓標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10mg，用乙腈融解并轉(zhuǎn)換至100mL容量瓶中，用乙腈滴定劑，制取100μg/mL克霉唑栓規(guī)范貯備液；取克霉嘩-d₅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1mg，用乙腈融解并轉(zhuǎn)換至10mL容量瓶中，用乙腈滴定劑，制取100μg/mL克霉嘩-d₅規(guī)范貯備液。用乙腈稀釋液配置濃度值分別為1、2、5、20、50、100μg/L的全系列規(guī)范工作中水溶液，其巾克霉嘩-d₅放射性核素內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量濃度均為20μg/L。

1.2.2試件制取

取有象征性生豬肉、雞脯肉、豬人體脂肪、豬腰、牛肝、豬腰子試品試品各500g，將其剁碎后，用組織搗碎機(jī)將試品生產(chǎn)加工成稠狀，攪拌，裝進(jìn)干凈的盛樣器皿內(nèi)，密封性并標(biāo)出標(biāo)識(shí)。

1.2.3加快有機(jī)溶劑(ASE)獲取

稱量3.0g制取好的試品并轉(zhuǎn)換至陶瓷研缽中，添加60μL、濃度值為1.0μg/mL的克霉唑栓-d₅標(biāo)液，再添加60目凹凸棒土5g并充足碾磨，遷移碾磨好的試品于10mL的獲取池里，開(kāi)展加快有機(jī)溶劑(ASE)獲取，獲取標(biāo)準(zhǔn)為：獲取有機(jī)溶劑為環(huán)己烷和乙酸丁酯，容積比是1:1，獲取溫度100℃，加溫并靜態(tài)數(shù)據(jù)獲取5min，對(duì)獲取池容積30％的獲取有機(jī)溶劑開(kāi)展N2吹掃60s后獲得萃取液。將萃取液遷移至50mL圓底燒瓶中，在35℃水浴中，根據(jù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至低于3mL，遷移剩下液態(tài)至10mL標(biāo)尺離心管架中，加補(bǔ)容積比是1:1的環(huán)己烷和乙酸丁酯至3mL，制取待凈化處理液，預(yù)留。

1.2.4疑膠滲入色譜儀(GPC)凈化處理

疑膠滲入色譜儀(GPC)標(biāo)準(zhǔn)以下：凈化處理柱：500mm×10mm，裝填10gBioBeads-X3填充料，柱床高32cm；流動(dòng)性相：容積比是1:1的環(huán)己烷和乙酸丁酯，流動(dòng)速度為1.0mL/min；試品定量分析環(huán)為1mL；預(yù)滲濾容積為17mL；過(guò)柱容積為15mL；清理容積為5mL。稱量3.0g制取好的試品并轉(zhuǎn)換至陶瓷研缽中，添加60μL、濃度值為1.0μg/mL的克霉唑栓-d₅標(biāo)液，再添加60目凹凸棒土5g并充足碾磨，遷移碾磨好的試品于10mL的獲取池里，開(kāi)展加快有機(jī)溶劑(ASE)獲取，獲取標(biāo)準(zhǔn)為：獲取有機(jī)溶劑為環(huán)己烷和乙酸丁酯，容積比是1:1，獲取溫度100℃，加溫并靜態(tài)數(shù)據(jù)獲取5min，對(duì)獲取池容積30％的獲取有機(jī)溶劑開(kāi)展N2吹掃60s后獲得萃取液。將萃取液遷移至50mL圓底燒瓶中，在35℃水浴中，根據(jù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至低于3mL，遷移剩下液態(tài)至10mL標(biāo)尺離心管架中，加補(bǔ)容積比是1:1的環(huán)己烷和乙酸丁酯至3mL，制取待凈化處理液，預(yù)留。制取的待凈化處理液1mL根據(jù)疑膠滲入儀按以上標(biāo)準(zhǔn)凈化處理，搜集過(guò)柱液于標(biāo)尺離心管架中。

1.2.5液液分派

將搜集到的過(guò)柱液于45℃的水浴中N2吹至近干，取0.5mL乙腈飽和狀態(tài)的正己烷渦流震蕩融解殘留物，再添加0.5mL正己烷飽和狀態(tài)的乙腈，渦流震蕩并靜放分層次，吸出乙腈層于2mL氣相瓶子中，向標(biāo)尺離心管架中反復(fù)添加0.5mL正己烷飽和狀態(tài)的乙腈反復(fù)實(shí)際操作一次，合拼乙腈層，過(guò)0.22μm濾紙于GC-MS/MS的氣相瓶子中，制取被測(cè)試品水溶液，供GC-MS/MS測(cè)量。

1.2.6栽培基質(zhì)配對(duì)規(guī)范溶液的配制

取有象征性生豬肉、雞脯肉、豬人體脂肪、豬腰、牛肝、豬腰子試品試品各500g，將其剁碎后，用組織搗碎機(jī)將試品生產(chǎn)加工成稠狀，攪拌，裝進(jìn)干凈的盛樣器皿內(nèi)，密封性并標(biāo)出標(biāo)識(shí)。稱量3.0g制取好的試品并轉(zhuǎn)換至陶瓷研缽中，添加60μL、濃度值為1.0μg/mL的克霉唑栓-d₅標(biāo)液，再添加60目凹凸棒土5g并充足碾磨，遷移碾磨好的試品于10mL的獲取池里，開(kāi)展加快有機(jī)溶劑(ASE)獲取，獲取標(biāo)準(zhǔn)為：獲取有機(jī)溶劑為環(huán)己烷和乙酸丁酯，容積比是1:1，獲取溫度100℃，加溫并靜態(tài)數(shù)據(jù)獲取5min，對(duì)獲取池容積30％的獲取有機(jī)溶劑開(kāi)展N2吹掃60s后獲得萃取液。將萃取液遷移至50mL圓底燒瓶中，在35℃水浴中，根據(jù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至低于3mL，遷移剩下液態(tài)至10mL標(biāo)尺離心管架中，加補(bǔ)容積比是1:1的環(huán)己烷和乙酸丁酯至3mL，制取待凈化處理液，預(yù)留。疑膠滲入色譜儀(GPC)標(biāo)準(zhǔn)以下：凈化處理柱：500mm×10mm，裝填10gBioBeads-X3填充料，柱床高32cm；流動(dòng)性相：容積比是1:1的環(huán)己烷和乙酸丁酯，流動(dòng)速度為1.0mL/min；試品定量分析環(huán)為1mL；預(yù)滲濾容積為17mL；過(guò)柱容積為15mL；清理容積為5mL。稱量3.0g制取好的試品并轉(zhuǎn)換至陶瓷研缽中，添加60μL、濃度值為1.0μg/mL的克霉唑栓-d₅標(biāo)液，再添加60目凹凸棒土5g并充足碾磨，遷移碾磨好的試品于10mL的獲取池里，開(kāi)展加快有機(jī)溶劑(ASE)獲取，獲取標(biāo)準(zhǔn)為：獲取有機(jī)溶劑為環(huán)己烷和乙酸丁酯，容積比是1:1，獲取溫度100℃，加溫并靜態(tài)數(shù)據(jù)獲取5min，對(duì)獲取池容積30％的獲取有機(jī)溶劑開(kāi)展N2吹掃60s后獲得萃取液。將萃取液遷移至50mL圓底燒瓶中，在35℃水浴中，根據(jù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至低于3mL，遷移剩下液態(tài)至10mL標(biāo)尺離心管架中，加補(bǔ)容積比是1:1的環(huán)己烷和乙酸丁酯至3mL，制取待凈化處理液，預(yù)留。制取的待凈化處理液1mL根據(jù)疑膠滲入儀按以上標(biāo)準(zhǔn)凈化處理，搜集過(guò)柱液于標(biāo)尺離心管架中。將搜集到的過(guò)柱液于45℃的水浴中N2吹至近干，取0.5mL乙腈飽和狀態(tài)的正己烷渦流震蕩融解殘留物，再添加0.5mL正己烷飽和狀態(tài)的乙腈，渦流震蕩并靜放分層次，吸出乙腈層于2mL氣相瓶子中，向標(biāo)尺離心管架中反復(fù)添加0.5mL正己烷飽和狀態(tài)的乙腈反復(fù)實(shí)際操作一次，合拼乙腈層，過(guò)0.22μm濾紙于GC-MS/MS的氣相瓶子中，制取被測(cè)試品水溶液，供GC-MS/MS測(cè)量。制取沒(méi)有被測(cè)成分的空缺栽培基質(zhì)水溶液五份各1mL，N2烘干，再各取克霉唑栓標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10mg，用乙腈融解并轉(zhuǎn)換至100mL容量瓶中，用乙腈滴定劑，制取100μg/mL克霉唑栓規(guī)范貯備液；取克霉嘩-d5標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1mg，用乙腈融解并轉(zhuǎn)換至10mL容量瓶中，用乙腈滴定劑，制取100μg/mL克霉嘩-d₅規(guī)范貯備液。用乙腈稀釋液配置濃度值分別為1、2、5、20、50、100μg/L的全系列規(guī)范工作中水溶液，其巾克霉嘩-d₅放射性核素內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量濃度均為20μg/L。配置好的1、2、5、20、50、100μg/L的全系列規(guī)范工作中水溶液1mL復(fù)溶，對(duì)得起1、2、5、20、50、100μg/L的系列產(chǎn)品栽培基質(zhì)配對(duì)規(guī)范工作中水溶液，在其中克霉唑栓-d₅放射性核素內(nèi)標(biāo)底濃度值均為20μg/L。