目地研發(fā)冰凍人血清蛋白α-胃蛋白酶催化劑的活性濃度值備選二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)物質(zhì)，做為數(shù)值傳播的規(guī)范。方式參考JJF 1343—2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計(jì)學(xué)原理》和JJF 1644—2017《臨床酶學(xué)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制》規(guī)定開(kāi)展均衡性、可靠性、公差配合點(diǎn)評(píng)；協(xié)同6家根據(jù)我國(guó)質(zhì)量認(rèn)證國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（CNAS）認(rèn)同的校正試驗(yàn)室對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開(kāi)展時(shí)間常數(shù)，鑒定其均衡性、可靠性和時(shí)間常數(shù)引進(jìn)的測(cè)量不確定度，測(cè)算拓展測(cè)量不確定度。結(jié)果國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)勻稱(chēng)性和可靠性均優(yōu)良，互通性點(diǎn)評(píng)數(shù)據(jù)顯示，4個(gè)基本監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的精確測(cè)量值均坐落于95%可信區(qū)間內(nèi)。時(shí)間常數(shù)結(jié)果：水準(zhǔn)1為（106.3±4.3）U/L(k=2)，水準(zhǔn)2為（268.1±7.9）U/L(k=2)。結(jié)果研發(fā)的冰凍人血清蛋白α-胃蛋白酶催化劑的活性濃度值備選二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)物質(zhì)標(biāo)識(shí)值靠譜，勻稱(chēng)性、可靠性不錯(cuò)，具備公差配合。

血清蛋白、小便α-胃蛋白酶精確測(cè)量是醫(yī)學(xué)上最常見(jiàn)的試驗(yàn)室檢查指標(biāo)值之一，在胰腺疾病，尤其是急性膽囊炎的確診、功效觀查中有著關(guān)鍵功效。胃蛋白酶是急性膽囊炎初期檢測(cè)指標(biāo)值，為處理醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血清淀粉酶精確測(cè)量效果的準(zhǔn)確性，完成精確測(cè)量效果的可溯源性和醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果相比、雙邊協(xié)定，降低反復(fù)查驗(yàn)，緩解病患?jí)毫Γ驹囼?yàn)室制取了兩個(gè)水準(zhǔn)的冰凍人血清蛋白α-胃蛋白酶催化劑的活性濃度值備選二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)物質(zhì)。

1原材料和方式

1.1儀器設(shè)備與實(shí)驗(yàn)試劑

cobas 8000自動(dòng)式生化儀（法國(guó)羅氏公司）及配套設(shè)施實(shí)驗(yàn)試劑、校正品和質(zhì)控品，U-3310分光分光光度計(jì)（日本日立企業(yè)）。參照方式實(shí)驗(yàn)試劑：N-2-甲基乙基哌嗪-N'-乙基磺酸（生產(chǎn)批號(hào)為017K5410，英國(guó)Sigma企業(yè)），4,6-亞乙基-4-磺酰氯-α-（1->4)-D-麥芽糖七糖（生產(chǎn)批號(hào)為121214A，北京市阿匹斯企業(yè)）。有證參照化學(xué)物質(zhì)IRMM/IFCC-456（歐盟國(guó)家參照化學(xué)物質(zhì)和精確測(cè)量研究所）。

1.2國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣版制取

挑選外型清澈，無(wú)脂血、新生兒黃疸和溶血癥的樣版。乙肝病毒感染乙肝表面抗原、梅毒螺旋體抗原、丙肝病毒抗體、人們免疫缺陷病毒抗體檢測(cè)陰性。經(jīng)2次殺菌過(guò)慮后，散裝至無(wú)菌檢測(cè)搜集管內(nèi)，每一個(gè)1 m L，共300支。制取了兩個(gè)水準(zhǔn)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可-70℃冰柜儲(chǔ)存。

1.3國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)點(diǎn)評(píng)

依照J(rèn)JF 1343—2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計(jì)學(xué)原理》和JJF 1644—2017《臨床酶學(xué)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制》規(guī)定開(kāi)展均衡性、可靠性、公差配合點(diǎn)評(píng)，全部樣版均選用cobas 8000自動(dòng)式生化儀精確測(cè)量。

1.3.1勻稱(chēng)性檢測(cè)

取15支樣版，在一個(gè)批號(hào)內(nèi)進(jìn)行精確測(cè)量，每一個(gè)樣版反復(fù)精確測(cè)量3次。結(jié)果選用單要素方差分析開(kāi)展點(diǎn)評(píng)。方差分析結(jié)果中的小組之間標(biāo)準(zhǔn)差MSamong>組內(nèi)方差MSwithin時(shí)，樣版間勻稱(chēng)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差sbb計(jì)算方法為：

式中ubb,rel為α-胃蛋白酶因?yàn)闃影娌痪庑砸M(jìn)的測(cè)量不確定度份量。

1.3.2可靠性點(diǎn)評(píng)

選用同歩可靠性開(kāi)展評(píng)定，結(jié)果選用多元回歸分析的t檢驗(yàn)開(kāi)展點(diǎn)評(píng)，基本上實(shí)體模型為：Y=β0 β1X，式中β1、β0為回歸系數(shù)，X為時(shí)間，Y為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特征值。（1）短期內(nèi)可靠性點(diǎn)評(píng)。點(diǎn)評(píng)運(yùn)送對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)未確定特點(diǎn)值的危害。各自于第一、2、三天從冰柜中取下樣版，放進(jìn)液態(tài)氮冷藏包裝木箱，與第5天從存儲(chǔ)電冰箱中拿出的樣版與此同時(shí)開(kāi)展精確測(cè)量。每一個(gè)水準(zhǔn)一個(gè)監(jiān)控點(diǎn)提取2支樣版，4個(gè)監(jiān)控點(diǎn)累計(jì)8支樣版。在一個(gè)批號(hào)內(nèi)進(jìn)行精確測(cè)量，每一個(gè)樣版反復(fù)精確測(cè)量3次。（2）長(zhǎng)期性可靠性點(diǎn)評(píng)。點(diǎn)評(píng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)-70℃儲(chǔ)存一年的可靠性。各自于第0、7、31、90、182天從-70℃冰柜中取下樣版，放進(jìn)液態(tài)氮瓶中，與第365天從-70℃冰柜中拿出的樣版與此同時(shí)開(kāi)展精確測(cè)量。每一個(gè)水準(zhǔn)一個(gè)監(jiān)控點(diǎn)提取3支樣版，共6個(gè)監(jiān)控點(diǎn)，累計(jì)18支樣版，在一個(gè)批號(hào)內(nèi)進(jìn)行精確測(cè)量，每一個(gè)樣版反復(fù)精確測(cè)量3次。（3）應(yīng)用時(shí)可靠性點(diǎn)評(píng)。點(diǎn)評(píng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)用時(shí)存儲(chǔ)于電冰箱（2～8℃）或室內(nèi)溫度（20～25℃）的可靠性。各自于24、6、4、2 h從-70℃冰柜中取下4支樣版，電冰箱或室內(nèi)溫度各置放2支，與精確測(cè)量前從-70℃冰柜中拿出的樣版與此同時(shí)開(kāi)展精確測(cè)量。每一個(gè)水準(zhǔn)一個(gè)監(jiān)控點(diǎn)提取4支樣版，電冰箱或室內(nèi)溫度自然環(huán)境各置放2支，開(kāi)展可靠性檢測(cè)，共五個(gè)監(jiān)控點(diǎn)，累計(jì)20支樣版。在一個(gè)批號(hào)內(nèi)進(jìn)行精確測(cè)量，每一個(gè)樣版反復(fù)精確測(cè)量3次。（4）可靠性引進(jìn)的測(cè)量不確定度。由可靠性引進(jìn)的測(cè)量不確定度計(jì)算方法為：us=s（β1）×X，式中us為由可靠性引進(jìn)的測(cè)量不確定度，s（β1）為β1的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，X為給出的保留限期。

1.3.3公差配合點(diǎn)評(píng)

公差配合選用最小二乘法開(kāi)展多元線性回歸剖析。（1）對(duì)照品監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。試驗(yàn)室參考2006年國(guó)際性檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)溯源性協(xié)同聯(lián)合會(huì)建議的α-胃蛋白酶參照精確測(cè)量程序流程（37℃）創(chuàng)建一級(jí)參照方式。（2）臨床醫(yī)學(xué)點(diǎn)評(píng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。系統(tǒng)軟件1：法國(guó)羅氏公司cobas 8000自動(dòng)式生化儀及配套設(shè)施實(shí)驗(yàn)試劑（AMY384295）、校正品（cfas,lot:305596）和精確測(cè)量程序流程；系統(tǒng)軟件2：英國(guó)梅里埃庫(kù)爾特企業(yè)A U 5 8 0 0自動(dòng)式生化儀及配套設(shè)施實(shí)驗(yàn)試劑（AMY6159）、校正品（lot:F6662）和精確測(cè)量程序流程；系統(tǒng)軟件3：法國(guó)羅氏公司cobas 8000自動(dòng)式生化儀、深圳邁瑞生物醫(yī)療電子器件股權(quán)有限責(zé)任公司實(shí)驗(yàn)試劑（AMY142819001）、校正品（059318006）和精確測(cè)量程序流程；系統(tǒng)軟件4：法國(guó)羅氏公司cobas 8000自動(dòng)式生化儀、四川邁克生物股權(quán)有限責(zé)任公司實(shí)驗(yàn)試劑（AMY0518061）、校正品（Lot:366059）和精確測(cè)量程序流程。（3）樣版。共20份新鮮單腎源人血清蛋白樣版，濃度值范疇遮蓋國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度值范疇，每一個(gè)樣版反復(fù)精確測(cè)量2次。

1.4時(shí)間常數(shù)

1.4.1時(shí)間常數(shù)方式

時(shí)間常數(shù)根據(jù)論文參考文獻(xiàn)開(kāi)展（同對(duì)照品監(jiān)測(cè)系統(tǒng)）。兩個(gè)水準(zhǔn)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)每日各自精確測(cè)量3次，持續(xù)精確測(cè)量3 d，共9個(gè)檢測(cè)結(jié)果。

1.4.2時(shí)間常數(shù)方法

由6家根據(jù)我國(guó)質(zhì)量認(rèn)證國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)認(rèn)同的參照（校正）試驗(yàn)室協(xié)同時(shí)間常數(shù)。

1.4.3時(shí)間常數(shù)以及引進(jìn)的測(cè)量不確定度測(cè)算

依據(jù)測(cè)量數(shù)據(jù)信息聽(tīng)從標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布情況，小組之間數(shù)據(jù)信息是不是為等精密度開(kāi)展測(cè)算。

1.4.4結(jié)果檢測(cè)

選用Shapiro-Wilk開(kāi)展標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布檢測(cè)，選用坦斯布斯（Grubbs）法開(kāi)展同組異常值檢測(cè)和每組數(shù)據(jù)信息均值顯著性檢驗(yàn)，小組之間數(shù)據(jù)信息等精密度檢測(cè)選用科克倫（Cochran）法。

1.4.5指標(biāo)值的測(cè)量不確定度鑒定

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的生成規(guī)范測(cè)量不確定度（uCRM）計(jì)算方法為：

式中ub b為由甁間不均衡性引進(jìn)的規(guī)范測(cè)量不確定度，ults為由長(zhǎng)期性（一年）多變性引進(jìn)的規(guī)范測(cè)量不確定度，usts為由短期內(nèi)多變性引進(jìn)的規(guī)范測(cè)量不確定度，uchar為由時(shí)間常數(shù)引進(jìn)的規(guī)范測(cè)量不確定度。拓展測(cè)量不確定度（UCRM）依照公式計(jì)算：UCRM=生成規(guī)范測(cè)量不確定度（uCRM）×κ測(cè)算，式中κ為包括因素，這里κ=2（置信水平為95%）。