五味子屬木蘭科綠色植物，其關(guān)鍵帶有核甘酸、木脂素類、三萜類、黃酮類化合物、多糖類及其桂皮醛等化學(xué)物質(zhì)。具備益氣養(yǎng)陰津、收斂性固澀、補腎壯陽寧心等功效。除此之外，五味子主要成分有維護神經(jīng)中樞系統(tǒng)軟件、抑菌、抗氧化應(yīng)激、抗癌、延緩衰老等功效。

含糖量是由單糖根據(jù)糖苷鍵匯聚生成的分子伴侶，普遍出現(xiàn)于綠色植物、小動物、微生物菌種和水藻等，具備抗氧化性、抗癌、激素調(diào)節(jié)、抗感染等多種多樣藥理學(xué)活力；含糖量傳統(tǒng)式的獲取方式是熱逆流獲取，存有耗能高、時間長、高效率劣等不夠；當代獲取加工工藝有超聲波獲取、微波加熱獲取、酶解獲取等；獲取技術(shù)的探討是含糖量科學(xué)研究的基本，它不但危害獲取的高效率，并且會危害含糖量的活力。

選用勻質(zhì)酶解獲取法獲取五味子含糖量，與傳統(tǒng)式萃取法、流回等方式對比，勻質(zhì)獲取法具備獲取時間較短、高效率、實際操作簡單、等優(yōu)勢，本試驗初次選用勻質(zhì)酶打法獲取五味子含糖量，在單要素的根基上，選用響應(yīng)面法提升含糖量獲取加工工藝，為植物多糖的制造帶來了一種高效率、綠色環(huán)保的方式 ，為五味子含糖量在藥業(yè)、營養(yǎng)食品等方面的運用帶來了理論基礎(chǔ)。

一、原材料與方式

1、儀器設(shè)備與原材料

MH2000電子器件控溫電加熱器套（北京市化玻醫(yī)療機械有限責任公司），T10BS25高速分散機（法國IKA企業(yè)），F(xiàn)A16004N電子器件電子分析天平（上海市箐海儀器設(shè)備有限責任公司），MULTIFUZESER離心機（ThermoFisher企業(yè)），RV10DS25旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（法國IKA企業(yè)），1601紫外線光度計（北京北分瑞利分析儀企業(yè)），F(xiàn)D-1E-50冷凍式干燥機（北京市博醫(yī)實驗室儀器有限責任公司），DC-1000A快速多用途破碎機（浙江武義鼎藏日用金屬制造廠），SU8000透射電鏡（日本日立）；五味子購于長春農(nóng)貿(mào)批發(fā)市場，果膠酶（500u/mg，上海市騰越生物科技有限責任公司），別的實驗試劑均為分析純。

2、實驗方法

（1）五味子含糖量的勻質(zhì)酶解獲取

將干躁后的五味子破碎，先后用乙醚、90%的酒精流回，去除黑色素、脂類類化合物及其低聚木糖和小分子水化學(xué)物質(zhì)，揮發(fā)有機溶劑，獲得預(yù)備處理試品。精確稱量預(yù)備處理后的五味子3.0g，用液料比為25mL/g的果膠酶溶液泡浸12h，在選擇的標準下獲取，隨后以轉(zhuǎn)速比為3500r/min離心式15min，上清液緩解壓力濃縮至一定容積，用95%酒精在4℃標準下醇沉12h，沉積低溫干燥獲得粗多糖。獲取后的沉渣晾曬，用透射電鏡觀查其機構(gòu)毀壞水平。

（2）五味子含糖量的熱逆流獲取

取一定量的預(yù)備處理試品，依照100mL/g有機溶劑原材料比進入純凈水，泡浸12h，在96℃氣溫下流回獲取4h，將干躁后的五味子破碎，先后用乙醚、90%的酒精流回，去除黑色素、脂類類化合物及其低聚木糖和小分子水化學(xué)物質(zhì)，揮發(fā)有機溶劑，獲得預(yù)備處理試品。精確稱量預(yù)備處理后的五味子3.0g，用液料比為25mL/g的果膠酶溶液泡浸12h，在選擇的標準下獲取，隨后以轉(zhuǎn)速比為3500r/min離心式15min，上清液緩解壓力濃縮至一定容積，用95%酒精在4℃標準下醇沉12h，沉積低溫干燥獲得粗多糖。獲取后的沉渣晾曬，用透射電鏡觀查其機構(gòu)毀壞水平。獲得流回獲取粗多糖。獲取后沉渣晾曬，用透射電鏡觀查。

（3）葡萄糖水標曲的制作

精確稱量葡萄糖水標準物質(zhì)加純凈水融解、滴定劑，配置成濃度值0.1g/mL的葡萄糖水標液。

高精密汲取葡萄糖水規(guī)范液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，各自放置25mL具塞試管嬰兒中，放水至2.0mL，添加1.0mL5%甲酸水溶液，最終加5.0mL硫酸，靜放5min，隨后在40℃水浴中加溫30min，以實驗試劑空缺水溶液為對照品，在490nm光波長處測量OD值（Abs），用Abs對濃度值C（mg/mL）重歸，制取標曲C=8.4939×Abs 0.152，在其中R²=0.999，標曲如下所示如圖所示1。

計算方法如下所示：

含糖量得率（%）=（V×C×F×W₂/W₃×W₁）×100；

式中：C-由線性回歸方程測算得到的含糖量的濃度值（g/L），V-融解W₃滴定劑后容積（L），F(xiàn)-計算因素；W₁-原狀品質(zhì)，W₂-由W₁獲取的粗多糖的品質(zhì)（g），W₃-從W₂中稱量用以剖析測量的粗多糖的品質(zhì)。

（4）單要素實驗

固定不動別的標準，各自以加酶量（0.01、0.02、0.04、0.05g）、獲取時間（1、2、3、4、5min）、獲取溫度（35、45、55、65、75℃）和勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比（8000、11500、14500、17500、20500r/min）做為自變量，考察各要素對含糖量提獲得率的危害。

(5)BBD實驗和數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

選擇獲取溫度、獲取時間和勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比三個要素為變量，每一個要素選擇三個水準（表1），以含糖量提獲得率（Y%）為響應(yīng)值，選用BBD試驗方案（表1）、響應(yīng)面提升獲取加工工藝主要參數(shù)。運用Design-Expert8.0手機軟件開展統(tǒng)計數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)分析。

二、結(jié)果與探討

1、單要素試驗

（1）獲取時間對含糖量提獲得率的危害

精確稱量預(yù)備處理試品3.0g，以液料比25mL/g的1%果膠酶液泡浸6h，獲取溫度45℃，勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比14500r/min時，各自調(diào)查獲取時間1、2、3、4、5min對提獲得率的危害，結(jié)果見圖2（a）。由圖2（a）得知，在1～2min內(nèi)含糖量提獲得率隨時間的提升迅速提升，2min時含糖量提獲得率做到最大值，以后隨時間的提高而減少。在1～2min時間段內(nèi)隨時間的提升，細胞組織的粉碎水平提升，胞內(nèi)含糖量的融解、蔓延的效果提升 ，獲取
得率迅速提升，且快速的裁切功能下，含糖量的融解和蔓延均可在較短的時間內(nèi)實現(xiàn)均衡，因而相對性熱逆流獲取，勻質(zhì)酶解獲取必須的時間十分短；2min后，可能是含糖量的糖苷鍵及果膠酶的構(gòu)造在明顯的裁切功能下被毀壞，造成 含糖量提獲得率降低。因而，獲取的最佳時間范疇是1～3min。

（2）獲取溫度對含糖量提獲得率的危害

精確稱量3.0g預(yù)備處理試品，以液料比25mL/g的1%的果膠酶液泡浸6h，獲取時間2min，勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比14500r/min，各自調(diào)查溫度35、45、55、65、75℃對提獲得率的危害，結(jié)果見圖2（b）。由圖2（b）得知，在35～45℃溫度范圍內(nèi)含糖量提獲得率隨溫度提升快速提升，在45℃時提獲得率超過最高值，以后隨溫度提升迅速減少。剖析很有可能的因素是在一定溫度范圍內(nèi)，隨環(huán)境溫度的上升酶促反應(yīng)提升、含糖量在水中的溶解性擴大，含糖量的融解和傳播速度提升，提獲得率迅速提升 。而當溫度提升超出一定區(qū)域內(nèi)，隨環(huán)境溫度的提升，酶的活性減少，含糖量的構(gòu)造也很有可能隨溫度提高而產(chǎn)生變化，導(dǎo)致提獲得率降低。因而，選作45℃為單要素的最好溫度。

（3）勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比對含糖量提獲得率的危害

精確稱量3.0g預(yù)備處理試品，用液料比25mL/g的1%的果膠酶液泡浸6h，獲取溫度45℃，獲取時間2min時，調(diào)查勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比各自為8000、11500、14500、17500、20500r/min時對提獲得率的危害，結(jié)果見圖2（c）。由圖2（c）能夠發(fā)覺，勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比在8000～14500r/min范疇內(nèi)，含糖量提獲得率隨勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比數(shù)的提高而提升，當勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比為14500r/min時獲取率較大 ，以后含糖量提獲得率隨轉(zhuǎn)速比的提升遲緩降低。這可能是勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比數(shù)提升，對固態(tài)原材料機構(gòu)的粉碎水平提升，企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量的固態(tài)機構(gòu)的比表面提升，有機溶劑與試品的了解更充足，含糖量由機構(gòu)內(nèi)部向周邊有機溶劑的傳播速度加速，含糖量的提獲得率提升；勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比數(shù)很大時，含糖量及其酶的構(gòu)造很有可能被毀壞，導(dǎo)致含糖量提獲得率發(fā)生遲緩減少。因而，最好的勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比為14500r/min。

（4）果膠酶使用量對五味子含糖量提獲得率的危害

精確稱量3.0g五味子，用液料比為25mL/g的不一樣含量的果膠酶液泡浸6h，在獲取溫度45℃，獲取的時間為2min，勻質(zhì)轉(zhuǎn)速比14500r/min，各自調(diào)查果膠酶使用量0.010、0.020、0.030、0.040、0.050g對五味子含糖量提獲得率的危害，結(jié)果見圖2（d）。由圖2（d）得知，在0.01～0.04g加酶量范疇內(nèi)，含糖量提獲得率隨果膠酶添加量的提升提獲得率由5.6%遲緩提升到6.6%，這可能是因為果膠酶量提升，酶解實際效果提升，提獲得率提升；在加酶量為0.04g（1.33%）時，含糖量提獲得率超過最大，以后隨果膠酶量的提高而降低。加酶量太多時，很有可能會使含糖量在果膠酶和明顯的裁切功能下，含糖量被溶解，使提獲得率減少。但相比別的3個影響因素，加酶量對含糖量得率危害相比較小，但加酶量對獲取成本費的干擾很大。因而果膠酶的最好加酶量為1.33%，且不會再進一步提升。