（2）黑豆活性多肽抗氧化與酶濃度值的關聯(lián)

參考于慧等的辦法開展DPPH氧自由基清除率的測量。將2mL一定含量的黑豆活性多肽水溶液和2mL的0.12mm01·L^-1DPPH水溶液開展混和，遮光于25℃標準下反映30min，取下后于517nm光波長下開展吸光度值的測量，這時OD值值紀錄為A_i；將以上全過程中的2mLDPPH水溶液用工業(yè)乙醇替代，隨后與2mL黑豆活性多肽水溶液開展反映，此前提下測量吸光度值紀錄為A_j，將2mL工業(yè)乙醇與2mLDPPH水溶液反映的標準做為空缺組，這時紀錄吸光度數(shù)值Ao。結果如圖2所顯示。

由圖2得知，當酶濃度值小于6％時，DPPH清除率伴隨著酶濃度值的提高而擴大，當酶濃度值超出6％時，DPPH清除率伴隨著酶濃度值的上升而減少?？傮w展現(xiàn)先升高后降低的根本原因取決于伴隨著酶濃度值的上升，合理酶濃度值慢慢增加。當?shù)孜锏臐舛戎当３植粫淖?，合理酶濃度值慢慢增加，進而具有抑制效果，使酶水解反應的不完全，故水解反應獲得的抗氧化性肽降低，從而造成 DPPH清除率減少。

（3）黑豆活性多肽抗氧化與pH的關聯(lián)

本試驗取決于科學研究酶法對黑豆蛋白質水解反應的抗氧化性肽的技術提升，故以DPPH為指標值，挑選酶解時間、酶解溫度、酶加上量及其pH為要素開展單要素試驗。更改反映pH，結果見3所顯示。
 

由圖中得知，當pH在7.0～9.0時，DPPH的清除率伴隨著pH的擴大慢慢擴大，當pH為9.00時，DPPH清除率做到最高值，為43.89％。當pH超出9.0時，DPPH清除率慢慢減少。這是由于胰蛋白酶僅有在一定的pH區(qū)段內(nèi)有著較高的活力，當胰蛋白酶處在偏酸或過堿的情況下時胰蛋白酶的構造會被毀壞，造成 一部分蛋白質沒法徹底水解反應，親水性官能團未徹底曝露，促使轉化成肽的抗氧化性涪陛減少。

（4）黑豆活性多肽抗氧化與酶解時間的關聯(lián)

根據(jù)單要素試驗的結果，能夠挑選出各要素的三個水準。因此在這個基礎以上，運用數(shù)據(jù)分析手機軟件創(chuàng)建4要素3水準的Box—Behnken實體模型，開展回復面可靠性設計。更改酶解時間結果見4所顯示。

二、結果與探討

1、單要素試驗結果

（1）黑豆活性多肽抗氧化與酶解溫度的關聯(lián)

將黑豆蛋白質配備成一定含量的水溶液，水浴加熱至100℃開展15min勻質解決。待水溶液降溫至酶解適宜溫度，水浴隔熱保溫，向水溶液中添加0.5mol／L的NaOH調整其pH，酶解一段時間后100℃水浴消滅10min，室內(nèi)溫度下離心式(4000r／min，20min)，將上清液干凍后儲存。結果如圖所示l所顯示。

由圖1得知，當酶解溫度小于50℃，DPPH清除率與氣溫正相關，當氣溫超出50℃時，DPPH清除率逐漸降低。這是由于胰蛋白酶對平穩(wěn)的需求較高，溫度過低會危害酶解的反應速率，使酶解反映不完全，進而危害抗氧化性肽的抗氧化性實際效果。而氣溫過高而會危害胰蛋白酶的活力，使蛋白質酶的活性減少，沒法使蛋白質水解反應成具備抗氧化的小分子活性肽段，進而使DPPH清除率減少。

（2）黑豆活性多肽抗氧化與酶濃度值的關聯(lián)

將2mL一定含量的黑豆活性多肽水溶液和2mL的0.12mm01·L^-1DPPH水溶液開展混和，遮光于25℃標準下反映30min，取下后于517nm光波長下開展吸光度值的測量，這時OD值值紀錄為A_i；將以上全過程中的2mLDPPH水溶液用沒有水酒精替代，隨后與2mL黑豆活性多肽水溶液開展反映，此前提下測量吸光度值紀錄為A_j，將2mL工業(yè)乙醇與2mLDPPH水溶液反映的標準做為空缺組，這時紀錄吸光度數(shù)值Ao。結果如圖2所顯示。

由圖2得知，當酶濃度值小于6％時，DPPH清除率伴隨著酶濃度值的提高而擴大，當酶濃度值超出6％時，DPPH清除率伴隨著酶濃度值的上升而減少。總體展現(xiàn)先升高后降低的根本原因取決于伴隨著酶濃度值的上升，合理酶濃度值慢慢增加。當?shù)孜锏臐舛戎当３植粫淖?，合理酶濃度值慢慢增加，進而具有抑制效果，使酶水解反應的不完全，故水解反應獲得的抗氧化性肽降低，從而造成 DPPH清除率減少。

（3）黑豆活性多肽抗氧化與pH的關聯(lián)

本試驗取決于科學研究酶法對黑豆蛋白質水解反應的抗氧化性肽的技術提升，故以DPPH為指標值，挑選酶解時間、酶解溫度、酶加上量及其pH為要素開展單要素試驗。

試驗標準開展試驗，更改反映pH，結果見3所顯示。

由圖中得知，當pH在7.0～9.0時，DPPH的清除率伴隨著pH的擴大慢慢擴大，當pH為9.00時，DPPH清除率做到最高值，為43.89％。當pH超出9.0時，DPPH清除率慢慢減少。這是由于胰蛋白酶僅有在一定的pH區(qū)段內(nèi)有著較高的活力，當胰蛋白酶處在偏酸或過堿的情況下時胰蛋白酶的構造會被毀壞，造成 一部分蛋白質沒法徹底水解反應，親水性官能團未徹底曝露，促使轉化成肽的抗氧化性涪陛減少。