④放射免疫剖析

放射免疫剖析(radioimmunoassay，RIA)是由Yalow R·S·和Berson S．A．于1954年建立的。該法運用放射性物質(zhì)放射性核素(常見³H、¹²⁵I、³²P等)標識抗原體或抗原，根據(jù)檢驗放射性物質(zhì)抗壓強度對抗原體或抗原開展示蹤劑和檢驗，具備檢驗敏感度高(檢出限達ng至pg乃至fg級)、非特異強、簡單好用的優(yōu)勢。但放射性物質(zhì)同位素標記要在特別的試驗室中開展，標識較艱難，標識和剖析中容易導致公害病。除此之外，因為放射性物質(zhì)原素有一定藥物半衰期，易自主衰減系數(shù)且無法儲存，檢驗時需用特別的實驗儀器，在農(nóng)殘剖析中的使用遭受非常大限定，乃至趨于淘汰。

2、酶免疫力剖析

酶免疫力分析方法(erzyme immunoassay，EIA)是Engrall等于1966建立的。該法用特殊的酶(如乳酸脫氫酶、偏堿磷酸酯酶等)來標識抗原體或抗原，運用抗原和抗體反映的非特異和酶催化反應顯色反應的精確性對抗原和抗體反映開展示蹤劑和檢驗。常見酶免疫力剖析包含酶抑止法(erlzynle inhibition，EI)、酶變大免疫測定法(enzyme—multipledimmlmoassay techniqtle，EMIT)和酶聯(lián)免疫吸咐測定方法(ELISA)。

(1)酶抑止法：此方法運用相應的酶標識抗原體或抗原，酶標識物在產(chǎn)生抗原和抗體一氧化氮合酶時，酶促反應減少，根據(jù)測量酶促反應的變動對抗原和抗體反映開展檢驗。酶抑止法是一種均相免疫力統(tǒng)計分析方法，方式簡單，既能夠用以檢驗抗原，還可以用來檢驗抗原體，但其敏感度較低。

(2)酶變大免疫測定法：此方法將酶標識化肥半抗原、被測化肥及抗原添加反映管開展市場競爭融合反映，離心式除去結(jié)合物，上清液中多余的酶標化肥半抗原量與被測化肥成分呈正比例。

在上清液中添加酶的底物和鉻黑T，酶促顯色反應抗壓強度與被測化肥成分呈正比例。酶變大免疫測定法無需固相媒介，可重復性好，檢驗速度更快。

(3)酶聯(lián)免疫吸咐測定方法：酶聯(lián)免疫吸咐測定方法是將抗原和抗體的非特異反映與酶對底物的高效率催化反應緊密結(jié)合的一種敏感度很高的非均相免疫力剖析技術性。將抗原體或抗原固定不動于固相(如聚乙烯微孔表層)，抗原和抗體反映均衡后，清洗去除不必要的分散物，融合在固相上的酶標識物催化反應底物反映使鉻黑T著色，根據(jù)測量酶促著色抗壓強度對抗原和抗體反映開展檢驗。在具體運用中，檢驗生物大分子抗原體多采取雙抗原夾心巧克力等非市場競爭方式。檢驗化肥、藥品等小分子水選用間接性市場競爭酶聯(lián)免疫吸咐測定方法、包被抗原立即市場競爭酶聯(lián)免疫吸咐測定方法和被子抗原立即市場競爭酶聯(lián)免疫吸咐測定方法。

現(xiàn)階段已創(chuàng)建了多種多樣內(nèi)吸性、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類等藥劑的酶聯(lián)免疫吸咐測定方法，有一些已開發(fā)設計成商業(yè)化免疫力診斷試劑盒。酶聯(lián)免疫吸咐測定方法是當前使用較多的農(nóng)殘免疫力剖析技術性。

3、瑩光免疫力剖析

瑩光免疫力剖析(fluorescerlce immurtoassa3r，F(xiàn)IA)包含瑩光標識免疫力剖析和酶標識瑩光免疫力剖析?，摴鈽俗R免疫力剖析是用相應的瑩光化學物質(zhì)標識抗原體或抗原，運用抗原和抗體反映的非特異和瑩光檢驗的高敏感度對抗原和抗體反映開展示蹤劑和檢驗。經(jīng)典的瑩光免疫力剖析以有機化學瑩光分子結(jié)構(gòu)為標識物，常見的有異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocya-nate，F(xiàn)ITC)、四羥基異硫氰酸羅丹明(tetramethyl rh(Marnine isothic)cyanate，TRITC)等。酶標識瑩光免疫力剖析是在酶標識免疫力剖析選用瑩光底物替代生色底物，是現(xiàn)在非放射免疫剖析中敏感度較高的辦法之一。

瑩光免疫力剖析具備精確度高、易標識、好儲存等優(yōu)勢?？墒谴蟛糠钟袡C化學瑩光化學物質(zhì)的熒光壽命短，在具體運用中因為試品、實驗試劑的本身瑩光和激起光的散射等要素，造成 環(huán)境瑩光高，危害了測量的穩(wěn)定性和敏感度。

(1)非市場競爭方式：瑩光免疫力分析方法檢驗抗原、顆粒物性或生物大分子抗原體一般選用非均相反映和非市場競爭方法，檢驗辦法和基本原理如下所示。

①立即法：先固定不動待測物(含抗原體或抗原的試品)，添加瑩光標識抗原(或瑩光標識抗原體)，開展免疫反應。清洗除去分散物后開展瑩光檢驗。如固相上融合了瑩光標識抗原(或瑩光標識抗原體)，說明固相上面有相對的非特異抗原體或特異性抗體存有，且瑩光抗壓強度與對應抗原體或相對應抗原的量在一定區(qū)域內(nèi)呈正比例。

②雙抗原夾心巧克力法檢驗抗原體：先固定不動抗原，添加待測物開展反映。清洗除去分散物后添加瑩光標識的第二抗原。清洗除去分散物后開展瑩光檢驗。如固相上融合了瑩光標識物，說明有相對的非特異抗原體存有，且瑩光抗壓強度與被測抗原體量在一定區(qū)域內(nèi)呈正比例。

(2)市場競爭方式：化肥等小分子水化學物質(zhì)的瑩光免疫力剖析一般選用市場競爭方式，檢驗辦法和基本原理如下所示。

①瑩光光的偏振免疫力剖析：瑩光光的偏振免疫力剖析(fluorescence polarization immulaoassay，F(xiàn)PIA)是一種運用化學物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)在水溶液中轉(zhuǎn)動速度分子質(zhì)量尺寸呈反比例的特性檢驗總體目標剖析物的方式 。以合理的瑩光化學物質(zhì)標識化肥半抗原，當瑩光標識物遭受一個平面圖偏振光直射時，假如分子結(jié)構(gòu)的短軸與付出的偏振光面平行面，消化吸收的偏振光數(shù)最多，分子結(jié)構(gòu)被激起。當高自旋分子結(jié)構(gòu)返回激發(fā)態(tài)時，發(fā)送一個偏振光?，摴鈽俗R物在水溶液中轉(zhuǎn)動速率越快，發(fā)送的偏振光越弱。因為分子結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)動的速度分子質(zhì)量尺寸呈反比例，因此偏振光變?nèi)醯乃脚c分子結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)動的速率呈正比例。當瑩光標識化肥與相對應抗原融合后，分子質(zhì)量明顯增大，轉(zhuǎn)動速率顯著緩減，偏振光提高。當待測水溶液中有總體目標剖析化肥存有時，總體目標剖析化肥與瑩光標識化肥市場競爭融合抗原，使瑩光標識化肥與抗原的融合降低，偏振光變?nèi)?，變?nèi)醯乃脚c被測化肥的含量在一定區(qū)域內(nèi)呈正比例。

②以瑩光提高和瑩光猝滅為基本的免疫力剖析：該法運用抗原和抗體反映歷程中瑩光標識物或瑩光底物產(chǎn)生瑩光提高或瑩光猝滅功效來檢驗抗原體或抗原。

瑩光光的偏振免疫力剖析、以瑩光提高和瑩光猝滅為基本的免疫力剖析一般是均相免疫力剖析，方式簡單迅速、經(jīng)濟發(fā)展安全性，但環(huán)境的影響限定了方式的敏感度。

③時間辨別螢光免疫力剖析：時間辨別螢光免疫力剖析(tlmeresolution fluorescencc、immunoassav，TRFIA)以鑭系元素螯合物為瑩光標識物或瑩光底物，運用標識的TRFIA物或底物的熒光壽命較長的特性，在環(huán)境瑩光消退后測量標識物或底物的瑩光抗壓強度，可合理減少環(huán)境瑩光的影響，明顯提升 瑩光免疫力研究的敏感度，是二十世紀八十年代免疫力研究的一個關鍵提升。

4、電化學發(fā)光免疫力剖析

電化學發(fā)光是運用化學變化歷程中形成的可以激起電化學發(fā)光劑(常見魯米諾以及化合物)發(fā)亮。電化學發(fā)光免疫力剖析(chemilumirlescence lmmunoassay，CLIA)是把電化學發(fā)光的高靈敏與免疫力研究的高可選擇性融合在一起的少量免疫力剖析技術性，包含電化學發(fā)光標識免疫力剖析、酶標識電化學發(fā)光免疫力剖析(底物發(fā)亮免疫力剖析)等。

(1)電化學發(fā)光標識免疫力剖析：電化學發(fā)光標識免疫力研究的機理和反映方式與放射免疫剖析基本一致，僅僅用電化學發(fā)光劑替代同位素標記抗原體或抗原。電化學發(fā)光劑標識的抗原體或抗原與被測抗原或被測抗原體反映后經(jīng)分離出來、清洗等流程，最終根據(jù)測量亮度單位來明確待測物的成分。

(2)酶標識電化學發(fā)光免疫力剖析：酶標識電化學發(fā)光免疫力研究的機理和反映方式與酶聯(lián)免疫吸咐測定方法基本一致，僅僅用電化學發(fā)光劑替代鉻黑T，以檢驗電化學發(fā)光替代色度測量。

電化學發(fā)光免疫力研究的檢驗敏感度能夠與放射免疫剖析匹敵，方式簡單迅速?，F(xiàn)階段，電化學發(fā)光免疫力剖析出現(xiàn)的首要情況是被測試品中別的成分的環(huán)境影響大，危害定量分析測量效果的精確度。