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農(nóng)藥殘留的酶活性抑制與免疫分析技術(shù)的免疫分析法(七)

來(lái)源:鄭州天順食品添加劑有限公司 發(fā)布時(shí)間:2021-09-12 10:12:28 關(guān)注: 0 次
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5、膠體金標(biāo)識(shí)免疫力剖析:膠體金標(biāo)識(shí)免疫力剖析(colloidal gold immurtoassay,CGIA)一般選用暗紫色的納米金顆粒物來(lái)標(biāo)識(shí)抗原,當(dāng)金標(biāo)抗原集聚到一定相對(duì)密度時(shí),發(fā)生人眼能夠觀查的暗紫色,進(jìn)而可對(duì)抗原和抗體反映結(jié)果開(kāi)展判定測(cè)量或半定量測(cè)量。藥品、生長(zhǎng)激素等小分子水化學(xué)物質(zhì)的膠體金標(biāo)識(shí)免疫力剖析一般選用市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)方法,具體測(cè)定法有色斑漏水法和免疫力色譜分析。

(1)色斑漏水法:在一個(gè)塑膠小盒里添充吸水能力很強(qiáng)的墊材,緊靠墊材中間黏貼一片氰化鈉化學(xué)纖維(nitrocellulose,NC)膜,在膜核心吸咐被子原(CAg),旁邊吸咐二抗(Abz)。清洗除去分散物,封閉式氰化鈉化學(xué)纖維膜上多余的吸咐結(jié)構(gòu)域。將被測(cè)試品與金標(biāo)抗化肥抗原(金一Ab)的混和液體在氰化鈉化學(xué)纖維膜的核心,試品中的化肥與被子原市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)融合金標(biāo)抗化肥抗原。清洗除去分散物。若試品中沒(méi)有被測(cè)化肥,則氰化鈉化學(xué)纖維膜核心展現(xiàn)紅色斑點(diǎn)(金-AbCAg);若氰化鈉化學(xué)纖維膜核心不著色或比空缺試品著色淺,說(shuō)明試品中被測(cè)化肥呈陽(yáng)性。膜邊沿展現(xiàn)紅色斑點(diǎn)(金-Ab-Ab2),說(shuō)明金標(biāo)抗化肥抗原(金-Ab)合理,作為金標(biāo)抗化肥抗原的質(zhì)量控制點(diǎn)。

(2)免疫力色譜分析:免疫力色譜分析以檢測(cè)條做為媒介,將適當(dāng)金標(biāo)抗化肥抗原(金-Ab)吸咐于檢測(cè)條中下部端玻纖上,將適當(dāng)被子原(CAg)吸咐于檢測(cè)條中端氰化鈉化學(xué)纖維膜上,檢測(cè)條中上方則吸咐適當(dāng)二抗(Ab2)。在檢測(cè)條下方端試品墊上滴加待測(cè)試品水溶液或?qū)⒃嚻穳|滲入被測(cè)試品水溶液中,伴隨著水溶液往上蔓延,玻纖上的金標(biāo)抗化肥抗原融解,與試樣中的相對(duì)應(yīng)化肥融合并隨液態(tài)再次上漲。若金標(biāo)抗化肥抗原上的化肥融合結(jié)構(gòu)域被試品中的相對(duì)應(yīng)化肥徹底或一部分占有,金標(biāo)抗化肥抗原就不可以或僅有一部分能與穩(wěn)定在檢測(cè)條中端被子原融合,因此不著色或著色淺,即呈陽(yáng)性。若試品中沒(méi)有相對(duì)應(yīng)化肥,則上漲的金標(biāo)抗化肥抗原與穩(wěn)定在檢測(cè)條中端被子原融合產(chǎn)生金-Ab一CAg一氧化氮合酶而顯暗紫色,即呈呈陰性。如金標(biāo)抗化肥抗原與檢測(cè)條中等偏上端二抗融合并著色,說(shuō)明金標(biāo)抗化肥抗原具備病毒學(xué)活力,二抗吸咐點(diǎn)作為金標(biāo)抗化肥抗原的質(zhì)量控制點(diǎn),二抗不著色說(shuō)明檢測(cè)條無(wú)效。

金標(biāo)免疫力色譜儀結(jié)果可以用人眼觀查,不用珍貴測(cè)試儀器,實(shí)際操作簡(jiǎn)單迅速,可完成判定測(cè)量或半定量測(cè)量,金-抗原-抗原體一氧化氮合酶色調(diào)平穩(wěn)不會(huì)改變,檢驗(yàn)效果能夠長(zhǎng)久儲(chǔ)存。

6、親和力素生物素系統(tǒng)軟件酶聯(lián)免疫剖析:親和力素生物素系統(tǒng)軟件(avidin-biotin system,ABS)中的親和力素是一種糖蛋白,相對(duì)性分子質(zhì)量約65 000,每一個(gè)親和力素分子結(jié)構(gòu)由4個(gè)能和生物素融合的亞基構(gòu)成。生物素分子結(jié)構(gòu)中含活力羧基,相對(duì)性分子質(zhì)量小(244),標(biāo)識(shí)方式簡(jiǎn)單,生物素甲基琥鉑酰亞胺酯可與蛋白、糖等各種類型的尺寸分子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生生物素標(biāo)識(shí)物。生物素與親和力素的融合具備較強(qiáng)的非特異,其感染力較抗原和抗體反映大很多,二者一經(jīng)融合就極其平穩(wěn)。因?yàn)橐粋€(gè)親和力素可與4個(gè)生物素分子結(jié)構(gòu)融合,因而還可以運(yùn)用親和力素生物素輔因子來(lái)變大酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)量(ELISA)數(shù)據(jù)信號(hào),敏感度可提升 8~10倍。如今常見(jiàn)的是親和力素生物素系統(tǒng)軟件酶聯(lián)免疫剖析(ABS—ELISA)包含酶標(biāo)識(shí)親和力素生物素(LAB)系統(tǒng)軟件和橋聯(lián)親和力素生物素一氧化氮合酶(AB*C)系統(tǒng)軟件。因?yàn)橛H和力素生物素系統(tǒng)軟件酶聯(lián)免疫剖析較一般酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)量常用了二種實(shí)驗(yàn)試劑,提升了操控和反映流程,在化肥剖析中運(yùn)用的消息很少。

(七)別的免疫力剖析技術(shù)性

1、脂質(zhì)體變大免疫力剖析:脂質(zhì)體是一種人造的仿真模擬生物膜系統(tǒng),由不飽和脂肪酸分散化在水媒介中產(chǎn)生封閉的雙分子結(jié)構(gòu)單面或雙層膜。在脂質(zhì)體表層裝飾抗原體或抗原,當(dāng)產(chǎn)生抗原和抗體反映時(shí),脂質(zhì)體表層的抗原和抗體一氧化氮合酶可激話補(bǔ)體,造成脂質(zhì)體的融解,釋放出來(lái)寬容在脂質(zhì)體內(nèi)的標(biāo)識(shí)物(如熒光素等),標(biāo)識(shí)物的釋放出來(lái)量與膜表層抗原和抗體一氧化氮合酶的生成量呈正比例,由此確立了脂質(zhì)體免疫力分析方法(1iposome immunoassay,UA)。脂質(zhì)體膜內(nèi)可寬容幾萬(wàn)個(gè)標(biāo)識(shí)物分子結(jié)構(gòu),具備很高的數(shù)據(jù)信號(hào)變大功效,因此變成提高免疫剖析敏感度的重要途徑之一。

2、溫度控制相分離免疫力剖析:溫度控制相分離免疫力剖析是將抗原體或抗原固定不動(dòng)在全智能凝膠劑上,使其在水中快速響應(yīng)。反映完成后,更改凝膠劑的低臨界值改變溫度(1owr critical solutiontemperature,LCST),使一氧化氮合酶隨疑膠沉積而進(jìn)行析出,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)與分散物分離出來(lái)并濃縮抗原和抗體一氧化氮合酶的目地,隨后再開(kāi)展檢驗(yàn),可明顯提升 檢驗(yàn)敏感度。

3、毛細(xì)管電泳免疫力剖析:毛細(xì)管電泳免疫力剖析(capillary electrophoresis immLmoassay,CEIA)是將毛細(xì)管電泳強(qiáng)勁的分離出來(lái)工作能力和免疫力研究的非特異緊密結(jié)合的免疫力剖析技術(shù)性。將含總體目標(biāo)剖析抗原體(或抗原)的試品萃取液經(jīng)毛細(xì)管電泳分離出來(lái),再與對(duì)應(yīng)的抗原(或抗原體)反映,可對(duì)繁雜抗原體或抗原開(kāi)展檢驗(yàn)。毛細(xì)管電泳免疫力剖析試品劑量少,檢驗(yàn)敏感度高,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中取得了普遍的運(yùn)用,在化肥等小分子水化學(xué)物質(zhì)的痕量元素剖析中有著一定的研發(fā)運(yùn)用使用價(jià)值。

4、流動(dòng)性注入免疫力剖析:流動(dòng)性注入免疫力剖析(flow-injection immunoassay,F(xiàn)IIA)分成均相流動(dòng)性注入免疫力剖析和非均相流動(dòng)性注入免疫力剖析,一般 選用標(biāo)識(shí)物。非均相流動(dòng)性注入免疫力剖析將抗原固定不動(dòng)在媒介膜上,做成勻稱一致可按段應(yīng)用的抗原膜帶。將膜帶的一部分安裝于密閉的小型槽體,由流動(dòng)性注入儀將被測(cè)物鍵入槽體,與標(biāo)識(shí)過(guò)的被測(cè)物標(biāo)樣市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)融合固定不動(dòng)在膜上的抗原,高效液相中(或固相上)標(biāo)識(shí)物含量的變動(dòng)水平與待測(cè)物的含量有關(guān),根據(jù)搭配的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)檢驗(yàn)。均相流動(dòng)性注入免疫力剖析是在微槽體開(kāi)展的均相免疫反應(yīng),檢驗(yàn)反映前后左右標(biāo)識(shí)物數(shù)據(jù)信號(hào)的轉(zhuǎn)變。流動(dòng)性注入儀根據(jù)計(jì)算機(jī)語(yǔ)言精準(zhǔn)操縱反映液的類型、流入、流動(dòng)速度、反應(yīng)速度、反映溫度等,具備自動(dòng)進(jìn)樣、自動(dòng)識(shí)別、全自動(dòng)清理、循環(huán)系統(tǒng)反復(fù)剖析等作用,融合免疫力研究的非特異,完成對(duì)大批量試品的高通量測(cè)序持續(xù)剖析。

5、免疫力聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)性:免疫力聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)性是將免疫反應(yīng)和聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)性(polymerase chain reaction,PCR)融合在一起的一種免疫力統(tǒng)計(jì)分析方法。將DNA分子和抗原根據(jù)一定的聯(lián)接分子結(jié)構(gòu)相互連接,DNA做為標(biāo)識(shí)物融合在抗原上,隨后開(kāi)展免疫反應(yīng),產(chǎn)生抗原體一抗原一DNA一氧化氮合酶。將該一氧化氮合酶提純后,開(kāi)展聚合酶鏈反應(yīng),使抗原體一抗原一DNA一氧化氮合酶很多增加,可變大檢驗(yàn)數(shù)據(jù)信號(hào),提升檢驗(yàn)敏感度。

參考文獻(xiàn):農(nóng)殘剖析,

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