2、蛋白酶響應(yīng)面可靠性設(shè)計
(1)響應(yīng)面設(shè)計方案及結(jié)果
響應(yīng)面實驗結(jié)果見表4,選用Des遠nExpert8.0.6手機軟件對表4中數(shù)據(jù)開展標準差、顯著性分析,結(jié)果見表5。
以酶解時間、pH、溫度、加酶量為回應(yīng)自變量,α-胃蛋白酶活力抑制率為響應(yīng)值,根據(jù)響應(yīng)面線性回歸方程剖析得知,黎麥活性多肽液具備α-胃蛋白酶活力抑制率的多元化二次線性擬合線性回歸方程為:
Y=44.09 2.53A一1.87B 4.39C 4.47D 1.86AB 1.61AC 7.67AD 9.20BC 1.90BD一4.19CD一9.11A2—12.84B2—1.78C2—9.79D2。
19CD一9.11A2—12.8482—1.78C2—9.79D2。
由表5得知,實體模型的P<0.0001,表明實體模型重歸差別極明顯,失擬項P=0.8453>0.05,不明顯,表明擬合程度優(yōu)良,能真正反應(yīng)具體情況,實體模型靠譜;實體模型重歸決定系數(shù)R2=0.9728>0.9,表明α-胃蛋白酶活力抑制率結(jié)果與方程式預(yù)測分析結(jié)果具備一致性,實體模型相關(guān)性好。實驗實體模型校準指數(shù)RAdj2=0.9457,說明實體模型線性擬合程度高。表明有94.57%實驗結(jié)果值可以用此實體模型來表述,因而結(jié)果靠譜,實體模型能夠?qū)?alpha;-胃蛋白酶活力抑制率值實現(xiàn)剖析和預(yù)測分析。由重歸表達式中一次項系數(shù)得知,各要素對α-胃蛋白酶活力抑制率功效尺寸次序為;加酶量(D)>溫度(C)>酶解時問(A)>pH(B)。
(2)響應(yīng)面分析與標準提升
響應(yīng)面曲線圖剖析,各要素問等高線圖和配對t檢驗見圖6。
由圖6得知,pH與時間、溫度與pH、加酶量與溫度配對t檢驗的顯著性差異與表5中交互項P值的解析結(jié)果一致。a,c,e均呈橢圓型,說明要素問配對t檢驗明顯,等值線的形態(tài)能夠分辨配對t檢驗的高低,3組等高線圖里加酶量與溫度配對t檢驗最好是,等值線中的曲線圖緊緊圍繞著響應(yīng)面在中國問處產(chǎn)生端點,即抑制率最高值。a,c,e響應(yīng)面圖張口都朝下,伴隨著每一個要素值的提高而響應(yīng)值擴大,在做到響應(yīng)值最高處后,伴隨著要素值的增加而響應(yīng)值減少,響應(yīng)面的端點即是較大響應(yīng)值。
經(jīng)DesignExpert8.0.6手機軟件剖析獲得提升標準為:酶解時間2.22h、pH8.95、溫度60℃、加酶量0.53×104U/g,在這里前提下,曠胃蛋白酶活力抑制率的基礎(chǔ)理論最高值為47.82%,選用這一結(jié)果并聯(lián)系實際標準,將酶解標準改成:酶解時間2h、pH9.0、溫度60℃、加酶量0.5×104U/g,獲得的檢驗結(jié)果顯示為45.54%,與基礎(chǔ)理論估計值基本一致,創(chuàng)建的建模能夠比較好地體現(xiàn)黎麥活性多肽液具備抑止α-胃蛋白酶活力的工作能力,與此同時活性多肽得率為63.54%。
三、結(jié)果
以黎麥蛋白質(zhì)為實驗原材料,科學研究酶解后的活性多肽對α-胃蛋白酶活力的抑制率,挑選出最可用酶。在單要素酶解情況下,挑選酶解時間、pH、溫度、加酶量開展Box-Behnken試驗設(shè)計,提升數(shù)據(jù)顯示:加酶量和酶解溫度對α-胃蛋白酶活力的抑制效果比pH和酶解時間要好。實驗結(jié)果顯示:制取黎麥活性多肽的較佳獲取加工工藝為:酶解時問2h、pH9、溫度60℃、加酶量0.5×104U/g,在這里前提下α-胃蛋白酶活力抑制率為45.54%。為了更好地提升活性多肽液對α-胃蛋白酶的活力抑制效果,還需對酶解活性多肽液開展進一步的提純解決。