3、實(shí)驗(yàn)試劑

（1）氫氧化鈉溶液水溶液即(NaOH)=200g·L^-1]：200g氫氧化鈉溶液(NaOH，化學(xué)純)溶解冷卻水后稀釋液至1L；

（2）二甲苯(CH₃C₆H₅)；

（3）胃蛋白酶(Diastasum)能使淀粉水解為麥牙糖，具備專一性，市售品可按使用說明應(yīng)用，一般糖化工作能力為1：25(或1：50)，當(dāng)氣溫超出85^oC或有酸減存有時就失去了活力。長期性存儲后活力即將減少。配出的酶水溶液，活力減少更快，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，存儲于電冰箱儲存，在應(yīng)用前解決其糖化工作能力開展測量，以明確酶的使用量，方式是：用已經(jīng)知道量可溶性淀粉，加不一樣量的胃蛋白酶水溶液，置55^oC～60^oC水浴中隔熱保溫1h后，用碘液槍查是不是存有木薯淀粉，以明確酶的魅力及水解反應(yīng)試件時要添加的酶量。如無市面上胃蛋白酶，可以用麥芽糖替代。

制作方法如下所示：

取大麥麩200g，在水中泡浸12h，鋪平于塘瓷盤里(約1cm厚)，維持一定環(huán)境濕度，令其出芽數(shù)日至幼苗約長1cm后，在25ºC～35ºC將麥芽糖及麥麩千燥并碾成粉，每100g粉末狀添加20%乙醇溶液200mL泡浸24h，隨后用亞麻布榨取過慮，滲瀝液里加二倍于滲瀝液量的酒精開展沉積，沉積經(jīng)布氏漏斗旋蒸后，再置乳缽中與酒精一起碾磨，再旋蒸，沉積用酒精和醫(yī)用乙醚清洗，最終在鹽酸空氣干燥器中干躁儲備用。用時按胃蛋白酶同樣方式，測量其糖化力。

（4）鹽酸溶液[c(HCI)=6mol·L^-1]：取濃HCl 500mL放水至1L；

（5）聚磷酸鹽緩沖液：稱量Na₂HPO₄·2H₂O11.876g溶解1L水里。另稱量KH₂PO₄9.079g溶解另1L水里。隨后取Na₂HPO₄水溶液300mL與KH₂PO₄700mL混和就可以。

4、操作流程

稱量吹干研磨并根據(jù)60目篩試件2.000g～5.000g，放置放有伸縮過濾紙的布氏漏斗內(nèi)，先用醫(yī)用乙醚50mL分5次洗去人體脂肪(試件人體脂肪較較少時，并不洗去)，再換約85%酒精100mL洗掉可溶糖原，將殘余物移進(jìn)250mL三角瓶中，加小量涼水使試件潮濕，快速添加約100mL開水，并放置開水浴中加溫lh，使木薯淀粉徹底膠化。膠化時木薯淀粉粒的外膜裂開，水可透入木薯淀粉粒的內(nèi)部，這時候木薯淀粉淀膠澎漲，產(chǎn)生稠狀水溶液。

1h后取下三角瓶，制冷至約50ºC～55ºC，添加胃蛋白酶0.03g～0.05g。此胃蛋白酶須事前放水((3mL～5mL)，用玻棒碾磨，隨后再添加，使它非常容易與水溶液混和，不然胃蛋白酶粉劑很有可能枯于三角瓶的內(nèi)腔，或在液位上產(chǎn)生一小塊，進(jìn)而變?nèi)趿宋傅鞍酌傅墓π?。添加胃蛋白酶之后，馬上添加聚磷酸鹽緩沖液10mL，二甲苯5滴，用瓶塞塞緊，隨后將三角瓶置放于45^oC～55^oC恒溫箱中隔熱保溫2白天黑夜或更長。

隔熱保溫二白天黑夜后，取下小量標(biāo)準(zhǔn)溶液，放到蓋玻片上，加2滴I₂-KI水溶液，用光學(xué)顯微鏡查驗(yàn)是不是也有木薯淀粉粒。若木薯淀粉并未徹底糖化，應(yīng)將水溶液再次燒開，制冷至50^oC～55^oC，再添加木薯淀粉醇及二甲苯，變道后再次在恒溫箱中水解反應(yīng)。

糖化終止后，將水溶液制冷，洗入250mL容量瓶中，滴入中性化Pb(OAc)₂水溶液3mL～7mL以沉積蛋白，置放稍回應(yīng)后，再試加Pb(OAc)₂至無絮狀物沉積才行。放水滴定劑，攪拌后過慮。

取滲瀝液100mL于250mL三角瓶中，加鹽酸溶液（實(shí)驗(yàn)試劑4)10.0mL放進(jìn)開水浴中3h，塞外含有空氣冷凝管的瓶塞，使木薯淀粉經(jīng)酶水解反應(yīng)形成的麥芽糊精和麥牙糖寄內(nèi)酸水解反應(yīng)為葡萄糖水。

3小時后將內(nèi)容物制冷，用燒堿水溶液(實(shí)驗(yàn)試劑1)中合至鮮紅色并使測紙變成深藍(lán)色才行(約需NaOH10mL)。將已中合的糖液洗入250mL容量瓶中，加飽和狀態(tài)Na₂SO₄，除去過多的Pb，放水滴定劑，過慮，待測液預(yù)留。

5、結(jié)果測算

還原性糖（%）=[（P*V0*V）/m*V1]*10^-3

式中：P——精規(guī)范物質(zhì)的量濃度，mg·L^-1；

Vo——滴定管10mL費(fèi)林實(shí)驗(yàn)試劑所消耗標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖水液的量，mL；

V₁——滴定管10mL費(fèi)林實(shí)驗(yàn)試劑所耗費(fèi)待測液的量，mL；

V——待測液的總?cè)莘e，mL；

10^-3——將mL計(jì)算成L的指數(shù)；

m——試品品質(zhì)，g。

木薯淀粉，%=還原性糖%×0.9

0.9——為木薯淀粉單元式量為162.1，葡萄糖水相對分子質(zhì)量為180.1，二者之之比0.9。

6、常見問題

（1）馬上原試件中單糖、雙糖等可溶糖原去除，以保存木薯淀粉以及他食物殘留。

（2）木薯淀粉在酸或酶中水解反應(yīng)程序流程與碘的呈色反應(yīng)如下所示：

水解反應(yīng)程序流程：木薯淀粉→藍(lán)麥芽糊精→紅湖精→沒有顏色湖精→麥牙糖→葡萄糖水

與碘的呈色反應(yīng)：深藍(lán)色深藍(lán)色鮮紅色沒有顏色沒有顏色沒有顏色