植酸是一種主要的甲基對(duì)硫磷純天然抗氧劑，普遍出現(xiàn)于谷物和植物的種子中。植酸做為抗氧劑的應(yīng)用性科學(xué)研究報(bào)導(dǎo)愈來(lái)愈多。Munoz等科學(xué)研究報(bào)導(dǎo)純天然的磷化合物植酸，可做為尿石癥的潛在性緩聚劑。Lv等研究發(fā)現(xiàn)植酸在帕金森醫(yī)治中發(fā)揮一定的功效，明顯抑止MPTP誘發(fā)的黑質(zhì)（SN）膽堿能體細(xì)胞損害，抑止小膠質(zhì)細(xì)胞激話和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）。Thompson等科學(xué)研究證明了加上內(nèi)源性植酸對(duì)緩解木薯淀粉吸收率和對(duì)豆類植物的血糖值反應(yīng)能力有影響?？箟难岫罐⑺狨ナ且环N根據(jù)化學(xué)物質(zhì)生成的被國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)限制的抗氧劑，已被藥物管理處（FDA）建議做為英國(guó)安全性食品類和純天然二級(jí)食品類抗氧劑?？箟难岫罐⑺狨ゾ邆淇寡趸曰盍Γ谑称沸袠I(yè)中使用普遍，其呈現(xiàn)出生物活性，可用以治療腫瘤等各種病癥。Fathi等運(yùn)用表層低溫等離子共震技術(shù)性科學(xué)研究牛血清蛋白與抗壞血酸豆蔻酸酯中間的相互影響，發(fā)覺(jué)他們相互之間的融合會(huì)危害蛋白質(zhì)的構(gòu)像，進(jìn)而很有可能影響生物活性分子結(jié)構(gòu)在身體的運(yùn)送和遍布。Zhou等研究發(fā)現(xiàn)抗壞血酸豆蔻酸酯可用以協(xié)作抗癌醫(yī)治。

糖尿病患者是一種隨著新陳代謝和內(nèi)分泌失調(diào)的重疾。大部分糖尿病人遭受高胰島素血癥和胰島素分泌缺點(diǎn)的2型糖尿病（T2DM）的危害，并發(fā)生多種病發(fā)癥，包含大毛細(xì)血管和毛細(xì)血管功能問(wèn)題等。一般醫(yī)治T2DM的對(duì)策是飲食搭配操縱，適當(dāng)健身運(yùn)動(dòng)，應(yīng)用降血脂和降血脂劑等。抑止α-葡萄糖苷酶是治療糖尿病的技術(shù)手段之一，合理抑止α-葡萄糖苷酶的活力可緩解飯后血糖水準(zhǔn)的提升 。Kunyanga等研究表明植酸成分高的綠色植物可高效遏制食品類試品中α-葡萄糖苷酶的活力，其抑止水平與植酸成分立即有關(guān)，而植酸成分很有可能對(duì)飯后血糖水準(zhǔn)的潛在性醫(yī)治有協(xié)同效應(yīng)。殊不知，植酸和L抗壞血酸豆蔻酸酯2種抗氧劑對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑止原理末見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。本分析根據(jù)酶動(dòng)力學(xué)模型與分子對(duì)接技術(shù)性科學(xué)研究植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果，為這2種抗氧劑多功能性科學(xué)研究給予新理念，與此同時(shí)為研發(fā)新式酶抑制劑用以治療糖尿病給予理論基礎(chǔ)。

1 原材料與機(jī)器設(shè)備

釀酒酵母的α-葡糖苷酶（EC3.2.1.20），英國(guó)Singma-Aidrich企業(yè)；阿卡波糖，上海市麥克萊恩生物化學(xué)高新科技有限責(zé)任公司；對(duì)磺酰氯基-α-D-吡喃葡萄糖水苷（pNPG）、對(duì)磺酰氯（pNP），北京市百靈威高新科技有限責(zé)任公司；無(wú)水碳酸鈉（Na₂CO₃），國(guó)藥控股化學(xué)藥品有限責(zé)任公司；植酸、L-抗壞血酸豆蔻酸酯，上季風(fēng)水田農(nóng)業(yè)廣生物技術(shù)有限責(zé)任公司；實(shí)驗(yàn)自來(lái)水為超純水系統(tǒng)。
SynergyH1多功能酶標(biāo)識(shí)儀器設(shè)備，英國(guó)BioTek儀器設(shè)備有限責(zé)任公司；HWS-24電加熱恒溫水浴槽，上海市恒世儀器設(shè)備有限責(zé)任公司。

2 實(shí)驗(yàn)方式

2.1 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對(duì)α-葡糖苷酶的控制實(shí)際效果

α-葡萄糖苷酶能使pNPG水解轉(zhuǎn)化成pNP，反應(yīng)物在紫外線消化吸收光波長(zhǎng)405nm處具備較大消化吸收值?；瘜W(xué)物質(zhì)對(duì)α-葡萄糖苷酶的控制實(shí)際效果測(cè)定法依據(jù)論文參考文獻(xiàn)進(jìn)一步改動(dòng)。α-葡萄糖苷酶的測(cè)活總管理體系為340μL，最先添加133μL0.1mol/L聚磷酸鹽緩沖溶液（磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉混和配置而成，pH6.8），添加10μL5U/mLα-葡萄糖苷酶封閉液，接著添加7μL不一樣濃度梯度的效用物水溶液，混和勻稱后在37℃下孵育10min。添加20μL5mmol/L底物pNPG水溶液，混和勻稱后在37℃下孵育20min。170μL0.1mol/LNa2CO3停止反映。取200μL溶液于96孔板中，選用SynergyH1多功能酶標(biāo)識(shí)儀器設(shè)備在405nm光波長(zhǎng)處測(cè)得消化吸收值。

被測(cè)效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，植酸濃度值先后為0.15，0.16，0.17，0.18，0.19，0.20，0.205，0.21，0.215，0.220，0.230mol/L，L-抗壞血酸豆蔻酸酯濃度值先后為0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25，0.3，0.35，0.4，0.45，0.5，0.55，0.6mmol/L，每一個(gè)梯度方向下平行測(cè)定5次，獲得不一樣效用物濃度值下最終反映機(jī)制的消化吸收值。以α-葡萄糖苷酶剩下酶活的抑制率減少至50%時(shí)效用物的含量為即是ＩC50值。將沒(méi)有效用物的反映做為空白試驗(yàn)組。

2.2 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對(duì)α-葡糖苷酶的抑止原理

的抑止原理被測(cè)效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，效用物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑止原理的探討是根據(jù)抑止作用的測(cè)定法。α-葡萄糖苷酶的濃度梯度為5，4，3，2，1U/mL，底物pNPG濃度值為5mmol/L，測(cè)量效用物在差異濃度值下反映機(jī)制的紫外線消化吸收光波長(zhǎng)。以酶的濃度梯度為橫坐標(biāo)軸，管理體系的反應(yīng)速率為縱軸制作原理圖，根據(jù)圖上曲線圖是不是過(guò)起點(diǎn)來(lái)判斷效用物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑止原理。

2.3 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對(duì)α-葡糖苷酶的抑止種類

被測(cè)效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，效用物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑止種類的探討是根據(jù)抑止作用的測(cè)定法。α-葡萄糖苷酶的含量為5U/mL，底物pNPG的濃度梯度為5，3.9，2.8，1.7，1.1mmol/L，測(cè)量效用物在差異濃度值下反映機(jī)制的紫外線消化吸收光波長(zhǎng)。以pNPG濃度梯度的最后為橫坐標(biāo)軸，管理體系的反應(yīng)速率的最后為縱軸制作Lineweaver-Burk類型圖，圖上曲線圖的相交點(diǎn)部位判斷效用物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑止種類。根據(jù)二次作Dixon圖，測(cè)算抑止參量。

2.4 分子對(duì)接技術(shù)性

分子對(duì)接技術(shù)性能夠進(jìn)一步探尋效用物與α葡萄糖苷酶的融合方式。PubChem中免費(fèi)下載植酸和L-抗壞血酸棕櫚樹(shù)豆蔻酸酯的2D構(gòu)造儲(chǔ)存為SDF文件格式。根據(jù)Chem3DPro手機(jī)軟件開(kāi)展轉(zhuǎn)換為3D構(gòu)造儲(chǔ)存為mol2文件格式。UniProt蛋白資源文本檢索釀酒酵母α-葡糖苷酶的一級(jí)編碼序列，瀏覽編碼為P53341。挑選與靶點(diǎn)具備72.4%編碼序列同一性的釀酒酵母異麥牙糖酶（PDB編號(hào)3AＪ7，1.38Å屏幕分辨率）的分子結(jié)構(gòu)做為模型模版。應(yīng)用MolecularOperatingEnvironment（MOE）同宗搭建模型工具搭建釀酒酵母α-葡糖苷酶的3D構(gòu)造。將酶蛋白和效用物動(dòng)能降到最低至0.05RMS梯度方向有利于二者連接。搭建的配位化學(xué)物質(zhì)和酶蛋白導(dǎo)進(jìn)MOE手機(jī)軟件中同一對(duì)話框，根據(jù)Simulationdock將酶和配位開(kāi)展半軟性連接。針對(duì)每一個(gè)配位，配位分子結(jié)構(gòu)根據(jù)姿態(tài)的扭曲產(chǎn)生多種多樣構(gòu)像，盡量平穩(wěn)的構(gòu)像與酶促反應(yīng)袋子融合。挑選出最好是配位構(gòu)像與酶蛋白活力結(jié)構(gòu)域氨基酸殘基的融合方式和相互影響，并應(yīng)用數(shù)據(jù)分析工具PyMol程序流程表明二者相結(jié)合的三維圖像。

2.5 數(shù)據(jù)處理方法

應(yīng)用SPSSStatistics17.0手機(jī)軟件開(kāi)展數(shù)據(jù)分析，應(yīng)用OriginPro8.5手機(jī)軟件制作圖型與剖析。應(yīng)用Chem3DPro手機(jī)軟件轉(zhuǎn)換3D構(gòu)造，應(yīng)用MolecularOperatingEnvironment（MOE）手機(jī)軟件開(kāi)展分子對(duì)接，應(yīng)用PyMol手機(jī)軟件觀查連接結(jié)果的融合方式。全部數(shù)據(jù)信息值均表明為“均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差”。

3 結(jié)果與剖析

3.1 效用物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果

植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對(duì)α-葡萄糖苷酶均有控制實(shí)際效果。效用物對(duì)酶的比較剩下酶活的抑制率伴隨著效用物含量的提高而減少，當(dāng)植酸濃度值做到0.195mol/L時(shí)，抑制率減少為71%，當(dāng)抑制率減少到50%時(shí)，植酸的濃度值（ＩC50）為（0.207±3.137）mol/L。L-抗壞血酸豆蔻酸酯對(duì)α-葡萄糖苷酶抑止酶活做到50%時(shí)，濃度值為（0.39±0.00838）mmol/L。就ＩC50來(lái)講，L-抗壞血酸豆蔻酸酯對(duì)α葡萄糖苷酶的控制實(shí)際效果好于植酸?？赡苁且?yàn)長(zhǎng)抗壞血酸豆蔻酸酯頭頂部含有酚羥基的苯基更易于與α-葡萄糖苷酶融合。阿卡波糖對(duì)α-葡萄糖苷酶過(guò)半數(shù)抑制率ＩC50為658mmol/L，植酸的控制實(shí)際效果沒(méi)有阿卡波糖的效果非常的好，殊不知L-抗壞血酸豆蔻酸酯的控制實(shí)際效果是阿卡波糖的上萬(wàn)倍。