2 結(jié)果和討論

2.1 朝鮮薊副產(chǎn)物的中萜類(lèi)及甾醇類(lèi)化合物

倍半萜烯類(lèi)化合物及三萜是朝鮮薊中主要的親脂類(lèi)化合物。倍半萜烯類(lèi)化合物主要集中分布在葉片中，在莖干以及花蕾中含量較少，相反，三萜類(lèi)化合物在葉片中含量較低。本試驗(yàn)共鑒定出13種萜類(lèi)及甾醇類(lèi)化合物，其中包括3種倍半萜內(nèi)脂、2種甾醇及8種五環(huán)三萜(表1)。

由表1可知，朝鮮薊副產(chǎn)物中愈創(chuàng)木烷型倍半萜內(nèi)脂主要包括菜薊苦素、去酰基菜薊苦素和大海米菊素。菜薊苦素是朝鮮薊副產(chǎn)物中主要的倍半萜內(nèi)脂，也是朝鮮薊中一種主要的苦味成分，被視為朝鮮薊類(lèi)植物的化學(xué)分類(lèi)標(biāo)志，在朝鮮薊中含量高達(dá)13309.10mg/kgDM，占總萜類(lèi)及甾醇類(lèi)化合物的64.90％，占總倍半萜內(nèi)脂的82.18％。研究表明菜薊苦素具有抗光老化、抗痙攣、抗高血脂等藥理作用。

朝鮮薊莖葉副產(chǎn)物中豆甾醇含量為264.67mg/kgDM，β-谷甾醇含量為586.67mg/kgDM，均屬于甾醇類(lèi)化合物。植物甾醇是一種天然的植物活性物質(zhì)。是植物細(xì)胞膜的組成部分，具有較強(qiáng)的抗炎、降低膽固醇及預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等功效，而β-谷甾醇在減少血清膽固醇吸收方面作用顯著，在減少冠心病及控制腫瘤生長(zhǎng)方面起著重要作用。

五環(huán)三萜類(lèi)物質(zhì)是朝鮮薊副產(chǎn)物脂溶性提取物中含量較高的一類(lèi)，占總萜類(lèi)及甾醇類(lèi)化合物的16.88％，其結(jié)構(gòu)主要分為羽扇豆烷型、蒲公英甾烷型和齊墩果烷型。其中，蒲公英甾烷型含量最高。占五環(huán)三萜總含量的58.93％。并且其兩種醋酸酯衍生物的總量為1184.08mg/kgDM，高于蒲公英甾醇和皿蒲公英甾醇的總量(855.53mg/kgDM)，蒲公英甾醇和皿蒲公英甾醇及其醋酸酯衍生物曾在朝鮮薊的花蕾中檢測(cè)出。具有顯著的抗炎活性；羽扇豆醇含量為423.06mg/kgDM，Noldin等剛也曾在朝鮮薊中發(fā)現(xiàn)羽扇豆醇，該化合物已被證實(shí)具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗關(guān)節(jié)炎及免疫調(diào)節(jié)功能嗍。齊墩果烷型五環(huán)三萜主要為α-香樹(shù)脂醇、β-香樹(shù)脂醇及β-香樹(shù)脂醇醋酸酯，其中醋酸酯衍生物的含量為535.86mg/kgDM，高于兩種醇的含量，這與Romas等在刺菜薊(栽培型)的不同形態(tài)部位中得到的結(jié)果一致。Piccolella等在乳香黃連木葉片的提取物中發(fā)現(xiàn)了羽扇烷醇、羽扇豆醇、β-香樹(shù)脂醇、羽扇豆烯酮等萜類(lèi)化合物，并且其粗提物具有預(yù)防或治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤的潛在功能。

2.2 PCI2細(xì)胞的細(xì)胞活力

利用CCK8法對(duì)細(xì)胞活力進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞存活率受脂溶性提取物質(zhì)量濃度和處理時(shí)間的影響(圖1)，低質(zhì)量濃度(0.25mg/L)下處理PCI2細(xì)胞，細(xì)胞存活率不受影響；隨著脂溶性提取物質(zhì)量濃度的增加(0.5～2mg/L)，PCI2細(xì)胞存活率顯著提高，并呈現(xiàn)質(zhì)量濃度依賴(lài)性，其中2mg/L的脂溶性提取物對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用最強(qiáng)，處理24h后，存活率達(dá)到138.26％；然而，當(dāng)利用高質(zhì)量濃度的脂溶性提取物(8mg/mL)處理細(xì)胞時(shí)，呈現(xiàn)出明顯的質(zhì)量濃度時(shí)間依賴(lài)性傷害作用。因此，選擇0.5，1，2mg/L3個(gè)質(zhì)量濃度進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

與空白對(duì)照組相比，90μm01/LH₂0₂處理PCI2細(xì)胞4h后，細(xì)胞存活率為48.05％(圖2)。經(jīng)脂溶性提取物預(yù)處理后，H₂0₂對(duì)PCI2細(xì)胞的損傷作用受到顯著抑制(P＜0.01)，其中2mg/L的脂溶性提取物預(yù)處理細(xì)胞8h后，細(xì)胞存活率達(dá)到66.90％,因此在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，脂溶性提取物都可以顯著保護(hù)PCI2細(xì)胞免受H₂0₂的損害作用。

2.3 PCI2細(xì)胞的LDH漏出率

為了對(duì)脂溶性提取物的保護(hù)作用做進(jìn)一步研究，檢測(cè)了PCI2細(xì)胞的LDH漏出率，即溶解細(xì)胞中釋放出的乳酸脫氫酶的含量，用該指標(biāo)評(píng)價(jià)細(xì)胞膜的受損程度。與空白對(duì)照組相比，90μmol/LH₂0₂處理PCI2細(xì)胞4h后，其LDH漏出率顯著增大(P＜0.01)，達(dá)到194.69％(圖3)；經(jīng)脂溶性提取物預(yù)處理后，PCI2細(xì)胞的LDH漏出率與模型組相比有顯著降低(P＜0.01)，其中，2mg，L脂溶性提取物預(yù)處理細(xì)胞8h后，LDH漏出率為110.28％，因此脂溶性提取物可以顯著地緩解H₂0₂對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損害作用。