中藥橘紅為蕓香科植物橘Citrus.reticulate.Blanco及其栽培變種的外層果皮，性溫，味辛、苦，歸肺、脾經(jīng)。具有理氣健脾、燥濕化痰的功效，用以治療脾胃氣滯引起的胸膈脹滿、食積傷酒及痰濕壅肺的胸膈滿悶、喘滿痰多等癥。文獻(xiàn)關(guān)于橘紅的化學(xué)成分報(bào)道較少，主要有揮發(fā)油和黃酮，具有多種藥理作用，如橘紅素具有抗腫瘤、抗炎、抗哮喘、神經(jīng)保護(hù)等作用。

研究中藥橘紅的抗氧化活性，首先比較了十二個(gè)提取物樣品在同濃度下清除2.2-二苯基-1-苦基肼自由基(DPPH)作用、金屬離子螯合能力和對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用，以確定效果較好的樣品和抗氧化模型；然后將活性較好的樣品采用制備薄層層析法進(jìn)一步分離，比較所得樣品對(duì)較適宜抗氧化模型的作用；最后初步確定活性較好的樣品結(jié)構(gòu)類型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明乙酸乙酯提取物所分的兩個(gè)部分和無水乙醇提取物所分的兩個(gè)部分對(duì)DPPH自由基清除作用相對(duì)較強(qiáng)；經(jīng)制備薄層層析法進(jìn)一步得到的二個(gè)黃酮類樣品清除DPPH自由基作用與濃度呈較好的量效關(guān)系。

機(jī)體內(nèi)的氧化損傷會(huì)導(dǎo)致許多疾病的產(chǎn)生，如心血管疾病、白內(nèi)障、關(guān)節(jié)炎和癌癥等，而抗氧化劑是一類能夠延緩、阻止或消除氧化損傷的物質(zhì)，按其來源可分為人工合成抗氧化劑和天然抗氧化劑。其中天然抗氧化劑因其安全高效性而受到人們的喜愛，是當(dāng)前抗氧化劑研究中的熱點(diǎn)領(lǐng)域。中草藥是天然抗氧化劑的重要來源，學(xué)者認(rèn)為某些中草藥的療效與其抗氧化作用密切相關(guān)，從中草藥中開發(fā)高效抗氧化劑對(duì)食品工業(yè)、醫(yī)藥、營(yíng)養(yǎng)學(xué)均有重要意義。抗氧化作用機(jī)理可以是直接作用在自由基或是間接消耗掉容易生成自由基的物質(zhì)，防止發(fā)生進(jìn)一步反應(yīng)，包括鰲合金屬離子、清除自由基、淬滅單線態(tài)氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。

為了研究橘紅中的抗氧化作用成分，本實(shí)驗(yàn)首先將橘紅干燥、粉碎后過100目篩，用石油醚Ⅱ、氯仿、乙酸乙酯、無水乙醇、甲醇和蒸餾水依次對(duì)其進(jìn)行回流提取，每種提取物再根據(jù)是否溶于無水乙醇或其溶液分為二個(gè)部分，共得到十二個(gè)部分，研究它們?cè)谕瑵舛认聦?duì)不同抗氧化模型的作用，包括清除2.2-二苯基-1-苦基肼自由基作用、金屬離子螯合能力和對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用，以確定活性較好的部位和作用模型；然后將活性部位采用制備薄層層析法進(jìn)一步分離，測(cè)定所得樣品對(duì)較好作用模型的抗氧化活性，篩選出活性較好的樣品并采用物化數(shù)據(jù)、顏色反應(yīng)初步確定其結(jié)構(gòu)類型，以期為其作為天然抗氧化劑提供理論參考。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1材料與儀器

DGG-9070AD電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；XL-30C超微粉碎機(jī)(廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司)；JA2603B電子天平(上海精制天美科學(xué)儀器有限公司)；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州予華儀器制造有限公司)；N-1300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)；SB-1300水浴鍋(上海愛朗儀器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水真空泵(上海邦西儀器科技有限公司)；TDL-40低速臺(tái)式大容量離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；ZF-1三用紫外分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)；UV-3100PC紫外可見分光光度計(jì)(上海美普達(dá)儀器有限公司)。

橘紅(購(gòu)自浙江省金華市磐安藥市)；2.2-二苯基-1-苦味酰基自由基(DPPH)、氯化亞鐵、黃嘌呤、黃嘌呤氧化酶、菲啰嗪?jiǎn)吴c鹽(上海晶純生化科技股份有限公司)；羧甲基纖維素鈉(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；GF254薄層層析用硅膠(青島海洋化工有限公司)；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、無水乙醇、乙二胺四乙酸、碳酸鈉、氫氧化鈉(分析純，廣州化學(xué)試劑廠)；二甲基亞砜(天津市廣成化學(xué)試劑有限公司)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1各提取物部分樣品抗氧化活性測(cè)試

稱取50.00g橘紅粉末，用500mL石油醚回流提取1h，提取2次，合并提取液，減壓蒸餾去除溶劑，得到石油醚提取物(1)，加入15mL無水乙醇搖勻，4000r/min離心10分鐘，得到溶解部分(1a)和沉淀部分(1b)。同法，氯仿提取物分為醇溶解部分(2a)和沉淀部分(2b)；乙酸乙酯提取物分為醇溶解部分(3a)和沉淀部分(3b)；無水乙醇提取物分為醇溶解部分(4a)和沉淀部分(4b)；甲醇提取物分為甲醇/無水乙醇=1︰1溶解部分(5a)和沉淀部分(5b)；蒸餾水提取物分為無水乙醇/水=1︰1溶解部分(6a)和沉淀部分(6b)。觀察各部分顏色外觀，稱重并計(jì)算得率。

將上述各部分樣品分別用二甲亞砜配制為1.00mg/mL待測(cè)液。以抗壞血酸(Vc)為對(duì)照，參考文獻(xiàn)方法清除DPPH自由基；參考范金波等的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定各樣品溶液與金屬離子(Fe²⁺)的螯合能力；參考郭少英等的實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定各樣品溶液對(duì)黃嘌呤氧化酶(XOD)的抑制作用。

1.2.2各薄層層析制備樣品抗氧化活性測(cè)試

將1.2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果較顯著的提取物部分用甲醇溶解，采用制備薄層層析法(PTLC)分離，紫外反射儀上觀察，將比較明顯的斑點(diǎn)刮下溶解后過濾，濾液室溫晾干后烘箱干燥，觀察顏色外觀、稱重并計(jì)算得率。

各樣品均用二甲亞砜配制成1.00mg/mL待測(cè)液，按照1.2.1實(shí)驗(yàn)部分測(cè)定它們對(duì)較好抗氧化實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷淖饔谩⒒钚孕Ч^好的樣品配制成不同濃度，測(cè)試濃度與清除率的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

1.2.3活性樣品結(jié)構(gòu)類型初步鑒定

通過理化性質(zhì)和顯色反應(yīng)初步確定活性較好的樣品的化學(xué)結(jié)構(gòu)類型。

1.2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

活性實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表示為平均值。采用MicrosoftOfficeExcel2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2結(jié)果與分析

2.1各提取物部分樣品抗氧化活性結(jié)果與分析

橘紅粉末依次用石油醚Ⅱ、氯仿、乙酸乙酯、無水乙醇、甲醇和蒸餾水提取，所得各提取物再根據(jù)在無水乙醇或其50%乙醇溶液中的溶解性分為兩個(gè)部分，共得到十二個(gè)樣品，其理化性質(zhì)見表1。從中可以看出得率大小為：4a>6b>5b>5a>4b>6a>3b>1b>1a>2b>3a>2a，其中6a和6b部分顏色較深，其它提取物部分顏色相對(duì)較淺。