實(shí)驗(yàn)以食品、醫(yī)藥工業(yè)常用抗氧化劑Vc做對(duì)照，對(duì)各提取物部分抗氧化活性進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)濃度較小或較大時(shí)，對(duì)照Vc的清除率與各提取物清除率差異較大或不明顯。因樣品數(shù)量較多，為了便于比較，濃度最終選為1.00mg/mL，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下圖。

從上圖可以看出，在所測濃度下各提取物均具有一定的抗氧化活性。其中對(duì)DPPH自由基清除作用大小順序?yàn)椋?b>4b>4a>3a>2b>5b>2a>5a>1b>6a>1a>6b，金屬離子螯合能力大小順序?yàn)椋?b>4a>3a>4b>1b>2a>2b>5a>6a>1a>5b>6b，對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用大小順序?yàn)椋?b>3a>4b>4a>2b>5b>6a>6b>1a>1b>2a>5a?？梢钥闯鰧?duì)三種不同的抗氧化模型，乙酸乙酯提取物部分樣品3a、3b和無水乙醇提取物部分樣品4a、4b均具有較好的抗氧化作用，但其作用均低于同濃度的Vc。同一個(gè)樣品對(duì)三種抗氧化模型的作用大小為：DPPH自由基清除作用>金屬離子螯合能力>對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用，即清除DPPH自由基結(jié)果較顯著。

2.2各薄層層析制備樣品抗氧化活性結(jié)果與分析

從2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出3a、3b、4a和4b清除DPPH自由基效果較顯著，將此四部分進(jìn)一步經(jīng)薄層層析制備分離，3a部分用石油醚/乙酸乙酯=5︰1展開得到樣品3a-1.3b部分用石油醚/乙酸乙酯=1︰2展開得到樣品3b-2和3b-3.4a部分用氯仿/甲醇=4︰1展開得到樣品4a-4和4a-5.4b部分用氯仿/甲醇=1︰7展開得到樣品4b-6，共六個(gè)樣品，它們的薄層層析圖及Rf值見圖2。

從上表可以看出，制備薄層層析法所得各樣品對(duì)DPPH自由基均有清除作用。在1.00mg/mL濃度時(shí)，各樣品對(duì)DPPH自由基清除率大小順序?yàn)椋?b-2>4a-4>3b-3>4b-6>3a-1>4a-5，其中樣品3b-2和4a-4清除率較高。

以Vc做對(duì)照，對(duì)樣品3b-2和4a-4在不同濃度下清除DPPH活性進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)濃度較小或較大時(shí)，清除率太小或差異變化不明顯。為了便于比較，濃度選為0.125、0.25、0.5、1.00、2.00mg/mL，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。

從上圖可以看出，3b-2和4a-4清除DPPH自由基作用與濃度呈較好的量效關(guān)系，但在同濃度下清除率均低于對(duì)照Vc。

2.3活性樣品的結(jié)構(gòu)類型鑒定結(jié)果與分析

從2.2結(jié)果可以看出樣品3b-2和4a-4在測定濃度下對(duì)DPPH自由基清除作用較強(qiáng)。通過觀察它們的理化性質(zhì)和顏色反應(yīng)，初步鑒定出樣品的結(jié)構(gòu)類型。顏色反應(yīng)結(jié)果見表3。

從表3結(jié)果可以看出樣品3b-2和4a-4主要為黃酮類化合物。

3結(jié)論

本研究以體外抗氧化作為活性篩選模型，先測試相同濃度下橘紅各提取物部分清除2.2-二苯基-1-苦基肼自由基作用、金屬離子螯合能力和對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制活性，以期得到抗氧化作用較明顯的提取物部分和實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?；然后將效果較好的提取物部分經(jīng)薄層層析進(jìn)一步分離，測試所得樣品對(duì)效果較好的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷目寡趸钚?。這種篩選活性部位的實(shí)驗(yàn)方法能縮小活性范圍，實(shí)驗(yàn)針對(duì)性強(qiáng)，目的明確，可以較快得到活性較好部位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在所測濃度范圍內(nèi)，橘紅中的兩個(gè)黃酮類成分對(duì)DPPH自由基有較明顯的清除作用，并且清除率均隨著濃度的增大而增強(qiáng)，具有較好的量效關(guān)系，可以進(jìn)一步進(jìn)行結(jié)構(gòu)及開發(fā)應(yīng)用研究，為其作為天然抗氧化劑在食品和醫(yī)藥行業(yè)的應(yīng)用提供理論依據(jù)。