2.2基于原植物親緣學(xué)及化學(xué)成分特有性證據(jù)的Q-marker預(yù)測(cè)

茵陳為菊科多年生長(zhǎng)草本植物艾屬濱蒿或茵陳蒿的干燥地上部分．艾屬中除了茵陳蒿，還有艾草、青蒿及牡蒿等植物．艾屬中揮發(fā)油屬于其主要次生代謝產(chǎn)物，是艾屬類植物的主要藥效部位之一，用其作為Q-marker的預(yù)測(cè)有一定的意義．艾屬藥材中的揮發(fā)油主要以倍半萜類化合物為主，萜類化合物的生源途徑均為甲戊二羥酸途徑，由焦磷酸香葉酯(GPP)衍生成無(wú)環(huán)單萜或者通過異構(gòu)化酶作用轉(zhuǎn)化成焦磷酸橙花酯(NPP)，再生成各類環(huán)狀單萜．其中茵陳的代表成分有大牛兒烯D、α-葎草烯及石竹素等．茵陳根據(jù)其采收時(shí)節(jié)可分為綿茵陳和茵陳蒿，春季采收為綿茵陳，秋季采收為茵陳蒿．由于采收時(shí)節(jié)的不同，茵陳所含的成分出現(xiàn)了差異，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)收載綿茵陳的含量測(cè)定中綠原酸含量不少于0.5%，茵陳蒿的含量測(cè)定中濱蒿內(nèi)酯不少于0.2%．通過分析艾屬的親緣關(guān)系，可將大牛兒烯D、α-葎草烯及石竹素作為茵陳的Q-marker.

2.3基于傳統(tǒng)功效的Q-marker預(yù)測(cè)

中藥的傳統(tǒng)功效是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，通過長(zhǎng)期的實(shí)踐總結(jié)而來的有效使用方法，因此基于傳統(tǒng)功效對(duì)茵陳的質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)有一定的必要性．茵陳的使用歷史比較久，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載將其列為上品，《傷寒論》中記載茵陳用來治療瘀熱發(fā)黃，《千金方》中其用來治療風(fēng)癢疥瘡，《金匱要略》中其用來治療黃疸濕重?zé)嵘伲痍惸軌蚶麧裢它S、清熱解毒，在治療黃疸方面是一味非常重要的中藥材．茵陳的現(xiàn)代藥理作用有利膽、保肝、解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、抗病毒、抗腫瘤及降血壓等作用．王守軍研究發(fā)現(xiàn)，萜類化合物具有抗腫瘤、鎮(zhèn)定、抗病毒及提高免疫力等效果．廖天錄等研究發(fā)現(xiàn)，香豆素具有利膽作用．牛篩龍等研究發(fā)現(xiàn)，總黃酮對(duì)急性肝損傷具有保護(hù)作用．茵陳萜類化合物、香豆素類和黃酮類與其有效性密切相關(guān)，作為主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，可考慮作為茵陳的潛在Q-marker.

2.4基于傳統(tǒng)藥性的Q-marker預(yù)測(cè)

“性味”即四氣五味，是中藥的特有屬性，反映了中藥的本質(zhì)特征，是中藥藥性理論的核心．中藥臨床藥理研究表明，中藥的化學(xué)成分與其藥性具有一定的相關(guān)性．茵陳味苦、辛，性微寒，歸肝、膽、脾經(jīng)．研究表明，苦、寒藥物的物質(zhì)基礎(chǔ)以生物堿和苷類成分為主，辛味藥的化學(xué)成分多以黃酮類、萜類和揮發(fā)油為主，結(jié)合茵陳含有的化學(xué)成分種類，可將萜類化合物和黃酮類化合物作為茵陳質(zhì)量標(biāo)志物的Q-marker.

2.5基于化學(xué)成分的Q-marker預(yù)測(cè)

陳志娜等研究發(fā)現(xiàn)，用70%乙醇提取茵陳得到總黃酮(主要成分為金絲桃苷和槲皮素)與總多酚含量最高，抗氧化活性最強(qiáng)．張影等以綠原酸為內(nèi)參物，計(jì)算茵陳標(biāo)準(zhǔn)湯劑中新綠原酸與咖啡酸等7種成分的相對(duì)校正因子，從而計(jì)算出7種成分的含量，并與常規(guī)外標(biāo)法實(shí)測(cè)含量值沒有顯著差異，一測(cè)多評(píng)法可作為茵陳標(biāo)準(zhǔn)湯劑多指標(biāo)成分定量分析的首選方法．熊耀坤等利用GC-MS法對(duì)茵陳提取的揮發(fā)油成分進(jìn)行鑒定分析，得出茵陳鮮品的揮發(fā)油含量高于茵陳干品，應(yīng)注意茵陳產(chǎn)地加工干燥過程的質(zhì)量控制和藥材保障．張慧等利用分光光度法，以獐牙菜苦苷為對(duì)照品，經(jīng)HCl水解，2,4-二硝基苯肼乙醇試液和Na OH 60%乙醇溶液顯色后，于444 nm波長(zhǎng)處測(cè)定藏茵陳總環(huán)烯醚萜苷含量，該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好，可用作測(cè)量總環(huán)烯醚萜苷含量的首選方法．吳小可等采用HPLC法，以甲醇和0.2%的甲酸(48∶52)為流動(dòng)相測(cè)定菊科植物中總黃酮醇苷含量，結(jié)果表明，槲皮素、異鼠李素2種黃酮類化合物分別在1.06～212μg/m L、0.93～186μg/m L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好，該方法可作為茵陳槲皮素和異鼠李素含量測(cè)定的一種方法．茵陳色原酮對(duì)急性乙醇性肝損傷具有保護(hù)作用，可在體內(nèi)與人血清白蛋白結(jié)合而發(fā)揮穩(wěn)定的生物活性作用，可抑制β-葡萄糖醛酸酶的活性，使葡萄糖醛酸不被分解，從而加強(qiáng)肝臟解毒作用．麥爾旦·吐爾遜麥麥提等利用薄層層析、硅膠反復(fù)柱層析、波譜分析技術(shù)和理化常數(shù)對(duì)照的方法，從80%乙醇提取物中分離并鑒定出了茵陳色原酮，且對(duì)其碳譜數(shù)據(jù)進(jìn)行了歸屬．張啟偉等利用UV、MS與HNMR確定茵陳中3'-甲氧基薊黃素的結(jié)構(gòu)，采用HPLC分離與面積歸一化法計(jì)算3'-甲氧基薊黃素含量，可用作3'-甲氧基薊黃素定量分析的方法．馮藝飛利用大孔吸附樹脂對(duì)茵陳總黃酮進(jìn)行分離純化，通過顯色反應(yīng)、紅外光譜、液質(zhì)聯(lián)用、FT-IR譜圖及LC-MS分析等方法，確定出茵陳提取物中含有黃酮類化合物，并推斷鑒定出含蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷和香葉木苷幾種成分．廖彥等利用HPLC指紋圖譜、RRLC-MS/MS及HPLC-DAD方法確定了茵陳的8個(gè)共有峰并對(duì)8個(gè)共有峰的化學(xué)成分進(jìn)行了指認(rèn)．李楊楊等利用HPLC方法，將濃度設(shè)置在3.9～500μmol/L內(nèi)可以使得6,7-二甲氧基香豆素的峰面積之間的線性關(guān)系良好．以上多種成分可為茵陳Q-marker的預(yù)測(cè)提供一定的參考．

3討論

茵陳作為我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，其資源豐富，藥用歷史悠久，且臨床療效突出．相關(guān)研究表明，茵陳具有利膽、保肝、降血壓、抗腫瘤、抗病毒、解熱鎮(zhèn)痛以及提高免疫功能等作用．茵陳中的化學(xué)成分復(fù)雜，容易受采收時(shí)節(jié)的影響．現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)將茵陳中的綠原酸作為其指標(biāo)，但綠原酸屬于苯丙素類化合物，在其他植物中也存在，如金銀花等．因此，建立科學(xué)、合理的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，對(duì)茵陳的質(zhì)量進(jìn)行全面準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)并指導(dǎo)茵陳資源的合理開發(fā)利用以及對(duì)茵陳產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義．

本研究依據(jù)Q-marker理念，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從成分有效性的角度對(duì)茵陳進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)茵陳成分中13個(gè)活性成分可通過AKT1、TNF、JUN、MAPK1、RELA、TP53及IL6等靶點(diǎn)作用于癌癥、乙型肝炎及TNF等關(guān)鍵信號(hào)通路發(fā)揮藥理作用．并對(duì)茵陳的生源途徑和成分特異性、傳統(tǒng)功效、傳統(tǒng)藥性以及化學(xué)成分可測(cè)性進(jìn)行了預(yù)測(cè)．利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法來篩選出數(shù)據(jù)庫(kù)中的有效成分并與其他預(yù)測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行比較，可以豐富篩選成分，有利于更好地確定Q-marker．結(jié)果表明，茵陳的黃酮類成分主要有槲皮素與異鼠李素，揮發(fā)油的主要成分為大牛兒烯D，甾醇類主要化合物為β-谷甾醇，香豆素類的主要化合物為6,7-二甲氧基香豆素與馬栗樹皮素二甲醚，色原酮類化合物主要為茵陳色原酮．研究表明，槲皮素、異鼠李素和β-谷甾醇廣泛存在于大多數(shù)的藥用植物中，不符合成分特有性的特點(diǎn)，不適合作為茵陳的Q-marker．而茵陳蒿靈A屬于茵陳特有成分，馬栗樹皮素二甲醚存在于茵陳花序和花蕾部分，且在花蕾中含量最高，在開花季節(jié)其含量可達(dá)1.98%，隨即迅速降低，具有可檢測(cè)特點(diǎn)，而大牛兒烯D是茵陳揮發(fā)油的主要活性部位，6,7-二甲氧基香豆素和茵陳色原酮具有利膽，促進(jìn)膽汁分泌的作用，體現(xiàn)了茵陳的主要藥效作用，以上幾種成分可以為茵陳Q-marker的控制和篩選提供科學(xué)的理論依據(jù)，以便于建立合理的茵陳質(zhì)量控制及溯源體系．

Q-marker的預(yù)測(cè)途徑在劉昌孝院士最初提出的傳遞與溯源、有效、特有、可測(cè)及處方配伍的“五原則”基礎(chǔ)上，又衍生出了藥動(dòng)學(xué)與體內(nèi)過程相關(guān)性，不同產(chǎn)地化學(xué)成分特有性，可入血化學(xué)成分以及不同加工方法等途徑．Q-marker的預(yù)測(cè)途徑的增多，篩選出來的成分也越來越多，使得Q-marker的預(yù)測(cè)也產(chǎn)生了一定的問題．如，根據(jù)不同預(yù)測(cè)途徑篩選出一定的Q-marker，應(yīng)該通過怎樣的方式對(duì)篩選出來的Q-marker進(jìn)行取舍;根據(jù)植物的親緣性進(jìn)行Q-marker的預(yù)測(cè)，遇到不同科，不同屬的植物含有相同的成分，那么該成分屬于哪一種植物的Q-marker;Q-marker的預(yù)測(cè)是根據(jù)什么標(biāo)準(zhǔn)來確定其可以作為質(zhì)量標(biāo)志物;Q-marker的預(yù)測(cè)主要是通過查閱文獻(xiàn)進(jìn)行內(nèi)容整合，但是忽略了中藥成分的未知性的特點(diǎn)，那么現(xiàn)已預(yù)測(cè)的Q-marker是否準(zhǔn)確等等．網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)主要是利用現(xiàn)有的中藥數(shù)據(jù)庫(kù)完成高通量的計(jì)算機(jī)虛擬篩選，將已有的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和整合來獲取相關(guān)的成分、靶標(biāo)與通路．中藥材具有多成分與多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，不同藥材中含有相同成分，利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法來篩選出數(shù)據(jù)庫(kù)中的有效成分與其他預(yù)測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行比較，可以豐富篩選成分的多樣性，有利于更好地找出Q-marker．但網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選的是藥材中含有的成分，并沒有將單味藥材中特有成分或加工過程中形成的可以定性定量的特有化合物區(qū)分出來．文獻(xiàn)分析是有目的性地去篩選單味藥材，將藥材各個(gè)方面的研究結(jié)果歸納總結(jié)起來，如將炮制工藝、采收時(shí)節(jié)與藥材配伍等因素考慮在內(nèi)得出的具有專屬性、有效性和安全性的化學(xué)成分．因此會(huì)出現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果和文獻(xiàn)分析結(jié)果矛盾的情況．因此，Q-marker的建立應(yīng)該建立在“位”“量”“性”“效”的基礎(chǔ)上，利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與文獻(xiàn)分析等方法來實(shí)現(xiàn)Q-marker的定位，利用代謝組學(xué)與含量測(cè)定等方法來實(shí)現(xiàn)量的確定，利用指紋圖譜與判別分析來實(shí)現(xiàn)定性鑒別，最后利用體內(nèi)體外藥理實(shí)驗(yàn)來實(shí)現(xiàn)效的驗(yàn)證．只有將“位”“量”“性”“效”結(jié)合起來，綜合分析得出的結(jié)論才具有可信度，才可以為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)．