紅心火龍果屬仙人掌科三角柱屬，原產(chǎn)地于西班牙、南美洲和非洲地區(qū)，因其身心健康特點(diǎn)和營(yíng)養(yǎng)成分獲得重視而被普遍栽種。現(xiàn)階段，目前市面上常用的火龍果品種關(guān)鍵有：肥肉紅心火龍果、紅肉火龍果和紫紅肉火龍果3種。在其中，紅肉火龍果果實(shí)中含有肥肉紅心火龍果所缺乏的球甘藍(lán)黑色素，還富含充足的不飽和脂肪、水溶食物纖維等。除開(kāi)有較高的營(yíng)養(yǎng)成分外，紅肉火龍果在抗氧化性層面對(duì)身體也是有一定的協(xié)助功效。

果子中有機(jī)物的構(gòu)成與成分是危害果子口味質(zhì)量的主要要素。果子中出現(xiàn)很多類(lèi)型的有機(jī)物，殊不知大部分果子一般以1種有機(jī)物為主導(dǎo)，極少數(shù)以多種多樣為主導(dǎo)。依據(jù)關(guān)鍵有機(jī)物的類(lèi)型，能夠?qū)⒐臃殖砂⒗切凸?、檸檬酸鈉型果子和酒石酸型果子等。果子中的有機(jī)物新陳代謝是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的人體生理全過(guò)程，由有機(jī)物的生成和溶解一同決策。有研究表明，阿拉伯糖是紅心火龍果的關(guān)鍵有機(jī)物。阿拉伯糖脫氨酶(NAD-MDH)、硫酸銨烯醇式丙酮酸腺苷酸(PEPC)和蘋(píng)果酸酶(NADP-ME)是阿拉伯糖新陳代謝中重要的3個(gè)酶，前二者催化反應(yīng)阿拉伯糖的生成，后面一種則參加阿拉伯糖的溶解，他們一同調(diào)整了紅心火龍果成長(zhǎng)發(fā)育歷程中阿拉伯糖的新陳代謝和累積，其成分是一個(gè)變化規(guī)律的全過(guò)程，可危害紅心火龍果的口味質(zhì)量。

現(xiàn)階段有關(guān)紅肉火龍果中阿拉伯糖的新陳代謝轉(zhuǎn)變還末見(jiàn)科學(xué)研究報(bào)導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)探討了“玫瑰香”種類(lèi)和“大紅色一號(hào)”種類(lèi)紅心火龍果儲(chǔ)藏歷程中的質(zhì)量轉(zhuǎn)變和阿拉伯糖新陳代謝重要遺傳基因NADP-ME、PEPC和NAD-MDH的表述差別，為進(jìn)一步科學(xué)研究紅肉火龍果采后儲(chǔ)藏歷程中阿拉伯糖累積的調(diào)節(jié)體系和對(duì)口味特點(diǎn)產(chǎn)生的危害給予科學(xué)論證。

1 原材料與方式

1.1 原材料與實(shí)驗(yàn)試劑

1.1.1 原材料

“玫瑰香”種類(lèi)紅心火龍果，采自浙江江山市秋實(shí)農(nóng)業(yè)合作社；“大紅色一號(hào)”種類(lèi)紅心火龍果，采自浙江諸暨市雪鋒紅心火龍果產(chǎn)業(yè)基地，冷藏車(chē)帶回試驗(yàn)室后放置10℃冷凍庫(kù)中急冷12h。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

磷酸二氫鉀、硫酸銨、福林-酚等(分析純級(jí))，購(gòu)自國(guó)藥控股化學(xué)藥品有限責(zé)任公司；色譜儀級(jí)工業(yè)甲醇、色譜儀級(jí)乙腈，購(gòu)自英國(guó)迪馬科技有限公司；鹽酸、酒石酸、阿拉伯糖、乳酸菌、檸檬酸鈉、富馬酸及琥珀酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，購(gòu)于阿拉丁試劑(上海市)有限責(zé)任公司；異硫氰酸苯酯、三乙胺、分散碳水化合物混標(biāo)，購(gòu)于英國(guó)Sigma試劑公司：PEPC測(cè)定試劑盒。購(gòu)于南京建成生物技術(shù)研究室。

1.2 儀器設(shè)備與機(jī)器設(shè)備

TAXTPlus型質(zhì)構(gòu)儀，美國(guó)SMS企業(yè)：PAL-1型手執(zhí)折射儀，日本ATAG0企業(yè)；877Titrinoplus全自動(dòng)電位滴定儀，瑞士萬(wàn)通股權(quán)有限責(zé)任公司；UV-9000紫外線-由此可見(jiàn)光度計(jì)，上海市元析儀器設(shè)備有限責(zé)任公司：Waters高效率液相色譜(型號(hào)規(guī)格e2695-2998裝有PDA探測(cè)器)，沃特世高新科技(上海市)有限責(zé)任公司；少量光度計(jì)，日本SHIMADZY企業(yè)；控溫增加PCR儀，英國(guó)賽默飛世爾科技有限公司：少量計(jì)算蛋白質(zhì)檢測(cè)儀，英國(guó)賽默飛世爾科技有限公司：The瑚oMR23i快速超低溫冷凍離心機(jī)。法國(guó)的喜德盛控股集團(tuán)有限責(zé)任公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方式

選擇無(wú)機(jī)械設(shè)備損害，果子的大小和質(zhì)量指標(biāo)相對(duì)性一致的“玫瑰香”紅心火龍果和“大紅色一號(hào)”紅心火龍果。用2％氫氧化鈣泡浸消毒殺菌后當(dāng)然晾曬，于25℃控溫塑造，每一組3次反復(fù)。各自在儲(chǔ)藏第0，1，2，3，4，5，6。7，8天按時(shí)抽樣，放置液態(tài)氮中快速凍存，混和后散裝至試品袋里，于-80℃儲(chǔ)存。用以事后質(zhì)量指標(biāo)值測(cè)量。

1.3.1 強(qiáng)度的測(cè)量

參照黃子娟的方式。并稍加改動(dòng)。選用質(zhì)構(gòu)儀測(cè)量紅心火龍果的外果皮強(qiáng)度和果實(shí)強(qiáng)度，應(yīng)用直徑2mm攝像頭(P/2型)，選擇紅心火龍果果子無(wú)魚(yú)鱗的地球赤道位置開(kāi)展穿刺術(shù)測(cè)量，反復(fù)3次，取均值，企業(yè)為N。

1.3.2 可滴定管酸成分的測(cè)量

選用可滴定管酸全自動(dòng)電位滴定儀測(cè)量。果實(shí)勻漿后過(guò)慮，取滲瀝液1mL，用雙蒸水滴定劑至100mL。以0.05mol/LNa0H水溶液滴定管，紀(jì)錄滴定終點(diǎn)時(shí)常用堿溶液的容積，并測(cè)算可滴定管酸成分，反復(fù)3次。

1.3.3 可溶固體物質(zhì)成分的測(cè)

選用手執(zhí)折射儀測(cè)量試品可溶固體物質(zhì)成分，反復(fù)3次。

1.3.4 維他命C成分的測(cè)量

參照吳媛媛等的方式 。稱(chēng)量1g紅心火龍果碾磨樣，添加5％TCA水溶液，攪拌后離心式。取上清液先后添加5％三氯乙酸、0.5％鄰菲羅琳-乙醇溶液、0.5％硫酸銨-乙醇溶液、0.03％三氯化鐵-乙醇溶液和1mL工業(yè)乙醇后于30℃水浴1h。用純凈水調(diào)零，以純凈水替代上清液為對(duì)照品。在光波長(zhǎng)534nm處測(cè)量OD值值，反復(fù)3次，企業(yè)為mg/100g。

1.3.5 總酚成分的測(cè)量

選用福林酚酶活性測(cè)定，參照范智義等的方式 ，并且做好適度改動(dòng)。稱(chēng)量紅心火龍果碾磨樣1.0g，添加5.OmL60％酒精萃取法2h，10000×g離心式15min，取上清液1mL至25mL具塞試管嬰兒中，添加3mL1.0mol/L福林酚試劑后混勻，靜放5min后添加6mL7.5％碳酸鉀，用純凈水滴定劑至25mL。室內(nèi)溫度下到在黑暗中置放2h，以不用沒(méi)食子酸的試品為空缺，于光波長(zhǎng)760nm處測(cè)量其OD值值，反復(fù)3次，以沒(méi)食子酸成分為規(guī)范物測(cè)量總酚成分，企業(yè)為μg/g。

1.3.6 可溶性糖成分的測(cè)量

參照曹身心健康等的甲酸一鹽酸法，并且做好適度改動(dòng)。稱(chēng)量紅心火龍果碾磨樣1.0g，添加5。10mL純凈水后密封，于100℃水浴30min。制冷后過(guò)慮。滲瀝液移進(jìn)100mL容量瓶，回收利用沉渣，添加5～10mL純凈水于100℃水浴10min后制冷、過(guò)慮，合拼滲瀝液。取500μL試品液于試管嬰兒中。添加1.5mL純凈水和1.0mL9％甲酸，混勻，在5～20s內(nèi)添加5mL硫酸，混勻，室內(nèi)溫度下反映30min，以空缺為對(duì)照品，在光波長(zhǎng)485nm處測(cè)量其OD值值，反復(fù)3次。

1.3.7 有機(jī)物成分的測(cè)量

1) 色譜儀標(biāo)準(zhǔn)

C18正相反離子交換柱(3.9mm×300mm，5μm)；柱溫30℃；流動(dòng)性相為0.04mg/LKH2PO4-H3P04緩沖液：工業(yè)甲醇=95:5(容積比)；流動(dòng)速度0.8mL/min；氣相容積10μL；裝有PDA探測(cè)器，檢驗(yàn)光波長(zhǎng)214nm；外標(biāo)法定量分析。

2) 獲取方式

用高效液相色譜色譜分析，參照關(guān)秀杰等的方式 ，并且做好適度改動(dòng)。稱(chēng)量紅心火龍果碾磨樣5.0g于10mL容量瓶，添加一定量流動(dòng)性相，于75℃水浴45min，制冷至室內(nèi)溫度，滴定劑。渦流2min，超聲波獲取15min，過(guò)慮分離出來(lái)蛋白等大分子物質(zhì)。取一定量滲瀝液，離心式10min完用0.45μm直徑的濾紙過(guò)慮上清液，預(yù)留。

1.3.8 NAD-MDH和NADP-ME酶活的測(cè)量

1)酶液獲取

參照Masashi等和Hirai等的方式 ，稍加改動(dòng)。取5g紅心火龍果碾磨樣，添加10mL經(jīng)急冷的碾磨緩沖溶液(包括10mmol/L異抗壞血酸、0.6mol/L綿白糖、0.2mol，LTris-HCl，pH8.2)，超低溫離心式后取上清液。用pH8.2的獲取緩沖溶液(包括10mm01/L異抗壞血酸、0.1％曲拉通X-100、0.2mol/LTris-HCl)滴定劑到50mL，攪拌后用獲取緩沖溶液滴定劑至100mL，酶液超低溫儲(chǔ)存預(yù)留。

2)酶活測(cè)量

NAD-MDH和NADP-ME酶促反應(yīng)測(cè)量參照Hirai等的方式 。

1.3.9 PEPC酶活的測(cè)量

應(yīng)用PEPC測(cè)定試劑盒測(cè)量試品中PEPC的酶活。

1.3.10 總RNA獲取及檢驗(yàn)

應(yīng)用天根含糖量花青素綠色植物總RNA獲取檢測(cè)試劑盒獲取紅心火龍果總RNA。取1μLRNA根據(jù)核苷酸蛋白質(zhì)檢測(cè)儀測(cè)量OD₂₆₀/OD₂₈₀比率檢測(cè)RNA純凈度，用一般瓊脂糖電泳電泳原理檢測(cè)RNA一致性。

1.3.11 RT-qPCR剖析

以總RNA為模板，選用諾維贊反轉(zhuǎn)錄檢測(cè)試劑盒，在冰浴標(biāo)準(zhǔn)下開(kāi)展第1鏈cDNA的生成。

阿拉伯糖新陳代謝有關(guān)遺傳基因引物設(shè)計(jì)(表1)根據(jù)Primer軟件獨(dú)立設(shè)計(jì)方案，檢測(cè)引物設(shè)計(jì)融解曲線圖單一(無(wú)非特異物質(zhì))后，可用以即時(shí)瑩光定性分析。