（3）除蛋白中離心式時(shí)間的提升

本實(shí)驗(yàn)操作中發(fā)酵物體細(xì)胞分離出來后，添加50%的三氯乙酸水溶液1/5容積，在16000×g的向心力下各自離心式10min、20min、30min、40min，選擇最優(yōu)控制離心式時(shí)間，如圖所示4所顯示。離心式的時(shí)間選擇30～40min為最好。

3、酒精沉積含糖量標(biāo)準(zhǔn)的提升

（1）酒精沉積含糖量中乙醇濃度的提升

本實(shí)驗(yàn)操作中發(fā)酵物體細(xì)胞分離出來后，添加50%的三氯乙酸水溶液1/5容積，在16000×g的向心力下各自離心式40min，添加3倍容積濃度值分別為70%、80%、95%、100%的乙醇溶液，4℃標(biāo)準(zhǔn)下醇沉12h。分析，測(cè)量胞外含糖量的生產(chǎn)量，如圖所示5所顯示。含糖量的獲取量伴隨著乙醇濃度的提高而持續(xù)擴(kuò)大。一些小分子水的含糖量分子結(jié)構(gòu)在較低濃度的酒精下不容易沉積，僅有當(dāng)乙醇濃度充足高時(shí)，才產(chǎn)生沉積。因而當(dāng)乙醇濃度為100%時(shí)，做到最高值，即酒精沉積含糖量的最佳濃度值為100%。

（2）酒精沉積含糖量中酒精容積的提升

蛋白沉淀后各自依照1∶1、1∶2、1∶3、1∶4的料醇比添加含量為100%的酒精水溶液，測(cè)量胞外含糖量的生產(chǎn)量，如圖所示6所顯示。提升酒精加上容積能夠提升胞外含糖量的得到量，沉積中含糖量獲取率隨酒精加上倍率的提高而上升，可是當(dāng)酒精加上倍率在3～4倍時(shí)，EPS成分明顯增強(qiáng)，且都做到較濃度較高的，因此從獲取成本費(fèi)考慮到，最好的酒精加上倍率為3倍。

（3）酒精沉積含糖量中沉積時(shí)間的提升

酒精沉積含糖量中在4℃標(biāo)準(zhǔn)下各自醇沉12h、24h、36h，測(cè)量胞外含糖量的生產(chǎn)量，如圖所示7所顯示。醇沉?xí)r間與胞外含糖量成分的相互關(guān)系不顯著。而試驗(yàn)操作過程中，添加酒精后直接造成沉積，而且伴隨著醇沉?xí)r間的提升，沉淀色調(diào)持續(xù)加重。為了更好地確保粗多糖的純凈度，醇沉?xí)r間選12h最合適。

4、正交試驗(yàn)剖析

各自選擇危害EPS成分很大的獲取標(biāo)準(zhǔn)，三氯乙酸濃度值、向心力和離心式時(shí)間開展三要素三水準(zhǔn)正交試驗(yàn)，結(jié)果如表1。結(jié)果顯示，危害EPS成分的各要素次序關(guān)聯(lián)為B＞C＞A，向心力對(duì)含糖量獲取的干擾很大，離心式時(shí)間其次，三氯乙酸濃度值對(duì)含糖量獲取的危害最少。依據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，得到最佳發(fā)醇標(biāo)準(zhǔn)組成為A₃B₂C₃，即60%的三氯乙酸濃度值、在14000×g的向心力下離心式40min。研究表明，向心力和離心式時(shí)間的提升能夠提升蛋白質(zhì)的擺脫率，但會(huì)降低最后EPS成分，減少含糖量純化得率，因而，在14000×g向心力下離心式40min最好，EPS成分可做到392.50mg/L。

三、結(jié)果

本工程以挑選出的胞外含糖量增產(chǎn)菌乳酸菌乳革蘭陰性桿菌乳亞種LL9為菌苗，開展EPS獲取提純加工工藝標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)研究。應(yīng)用三氯乙酸法沉積蛋白，根據(jù)合理操縱三氯乙酸的劑量來減少對(duì)EPS構(gòu)造的毀壞。根據(jù)單要素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)最后認(rèn)證，發(fā)覺當(dāng)用含量為60%三氯乙酸解決過發(fā)酵物后，在14000×g向心力下離心式40min除蛋白質(zhì)實(shí)際效果最好；沉積含糖量的最佳組成是3倍容積、濃度值為100%的酒精沉積12h。最優(yōu)控制分離純化加工工藝標(biāo)準(zhǔn)為：加上三氯乙酸60%（w/v）（12h）→500r/min拌和5min→離心式沉積除蛋白質(zhì)（4℃，14000×g，40min）→上清加酒精沉積含糖量（100%，3倍容積，4℃，解決12h）→離心式（12000×g，30min）→低溫干燥→沉積溫開水融解（稀釋液10倍）→分析MD34（4℃，解決12h）。經(jīng)試驗(yàn)認(rèn)證生產(chǎn)流程有效并行得通。EPS成分最終做到392.50mg/L，生產(chǎn)量為以前的1.49倍。為以后進(jìn)一步提純和深入分析乳酸菌飲料產(chǎn)胞外含糖量的構(gòu)造和生物活性等出示參照。