（2）黑豆活性多肽抗氧化與酶濃度值的關(guān)聯(lián)

參考于慧等的辦法開展DPPH氧自由基清除率的測量。將2mL一定含量的黑豆活性多肽水溶液和2mL的0.12mm01·L^-1DPPH水溶液開展混和，遮光于25℃標(biāo)準(zhǔn)下反映30min，取下后于517nm光波長下開展吸光度值的測量，這時OD值值紀(jì)錄為A_i；將以上全過程中的2mLDPPH水溶液用工業(yè)乙醇替代，隨后與2mL黑豆活性多肽水溶液開展反映，此前提下測量吸光度值紀(jì)錄為A_j，將2mL工業(yè)乙醇與2mLDPPH水溶液反映的標(biāo)準(zhǔn)做為空缺組，這時紀(jì)錄吸光度數(shù)值A(chǔ)o。結(jié)果如圖所示2所顯示。

由圖2得知，當(dāng)酶濃度值小于6％時，DPPH清除率伴隨著酶濃度值的提高而擴(kuò)大，當(dāng)酶濃度值超出6％時，DPPH清除率伴隨著酶濃度值的上升而減少?？傮w展現(xiàn)先升高后降低的根本原因取決于伴隨著酶濃度值的上升，合理酶濃度值慢慢增加。當(dāng)?shù)孜锏臐舛戎当３植粫淖?，合理酶濃度值慢慢增加，進(jìn)而具有抑制效果，使酶水解反應(yīng)的不完全，故水解反應(yīng)獲得的抗氧化性肽降低，從而造成DPPH清除率減少。

（3）黑豆活性多肽抗氧化與pH的關(guān)聯(lián)

本試驗取決于科學(xué)研究酶法對黑豆蛋白質(zhì)水解反應(yīng)的抗氧化性肽的技術(shù)提升，故以DPPH為指標(biāo)值，挑選酶解時間、酶解溫度、酶加上量及其pH為要素開展單要素試驗。更改反映pH，結(jié)果見3所顯示。
 

由圖中得知，當(dāng)pH在7.0～9.0時，DPPH的清除率伴隨著pH的擴(kuò)大慢慢擴(kuò)大，當(dāng)pH為9.00時，DPPH清除率做到最高值，為43.89％。當(dāng)pH超出9.0時，DPPH清除率慢慢減少。這是由于胰蛋白酶僅有在一定的pH區(qū)段內(nèi)有著較高的活力，當(dāng)胰蛋白酶處在偏酸或過堿的情況下時胰蛋白酶的構(gòu)造會被毀壞，造成一部分蛋白質(zhì)沒法徹底水解反應(yīng)，親水性官能團(tuán)未徹底曝露，促使轉(zhuǎn)化成肽的抗氧化性涪陛減少。

（4）黑豆活性多肽抗氧化與酶解時間的關(guān)聯(lián)

根據(jù)單要素試驗的結(jié)果，能夠挑選出各要素的三個水準(zhǔn)。因此在這個基礎(chǔ)以上，運(yùn)用數(shù)據(jù)分析手機(jī)軟件創(chuàng)建4要素3水準(zhǔn)的Box—Behnken實(shí)體模型，開展回復(fù)面可靠性設(shè)計。更改酶解時間結(jié)果見4所顯示。

二、結(jié)果與探討

1、單要素試驗結(jié)果

（1）黑豆活性多肽抗氧化與酶解溫度的關(guān)聯(lián)

將黑豆蛋白質(zhì)配備成一定含量的水溶液，水浴加熱至100℃開展15min勻質(zhì)解決。待水溶液降溫至酶解適宜溫度，水浴隔熱保溫，向水溶液中添加0.5mol／L的NaOH調(diào)整其pH，酶解一段時間后100℃水浴消滅10min，室內(nèi)溫度下離心式(4000r／min，20min)，將上清液干凍后儲存。結(jié)果如圖所示l所顯示。

由圖1得知，當(dāng)酶解溫度小于50℃，DPPH清除率與氣溫正相關(guān)，當(dāng)氣溫高于50℃時，DPPH清除率逐漸降低。這是由于胰蛋白酶對平穩(wěn)的需求較高，溫度過低會危害酶解的反應(yīng)速率，使酶解反映不完全，進(jìn)而危害抗氧化性肽的抗氧化性實(shí)際效果。而氣溫過高而會危害胰蛋白酶的活力，使蛋白質(zhì)酶的活性減少，沒法使蛋白質(zhì)水解反應(yīng)成具備抗氧化的小分子活性肽段，進(jìn)而使DPPH清除率減少。

（2）黑豆活性多肽抗氧化與酶濃度值的關(guān)聯(lián)

將2mL一定含量的黑豆活性多肽水溶液和2mL的0.12mm01·L^-1DPPH水溶液開展混和，遮光于25℃標(biāo)準(zhǔn)下反映30min，取下后于517nm光波長下開展吸光度值的測量，這時OD值值紀(jì)錄為A_i；將以上全過程中的2mLDPPH水溶液用沒有水酒精替代，隨后與2mL黑豆活性多肽水溶液開展反映，此前提下測量吸光度值紀(jì)錄為A_j，將2mL工業(yè)乙醇與2mLDPPH水溶液反映的標(biāo)準(zhǔn)做為空缺組，這時紀(jì)錄吸光度數(shù)值A(chǔ)o。結(jié)果如圖所示2所顯示。

由圖2得知，當(dāng)酶濃度值小于6％時，DPPH清除率伴隨著酶濃度值的提高而擴(kuò)大，當(dāng)酶濃度值超出6％時，DPPH清除率伴隨著酶濃度值的上升而減少?？傮w展現(xiàn)先升高后降低的根本原因取決于伴隨著酶濃度值的上升，合理酶濃度值慢慢增加。當(dāng)?shù)孜锏臐舛戎当３植粫淖?，合理酶濃度值慢慢增加，進(jìn)而具有抑制效果，使酶水解反應(yīng)的不完全，故水解反應(yīng)獲得的抗氧化性肽降低，從而造成DPPH清除率減少。

（3）黑豆活性多肽抗氧化與pH的關(guān)聯(lián)

本試驗取決于科學(xué)研究酶法對黑豆蛋白質(zhì)水解反應(yīng)的抗氧化性肽的技術(shù)提升，故以DPPH為指標(biāo)值，挑選酶解時間、酶解溫度、酶加上量及其pH為要素開展單要素試驗。

試驗標(biāo)準(zhǔn)開展試驗，更改反映pH，結(jié)果見3所顯示。

由圖中得知，當(dāng)pH在7.0～9.0時，DPPH的清除率伴隨著pH的擴(kuò)大慢慢擴(kuò)大，當(dāng)pH為9.00時，DPPH清除率做到最高值，為43.89％。當(dāng)pH超出9.0時，DPPH清除率慢慢減少。這是由于胰蛋白酶僅有在一定的pH區(qū)段內(nèi)有著較高的活力，當(dāng)胰蛋白酶處在偏酸或過堿的情況下時胰蛋白酶的構(gòu)造會被毀壞，造成一部分蛋白質(zhì)沒法徹底水解反應(yīng)，親水性官能團(tuán)未徹底曝露，促使轉(zhuǎn)化成肽的抗氧化性涪陛減少。