在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB5009.22—2016方式1：放射性核素稀釋液液相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜法的根基上開展了方式提升、改善，創(chuàng)建了制酒原材料及純糧酒中黃曲霉B1（AFTB1）的統(tǒng)計(jì)分析方法。試品經(jīng)工業(yè)甲醇∶水（7∶3）獲取后，凈化處理封閉液由TritionX-100的PBS改成超純水系統(tǒng)，粘度縮小、便于根據(jù)提純小柱。流動(dòng)性相改成工業(yè)甲醇和0.02%苯甲酸-2mmol／L乙酸銨，提升 了回應(yīng)抗壓強(qiáng)度。梯度方向過(guò)柱，經(jīng)高效率液相色譜儀分離出來(lái)，在ESI共價(jià)鍵方式下掃描儀，開展多反映檢測(cè)方式（MRM）檢驗(yàn)。

結(jié)果顯示，儀器設(shè)備精度優(yōu)良，不一樣濃度值標(biāo)高效液相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差（RSD%）均<6%；所制作校準(zhǔn)曲線線性相關(guān)優(yōu)良，0.05～10µg／L范疇內(nèi)相關(guān)系數(shù)r值>0.999；方式定量限為0.05µg／kg，方法檢出限<0.01μg／kg，均小于別的檢查方式。原材料與純糧酒的加標(biāo)回收率都是在90%～105%，徹底符合規(guī)定。此方法檢出限低、精確度高，提升了公司對(duì)AFTB1的嚴(yán)苛監(jiān)管。

釀造酒原材料具體有高粱米、麥籽、麥子、扁豆等，因制酒原材料使用量很大，釀酒廠一般對(duì)原材料大批量選購(gòu)，開展儲(chǔ)存應(yīng)用，一旦選購(gòu)原材料存有事故隱患或儲(chǔ)存不合理導(dǎo)致發(fā)霉，將造成一些對(duì)身體危害的霉菌毒素類化合物，在其中黃曲霉B1（AFTB1）對(duì)身體健康的傷害較大，為強(qiáng)毒副作用、強(qiáng)致癌物質(zhì)化學(xué)物質(zhì)，已被世衛(wèi)組織癌病組織（IARC）納入一級(jí)致癌物。

為了更好地嚴(yán)控黃曲霉對(duì)身體的損害風(fēng)險(xiǎn)性，進(jìn)而保證顧客的安全性，英國(guó)、日本、澳大利亞等眾多我國(guó)已公布了相關(guān)黃曲霉較大限定量的要求，在我國(guó)GB2761—2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》規(guī)范中也規(guī)定了糧食作物中的真菌毒素B1的較大限定，鳳香型制酒原材料（高粱米、麥籽、麥子、扁豆）中的較大限定各自為10µg／kg、5µg／kg、5µg／kg、5µg／kg。即便如此，但依然存有一定的風(fēng)險(xiǎn)性，因而創(chuàng)建精確、高效率的檢查方式至關(guān)重要。

現(xiàn)階段針對(duì)黃曲霉的檢查辦法具體有液相色譜儀-瑩光測(cè)定法、酶聯(lián)免疫吸咐篩選法、高光譜檢測(cè)法、薄層色譜法、放射性核素稀釋液液質(zhì)聯(lián)用法等。本科學(xué)研究創(chuàng)建了制酒原材料及純糧酒中AFTB1的液質(zhì)聯(lián)用（HPLC-MS／MS）測(cè)定法。該方式試品前解決較簡(jiǎn)易、檢驗(yàn)高效率、精確度高、檢出限更低，進(jìn)一步達(dá)到了顧客對(duì)食品衛(wèi)生安全高些的希望和我國(guó)對(duì)食品安全檢測(cè)更嚴(yán)的規(guī)定。

1原材料與方式

1.1原材料、實(shí)驗(yàn)試劑與儀器設(shè)備

試品：原材料（高粱米、麥籽、麥子），制成品酒源自于陜西西鳳酒股權(quán)有限責(zé)任公司。

實(shí)驗(yàn)試劑：苯甲酸、乙腈、工業(yè)甲醇、乙酸銨（分析純）、超純水系統(tǒng)。

實(shí)驗(yàn)儀器：高效率液相色譜儀串連質(zhì)譜儀器，十分天平秤，氮吹儀，免疫力親和柱。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：黃曲霉B1（AFTB1純凈度≥98%），放射性核素內(nèi)標(biāo)13C17-AFTB1（純凈度≥98%）。

1.2規(guī)范溶液的配制

AFTB1規(guī)范貯備液：稱量AFTB1為1.0mg，用乙腈滴定劑至100mL容量瓶，配置成10µg／mL規(guī)范貯備液。

放射性核素內(nèi)標(biāo)13C17-AFTB1切削液：精確移取0.5µg／mL的13C17-AFTB10.8mL，用乙腈滴定劑至10mL，配置成40ng／mL的放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液。

AFTB1系列產(chǎn)品規(guī)范切削液：移取AFTB1規(guī)范貯備液1.0mL至100mL容量瓶中，用乙腈滴定劑，配置成100ng／mL的AFTB1正中間規(guī)范液。再各自移取AFTB1正中間規(guī)范液5µL、10µL、50µL、100µL、200µL、500µL、800µL、1000µL至10mL容量瓶中，各自加500µL的40ng／mL放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液，用原始流動(dòng)性相滴定劑，配置成含量為0.05ng／mL、0.1ng／mL、0.5ng／mL、1.0ng／mL、2.0ng／mL、5.0ng／mL、8.0ng／mL、10.0ng／mL的全系列規(guī)范切削液，過(guò)0.22µm濾紙，待上機(jī)操作。

1.3儀器設(shè)備主要參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)

高效液相標(biāo)準(zhǔn)：離子交換柱：Shin-packXR-ODSIIIC18（2.0mmI.D*150mmL.，3.0μm）；進(jìn)樣量：10µL；流動(dòng)性相：A：0.02%苯甲酸-2mmol／L乙酸銨，B：工業(yè)甲醇；柱溫：40℃；流動(dòng)速度：0.3mL／min；停留時(shí)間：10ms。過(guò)柱方法：梯度方向過(guò)柱，見(jiàn)表1。

質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)：掃描儀方法：多級(jí)別反映檢測(cè)（MRM）；離子源：ESI，共價(jià)鍵方式；加溫塊溫度：450℃；DL溫度：250℃；做霧化氣流動(dòng)速度：3.0L／min；干躁氣流動(dòng)速度：15L／min；離子源插口工作電壓 4.5；停留時(shí)間：10ms。

1.4實(shí)驗(yàn)方式

1.4.1試品獲取

制酒原材料：精確稱量制酒原材料5g試品于50mL離心管架中，添加250µL放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液，漩渦震蕩攪拌，添加20mL工業(yè)甲醇-水（70 30），渦流攪拌，靜放30min完用均質(zhì)器勻質(zhì)3min，過(guò)玻纖過(guò)濾紙。精確移取滲瀝液4mL添加12mL的超純水系統(tǒng)，混和勻稱，待凈化處理。

酒樣：稱量2g酒樣，添加100µL放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液，添加4mL水，震蕩攪拌，待凈化處理。

1.4.2凈化處理

原材料：待免疫力親和柱維護(hù)流液盡后添加以上水溶液，以1滴／s的水流量根據(jù)免疫力親和柱，流完完用2×10mL超純水系統(tǒng)滲濾免疫力親和柱，當(dāng)然作用力流盡后擠干小柱，精確添加2×0.5mL工業(yè)甲醇過(guò)柱，加上1mL水?dāng)D干，搜集于色度試管嬰兒中，過(guò)0.22µm有機(jī)濾膜，待上機(jī)操作。

酒樣：待免疫力親和柱維護(hù)流液盡后添加1.4.1中酒樣水溶液，當(dāng)然作用力下滴，流完后加10mL雙蒸水滲濾柱頭，擠干；加2×0.5mL工業(yè)甲醇過(guò)柱，加上1mL水?dāng)D干，搜集于色度試管嬰兒中，過(guò)0.22µm有機(jī)濾膜，待上機(jī)操作。