3．1 安全系數(shù)評(píng)定

大家都知道，水產(chǎn)品養(yǎng)殖中運(yùn)用的微生物務(wù)必 是 安 全 的，對(duì)魚類、蝦類不可以有高致病。然 而，從 92 種小動(dòng)物用益生菌粉商品中分離出來出 123 個(gè)益生菌粉菌種，在其中 45 個(gè)菌種對(duì)抗菌素耐藥性，33．7%的益生菌粉商品被肺部感染克雷伯菌等嚴(yán)重危害性命的病原菌環(huán)境污染，并且還發(fā)覺了炭疽毒素呈陽(yáng)性的蠟樣芽孢鏈球菌( Bacillus cereus) 菌種，這對(duì)海產(chǎn)小動(dòng)物及人們的身心健康造成極大威協(xié)。由此可見，挑選用以水產(chǎn)品養(yǎng)殖的益生 菌 菌 種，開展安全評(píng)定為最重要一環(huán)。好氧水解酸化池備選菌苗不可以帶有一切質(zhì)粒編號(hào)的耐藥性遺傳基因或基因簇，不造成溶血癥圈，不帶有發(fā)病遺傳基因，不轉(zhuǎn)化成毒副作用新陳代謝物質(zhì)，且必須融合身體的亞急性、漫性毒副作用實(shí)驗(yàn)開展認(rèn)證。

 3．2 菌種鑒定

好氧水解酸化池菌種鑒定方式同基本微生物評(píng)定方式相近，包含基本組織學(xué)觀查、生理學(xué)生物化學(xué)剖析、16S rＲNA 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和全高通量測(cè)序等。歷經(jīng)菌種鑒定，可得知菌種的種、屬等信息內(nèi)容，這對(duì)進(jìn)一步科學(xué)研究菌苗的功能及具體運(yùn)用帶來了主要參照。實(shí)際來講，以飼料添加物方式喂養(yǎng)的菌苗需合乎各個(gè)國(guó)家要求 的 菌 種 文件目錄，如英國(guó)食物與藥品管理處( FDA) 和英國(guó)精飼料操縱高官研究會(huì)( AAFCO) 發(fā)布的可立即喂養(yǎng)微生物名冊(cè)( 46 種) 、歐盟國(guó)家準(zhǔn)予喂養(yǎng)的菌苗文件目錄( 72 種) 、在我國(guó)《飼料添加劑品種目錄》容許加上的微生物文件目錄( 35 種) ; 而改進(jìn)水質(zhì)自然環(huán)境的菌苗現(xiàn)階段暫未有明文規(guī)定，但必須合乎以前所提起的穩(wěn)定性規(guī)定。 

3．3 耐受力評(píng)定

益生菌粉可以起到功效的主要因素之一為承受所運(yùn)用的自然環(huán)境，而且可以在效用結(jié)構(gòu)域移栽生長(zhǎng)發(fā)育，保持較高 的 活 菌 水 平，而 后 才 能 發(fā) 揮 功 效( 圖 2) 。有別于陸生動(dòng)物，益生菌作用水產(chǎn)品生物的效用結(jié)構(gòu)域除開小動(dòng)物腸胃外，也有水環(huán)境治理。因而，挑選的備選好氧水解酸化池菌種必須承受所運(yùn)用的外自然環(huán)境，包含溫度、海水鹽度和 pH 等，喂養(yǎng)的益生菌粉還需歷經(jīng)胃液、膽鹽等的耐受力點(diǎn)評(píng)］。一般而言，可以不錯(cuò)達(dá)到這一規(guī)定的便是采用水塘或水產(chǎn)品小動(dòng)物胃腸道的原住民有益菌，在科學(xué)研究南美洲小紅點(diǎn)鮭( Salveli- nus fontinalis) 時(shí)發(fā)覺，同外源性益生菌粉對(duì)比，當(dāng)?shù)氐囊嫔鄄蝗菀子绊戶~肌膚粘液有益菌，是調(diào)整魚種微生物菌種生態(tài)系統(tǒng)更強(qiáng)的挑選; 也發(fā)覺，來源于草蝦腸胃的乳桿菌可以盡快融入小動(dòng)物腸胃，并且能抑制病源弧菌的發(fā)育繁育; 研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)鼐N越南地區(qū)芽胞鏈球菌( Bacillus vietnamensis ) VCM5、Bacillus vietnamensis VCM8和支氣管炎戈登菌(Gordoniabronchialis) VCM12 可明顯減少對(duì)蝦養(yǎng)殖污水中硝酸鹽成分，表明出不錯(cuò)的適應(yīng)能力。除此之外，一些必須在精飼料制作過程中增加的反水質(zhì)穩(wěn)定劑中藥制劑，還需考慮到規(guī)?；a(chǎn)飼料生產(chǎn)制造的高溫、髙壓耐受力，在這樣的情形下，運(yùn)用芽胞胞子很有可能更加適合。 

4 菌苗的復(fù)篩

好氧光合細(xì)菌的復(fù)篩包含: 運(yùn)用可選擇性培養(yǎng)液( selective culture medium ) 測(cè)算菌苗脫氮高效率、分辨脫氮種類及其依靠生物學(xué)和組學(xué)方式科學(xué)研究脫氮體制等流程。 

4．1 脫氮高效率科學(xué)研究

在好氧光合細(xì)菌脫氮高效率的分析中可選擇性培養(yǎng)液的秘方同飼養(yǎng)水質(zhì)的有機(jī)化學(xué)構(gòu)成存有差別，如表 1 所顯示，可選擇性培養(yǎng)液常見氮源為 NH4Cl、 NaNO3 及 NaNO2 等，常見的氮源為琥珀酸鈉、三聚磷酸鈉、葡萄糖水、綿白糖和凡士林等。殊不知，在水產(chǎn)品養(yǎng)殖水質(zhì)中常會(huì)為有機(jī)化學(xué)氮源欠缺，并且氮源變成營(yíng)養(yǎng)豐富的有機(jī)化學(xué)氮源。挑選培養(yǎng)液的富碳特點(diǎn)在具體的種植條件中非常少存有，水塘飼養(yǎng)自然環(huán)境多見低碳環(huán)保高氮，有別于工業(yè)生產(chǎn)廢水能夠 附加給予很多便宜有機(jī)化學(xué)氮源，飼養(yǎng)中很多有機(jī)化學(xué)氮源的使用也許會(huì)導(dǎo)致水產(chǎn)品小動(dòng)物氧氣不足風(fēng)險(xiǎn)性及微生物滋長(zhǎng)等現(xiàn)象發(fā)生?；?于 此， 直 接 配 制 0． 05 g /L 的 NaNO2 水溶液，并在這其中僅填補(bǔ) 1 g /L 破碎的魚料及排泄物以仿真模擬水塘中累積的有機(jī)化學(xué)化學(xué)物質(zhì)，為此光合細(xì)菌水塘仿真模擬培養(yǎng)液( pond-simulating denitri- fication screening medium，PSDSM) 開展菌苗挑選，得到了脫氮高效率理想化的好氧水解酸化池菌種 Bacillus subtilis M 7-1，與此同時(shí)，街邊運(yùn)用實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，該菌種對(duì)飼養(yǎng)水塘中的無機(jī)物氮也具備較高的溶解率。在有機(jī)化學(xué)氮( 蛋白胨、尿素溶液) 存有的情形下，科學(xué)研究 反 硝 化 細(xì) 菌 海 洋 著 色 菌 ( Marichromatium gracile) YL28 脫氮特性，發(fā)覺存有有機(jī)化學(xué)氮源且加上藻類低聚糖后，YL28 對(duì)無機(jī)物氮的清除工作能力明顯提高。由此可見，在光合細(xì)菌的挑選環(huán)節(jié)中，培養(yǎng)液中氮源、氮源的選用及合適的泥齡關(guān)聯(lián)著篩得菌種的脫氮特性，研究發(fā)現(xiàn)，大部分好氧光合細(xì)菌的較佳泥齡在 8 ～ 10，殊不知，飼養(yǎng)水塘中一般泥齡在6 ～ 8，因而在挑選培養(yǎng)液配置需考慮到這一差別，或在使用中填補(bǔ)緩凝氮源以保證菌苗的脫氮作用。

溫度是水解酸化池全過程的主要主要參數(shù)之一，已經(jīng)有科學(xué)研究表明，好氧光合細(xì)菌脫氮的適合溫度范圍為25 ～ 37 ℃。因而，在菌苗挑選的環(huán)節(jié)中塑造溫度可設(shè)置為 28 ～ 30 ℃ ( 表 1) ，但考慮到冷水魚養(yǎng)殖及秋春時(shí)節(jié)水質(zhì)脫氮的必須 ，嗜 冷 ( 10 ～ 15 ℃ ) 好氧光合細(xì)菌的挑選也至關(guān)重要。研 究 發(fā) 現(xiàn)，好氧反水質(zhì)穩(wěn)定劑中國(guó)臺(tái)灣假單胞菌( Pseudomonas taiwanensis) 在 15 ℃ 下對(duì)磷酸鹽的污泥負(fù)荷為 100%，具有超低溫脫氮工作能力。殊不知，伴隨著氣溫的 降 低，菌苗的水解酸化池高效率也會(huì)隨著減少;研究表明，在 10 ℃ 標(biāo)準(zhǔn)下，好氧反水質(zhì)穩(wěn)定劑孟氏假單胞菌( Pseudomonas mandelii) 同硝化反應(yīng)和硝化作用有關(guān)的基因的表達(dá)產(chǎn)生落后和延遲時(shí)間。不難看出，塑造溫度的制定必須整體考慮到菌苗適宜標(biāo)準(zhǔn)及所運(yùn)用的自然環(huán)境這 2 層面要素。

海水鹽度也危害著好氧光合細(xì)菌的脫氮高效率。研究表明，海水養(yǎng)殖的含鹽量( 20‰ ～ 35‰) 已能抑制普遍病菌的輔因子并可產(chǎn)生溶菌功效。在水解酸化池層面，研究表明，在高含鹽量下，水解酸化池全過程的作用遺傳基因 nirK 和 nosZ 的表述進(jìn)化速率大幅度降低，抑止了病菌的水解酸化池活力。而與此同時(shí)，抗鹽好氧光合細(xì)菌也已經(jīng)有科學(xué)研究報(bào)導(dǎo)，從鹽枯草芽孢菌屬( Halobacillus) 、海源菌屬( Idiomarina) 、現(xiàn)大洋芽胞桿菌屬( Oceanobacillus) 和枝芽胞菌屬( Virgibacillus) 等屬種中分劉海篩到水解酸化池嗜鹽菌;從青島市膠州灣海面堆積物中分離出來出 1 株水解酸化池深海嗜鹽菌弧菌; 分離出來挑選的 Bacillus sp．可以在 16 g /L 的 NaCl 中開展好氧硝化作用，這種分析對(duì)挑選海水養(yǎng)殖中運(yùn)用的抗鹽好氧光合細(xì)菌給予根據(jù)。