銀杏樹做為銀杏樹科綠色植物唯一活下來(lái)綠化植物，有動(dòng)物活化石之稱，其果、葉、根、蜂花粉等均可當(dāng)藥，在其中銀杏樹葉的提取液有很高的生物活性和不錯(cuò)的功效與作用，可作為草本植物膳食補(bǔ)充劑和綠色植物藥品。銀杏樹葉提取液功效關(guān)鍵聚集在抗氧化性、防癌、釋放壓力、改進(jìn)認(rèn)知功能（記憶能力和專注力）和血液循環(huán)系統(tǒng)，防止并治療耳鳴、脂肪性肝炎肝損害、糖尿病患者、神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病等。銀杏樹葉提取液中的生物活性關(guān)鍵得益于黃酮類化合物、多糖類和三萜類，故黃酮類化學(xué)物質(zhì)和三萜類的成分指標(biāo)值是分辨銀杏樹葉提取液品質(zhì)的規(guī)范。

銀杏樹葉以及提取液中黃酮類含量檢測(cè)方式具體有光度法、近紅外光譜儀法、瑩光分光光度法、液相色譜儀法、液質(zhì)聯(lián)用等，在其中液相色譜儀法具備儀器設(shè)備價(jià)錢較低、實(shí)際操作簡(jiǎn)易、精確性高、方法檢出限劣等優(yōu)勢(shì)，在真實(shí)中運(yùn)用較多。大部分HPLC法測(cè)銀杏樹中黃酮類成分時(shí)，先水解反應(yīng)試品，使當(dāng)中的化合態(tài)黃酮類變化為化合態(tài)黃酮類，以測(cè)到化合態(tài)和化合態(tài)之和一黃酮類物質(zhì)成分，來(lái)判斷其黃酮類物質(zhì)品質(zhì)。有很多非法商人運(yùn)用這一特點(diǎn)，在銀杏樹葉以及提取液中增加別的含原兒茶醛、山柰酚等較高的化學(xué)物質(zhì)，以實(shí)現(xiàn)有關(guān)規(guī)范中有關(guān)銀杏樹葉提取液黃酮類成分指標(biāo)值規(guī)定，假冒偽劣，對(duì)銀杏樹葉提取液的品質(zhì)分辨發(fā)生了一定的影響，因而必須創(chuàng)建一種測(cè)量銀杏樹葉以及提取液中分散黃酮類成分的方式 ?，F(xiàn)階段有關(guān)分散黃酮類的科學(xué)研究大部分聚集在液質(zhì)聯(lián)用等較珍貴儀器設(shè)備，HPLC法科學(xué)研究較少，如蒲擎宇等以工業(yè)甲醇為獲取有機(jī)溶劑，檢驗(yàn)銀杏樹中原兒茶醛、三奈酚、異鼠李素3種分散黃酮類成分，但該方式用時(shí)長(zhǎng)，加溫流回需6h，有機(jī)溶劑耗費(fèi)大。

文中致力于創(chuàng)建能同測(cè)量銀杏樹葉及提取液中蘆丁、原兒茶醛、山柰酚、異鼠李素4種分散黃酮類成分的方式 ，務(wù)求減少現(xiàn)場(chǎng)采樣，減少耗能。與此同時(shí)點(diǎn)評(píng)目前市面上銀杏樹葉提取液中分散黃酮類成分水準(zhǔn)，剖析原材料及提取液中間相匹配各分散黃酮類成分關(guān)聯(lián)，以求更強(qiáng)為公司生產(chǎn)制造給予技術(shù)服務(wù)和服務(wù)項(xiàng)目。

一、原材料與方式

1、原材料與儀器設(shè)備

蘆丁、原兒茶醛、山柰酚、異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，均購(gòu)于sigma企業(yè)，純凈度分別為96.6％、99.5％、97.0％、95.0％；硫酸銨、工業(yè)甲醇、酒精、超純水系統(tǒng)，在其中工業(yè)甲醇為色譜純，其他均為分析純；銀杏樹葉3批、銀杏樹葉提取液3批。Waterse2695高效液相（配置紫外線探測(cè)器）；恒溫水浴鍋（配置冷疑流回系統(tǒng)軟件）；超聲清洗器。

2、實(shí)驗(yàn)方式

（1）規(guī)范溶液的配制

各自稱量蘆丁、原兒茶醛、山柰酚、異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)6.06mg、4.67mg、6.00mg、1.07mg于50mL容量瓶中，用工業(yè)甲醇超聲波融解后滴定劑，即得0.1212mg/mL蘆丁、0.0934mg/mL原兒茶醛、0.1200mg/mL山柰酚、0.0214mg/mL異鼠李素混和標(biāo)液。

（2）銀杏樹供試試品液的制取

銀杏樹葉：銀杏樹葉原材料破碎篩粉攪拌后，稱量5g試品，100mL工業(yè)甲醇提純?cè)傺a(bǔ)重，攪拌，過0.459m有機(jī)化學(xué)系濾紙，被測(cè)。

銀杏樹葉提取液：稱0.5g提取液于50rIlL容量瓶中，添加小量工業(yè)甲醇超聲波融解，制冷至室內(nèi)溫度，工業(yè)甲醇滴定劑，攪拌，過0.459m有機(jī)化學(xué)系濾紙，被測(cè)。

(3）4種分散黃酮類成分的測(cè)算

C_樣=S_樣×C_標(biāo)×V×100/（S_標(biāo)×m_樣×1000）式中：C_樣為試品中某一成份分散黃酮類成分，％；S_樣為試品中相匹配分散黃酮類峰總面積；S_標(biāo)為相匹配標(biāo)樣峰總面積；m_樣為試品稱樣量，g；V為試品液滴定劑容積。

二、結(jié)果與剖析

1、色譜儀標(biāo)準(zhǔn)的提升

根據(jù)提升進(jìn)樣量（3μL、5μL和10μL）和過柱程序流程（等度和梯度方向），明確提升后色譜儀標(biāo)準(zhǔn)為：

離子交換柱：AgilentEclipsePlusC18（4.6mm×100mm，3.5μm）柱溫：40⁰C；

進(jìn)樣量：5μL；

流動(dòng)性相：A：0.4％硫酸銨溶液，B：工業(yè)甲醇，梯度方向過柱程序流程見表1。

提升后的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)下銀杏樹葉提取液的高效液相圖普如圖所示1所顯示。

2、銀杏樹葉前解決標(biāo)準(zhǔn)提升0.2在其它標(biāo)準(zhǔn)一定的情形下，單要素試驗(yàn)認(rèn)證提純方法、提純時(shí)間、提純溫度、流回時(shí)間對(duì)提純實(shí)際效果的危害。

（1）提純方法的挑選

稱量5g原材料，添加100mL工業(yè)甲醇，選用超聲波提純和加溫流回提純，較為超聲波和流回二種方法提純實(shí)際效果，結(jié)果如圖所示2所顯示。由圖2得知，在提純時(shí)間各自為30min、60min、90min時(shí)，加溫流回提純銀杏樹葉總分散黃酮類成分均高過超聲波流回方法，故銀杏樹葉提純方法選為加溫流回。

（2）提純時(shí)間的挑選

稱量5g原材料，添加100mL工業(yè)甲醇，80℃加溫流回提純銀杏樹原材料選擇原材料，提純時(shí)間各自為0min、5min、10min、20min、30min、60min、90min，比照結(jié)果如圖所示3所顯示。

由圖3得知，流回提純30min時(shí)分散黃酮類的結(jié)果已保持穩(wěn)定，增加提純時(shí)間檢驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著轉(zhuǎn)變，故提純時(shí)間當(dāng)選30min。

根據(jù)單要素試驗(yàn)認(rèn)證，提升后銀杏樹葉中分散黃酮類前解決標(biāo)準(zhǔn)為工業(yè)甲醇800C加溫流回30min。

3、標(biāo)曲和線形范疇

對(duì)混和標(biāo)液做2倍梯度方向濃度值稀釋液，所得的蘆丁、原兒茶醛、山柰酚、異鼠李素線性方程、相關(guān)系數(shù)r、線性方程見表2。