目地

選用HPLC光波長轉(zhuǎn)換法一起測量喘舒片中硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚、黃酮類物質(zhì)甲醚的成分。

方式

選用AgilentTC-C18（2）離子交換柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇-0.1%硫酸銨水溶液，梯度方向過柱，檢驗(yàn)光波長各自為245、278、254nm，流動(dòng)速度1.0mL·min-1，柱溫35℃。結(jié)果硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚和黃酮類物質(zhì)甲醚的線形范疇各自為0.92～18.28（r=0.9989）、63.75～1275（r=0.9999）、11.07～221.4（r=0.9996）、6.07～121.40（r=0.9995）、1.20～24.10（r=0.9998）、1.20～24.08（r=0.9994）、2.08～24.16（r=0.9999）、2.89～57.88（r=0.9993）、1.79～35.80（r=0.9997）μg·mL-1；均值加樣利用率各自為98.62%、100.02%、99.84%、97.35%、98.38%、98.92%、100.23%、99.84%、97.74%，RSD各自為1.28%、1.61%、0.78%、1.02%、2.57%、1.80%、1.53%、1.29%、2.42%；9種成分在試樣中的成分各自為每片8.65×10-3～0.01104、49.460～57.464、0.864～1.883、0.215～0.388、0.0371～0.0866、0.0399～0.131、0.0464～0.0916、0.143～0.327、0.154～0.267mg。

結(jié)果

常用方式簡單、精確、可重復(fù)性好，敏感度高，可用以喘舒片的質(zhì)量管理。

喘舒片產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)載于于國家衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥材成方中藥制劑第三冊（標(biāo)準(zhǔn)號：WS3-B-0636-91），是由升華硫、大黃粉、硫酸克倫特羅和柴胡提取液（以黃芩苷計(jì)）構(gòu)成的中藥西藥復(fù)方制劑，適用漫性急性支氣管炎、慢性支氣管炎、肺炎，尤其是實(shí)喘氣性支氣管炎的醫(yī)治。聚瑞黃連具抑菌、消腫、止血方法的功效；升華硫、硫酸克倫特羅能止咳化痰、止咳化痰、清咽，用以預(yù)防慢性支氣管炎、漫性喘氣性急性支氣管炎、肺炎等病癥造成的支氣管痙攣；柴胡提取液清熱解毒化濕，尤善清上焦熱邪，具抗菌、抗感染、抗超敏反應(yīng)、減輕哮喘病、解筋攣等功效。諸藥相和，做到清肺潤肺、止咳化痰清咽的作用。中國有河南省華峰制藥業(yè)有限責(zé)任公司和山東省百維醫(yī)藥有限責(zé)任公司倆家喘舒片制造業(yè)企業(yè)，前面一種選用HPLC法各自對硫酸克侖特羅和黃芩苷開展雙組分成分測量，后面一種選用UV法操縱硫酸克侖特羅的成分。參考文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)中相關(guān)喘舒片指標(biāo)性成份的含水量測量常見于單一藥味成份的科學(xué)研究，研究組早期曾選用HPLC法一起測量了喘舒片中5種萘醌類成份的成分。中藥西藥復(fù)方制劑的功效是由多組分一同功效的結(jié)果，單一成分的定性分析難以達(dá)到對中藥制劑總體質(zhì)量管理的目地，為全方位高效地操縱喘舒片的品質(zhì)，現(xiàn)選用HPLC光波長轉(zhuǎn)換法一起測量喘舒片中硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚和黃酮類物質(zhì)甲醚等9種成份的成分，為全方位點(diǎn)評喘舒片的總體品質(zhì)保證了根據(jù)。

1試驗(yàn)一部分

1.1儀器設(shè)備與試藥

1260型高效率液相色譜（英國安捷倫）。硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚、黃酮類物質(zhì)甲醚等標(biāo)準(zhǔn)品（100072-201503、110715-201619、111595-200503、111514-200403、110795-201007、0757-200206、110756-201512、110796-201520、110758-201013，成分各自為90.5%、93.5%、99.8%、99.8%、98.0%、98.8%、98.7%、99.2%、99.8%）。喘舒片（河南省華峰制藥業(yè)有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號各自為：20180104、20181101、20190802、20191001、20191101；山東省百維醫(yī)藥有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號：20190412）；乙腈為色譜純；硫酸銨為優(yōu)級純；水為礦泉水。

1.2方式與結(jié)果

1.2.1色譜儀標(biāo)準(zhǔn)與系統(tǒng)軟件適用范圍的實(shí)驗(yàn)

選用AgilentTC-C18（2）離子交換柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇（A）-0.1%硫酸銨水溶液（B），梯度方向過柱（0～5min、50%A，5～35min、50%～70%A，35～55min、70%～75%A，55～60min、75%～50%A），流動(dòng)速度1.0mL·min-1，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL，檢驗(yàn)光波長各自為245nm（硫酸克侖特羅）、278nm（黃芩苷、黃芩素）、254nm（蘆薈大黃素、漢黃芩素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚、黃酮類物質(zhì)甲醚）。

取混和標(biāo)準(zhǔn)品、供試品及各呈陰性試品水溶液各10μL，在以上色譜儀標(biāo)準(zhǔn)下各自氣相，紀(jì)錄色譜（圖1）。各被測成份色譜儀峰均能做到基準(zhǔn)線分離出來，分離度超過1.5，各成分消化吸收峰的基礎(chǔ)理論板數(shù)均不少于3.0×103，呈陰性試品水溶液圖普表明別的成份對9種待測成份無影響。

1.2.2水溶液的制取

高精密稱量硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚和黃酮類物質(zhì)甲醚標(biāo)準(zhǔn)品適當(dāng)，置同一量瓶中，加工業(yè)甲醇融解并滴定劑，制取各自含18.28μg·mL-1硫酸克侖特羅、1.275mg·mL-1黃芩苷、0.2214mg·mL-1黃芩素、121.4μg·mL-1漢黃芩素、24.1μg·mL-1蘆薈大黃素、24.08μg·mL-1黃連酸、24.158μg·mL-1黃酮類物質(zhì)、57.88μg·mL-1黃連酚、35.80μg·mL-1黃酮類物質(zhì)甲醚的混和標(biāo)準(zhǔn)品水溶液。

取喘舒片供試品適當(dāng)，去除薄膜包衣，研細(xì)，取1.0g超細(xì)粉，高精密稱取，置具塞錐形瓶中，高精密添加25mL工業(yè)甲醇，密塞，稱取凈重，超聲波獲取30min，取下，制冷至室內(nèi)溫度，秤重，用工業(yè)甲醇補(bǔ)充減失的凈重，混勻，濾過，取續(xù)滲瀝液做為供試品水溶液。按喘舒片的藥方和配制方式，各自制取缺硫酸克侖特羅、缺柴胡提取液、缺大黃粉的呈陰性試品，同法各自做成各呈陰性試品水溶液。

1.2.3線性相關(guān)的調(diào)查

高精密汲取“1.2.2”項(xiàng)下混和標(biāo)準(zhǔn)品水溶液0.5、1、2、5、8、10mL，各自置10mL量瓶中，加工業(yè)甲醇稀釋液并滴定劑，制取系列產(chǎn)品濃度值對比水溶液。各自氣相測量，紀(jì)錄峰總面積，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度值為橫坐標(biāo)軸、峰總面積為縱軸開展回歸分析，得線性回歸方程，線形范疇及相關(guān)系數(shù)r（表1）。

1.2.4精度、可重復(fù)性與可靠性的實(shí)驗(yàn)

高精密汲取“1.2.2”項(xiàng)下混和標(biāo)準(zhǔn)品水溶液，持續(xù)氣相6次，測算得硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚和黃酮類物質(zhì)甲醚峰總面積的RSD各自為1.21%、0.74%、0.48%、1.72%、0.89%、1.51%、0.60%、1.43%、1.83%，說明儀器設(shè)備的精度優(yōu)良。取喘舒片試品（生產(chǎn)批號：20191101），按“1.2.2”項(xiàng)方式平行面制取6份供試品水溶液，各自氣相測量，測算得硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚和黃酮類物質(zhì)甲醚成分的RSD各自為2.23%、1.02%、1.27%、1.74%、2.04%、1.48%、1.82%、2.64%，說明方式的可重復(fù)性優(yōu)良。

取同一供試品水溶液，在常溫狀態(tài)，各自于制取后0、2、4、6、8、12、24h后入樣剖析，測算得硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚和黃酮類物質(zhì)甲醚峰總面積的RSD各自為1.80%、1.49%、1.32%、1.71%、2.33%、1.79%、1.72%、2.03%、2.38%，說明供試品水溶液在24h內(nèi)可靠性優(yōu)良。

1.2.5加樣利用率的實(shí)驗(yàn)

高精密稱量成分已經(jīng)知道的喘舒片試品（生產(chǎn)批號：20191101）粉末狀6份，添加等同于試品成分100%的標(biāo)準(zhǔn)品水溶液，按“1.2.2”項(xiàng)方式制取供試品水溶液，各自氣相，紀(jì)錄峰總面積，測算加樣利用率。

硫酸克侖特羅、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、黃連酸、黃酮類物質(zhì)、黃連酚和黃酮類物質(zhì)甲醚的均值加樣利用率各自為99.62%、100.02%、99.84%、97.35%、98.38%、98.92%、100.23%、99.84%、97.74%，RSD各自為1.28%、1.61%、0.78%、1.02%、2.57%、1.80%、1.53%、1.29%、2.42%。

1.2.6試品的含水量測量

取6批喘舒片試品，各自按“1.2.2”項(xiàng)方式制取供試品水溶液，按“1.2.1”項(xiàng)色譜儀標(biāo)準(zhǔn)測量，選用外標(biāo)法測算一片試品中各被測成分的成分（表2）。

2探討

在喘舒片藥方中，硫酸克倫特羅屬少量成份（標(biāo)識量為一片10μg），柴胡提取液（以黃芩苷計(jì)）的基礎(chǔ)理論成分為一片60mg，二種成分的含量的極大差別讓與此同時(shí)測量二者的成分較為艱難。參照藥方中一部分被測成分的基礎(chǔ)理論成分，并融合試品剖析圖普中各被測成分的相應(yīng)成分，經(jīng)多次試驗(yàn)探索，最后原文中對比溶液的濃度，在試驗(yàn)濃度值范疇內(nèi)，9種待測成分的成分均在線性擬合線性回歸方程的線形范疇內(nèi)。曾調(diào)查了不一樣含量的甲醇溶液及工業(yè)甲醇-硫酸（100∶1）做為有機(jī)溶劑的超聲波獲取實(shí)際效果。

結(jié)果顯示：以工業(yè)甲醇-硫酸（100∶1）為獲取有機(jī)溶劑時(shí)，液相色譜儀圖普殘?jiān)逶黾?，黃芩素色譜儀峰與鄰近殘?jiān)鍥]法完成基準(zhǔn)線分離出來。黃芩苷色譜儀峰消退，黃芩苷為一元弱酸化學(xué)物質(zhì)，與強(qiáng)酸強(qiáng)堿功效具備多名反映點(diǎn)，推斷很有可能在酸堿性環(huán)鏡中發(fā)生了酸催化的水解反應(yīng)。以工業(yè)甲醇為獲取有機(jī)溶劑，超聲波獲取30min，獲取實(shí)際效果最好是，色譜殘?jiān)迳?，基?zhǔn)線平穩(wěn)，9個(gè)總體目標(biāo)物與鄰近峰均能徹底分離出來，分離度超過1.5。曾調(diào)查了工業(yè)甲醇-水、乙腈-水、乙腈-工業(yè)甲醇-硫酸銨-水、乙腈-硫酸銨-水等流動(dòng)性相系統(tǒng)軟件，最后挑選原文中流動(dòng)性相系統(tǒng)軟件，完成了9種待測成份和鄰近殘?jiān)宓膬?yōu)良分離出來。

選用HPLC-DAD在190～400nm掃描儀，數(shù)據(jù)顯示：硫酸克侖特羅的最高消化吸收光波長為245nm，黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素在220、278、318nm均有比較大消化吸收，大黃粉中萘醌類成份在254～265nm有極強(qiáng)的紫外線消化吸收。

因而，原文中選用245、278、254nm做為測量光波長，可完成對供試品水溶液中9種總體目標(biāo)物的優(yōu)良分離出來，達(dá)到方法學(xué)調(diào)查的規(guī)定。