干茶顏色是綠茶葉的第一感觀因素,也是荼葉生產(chǎn)過程中鑒定在產(chǎn)品品質(zhì)的主要參照根據(jù)。脂溶性黑色素是綠茶葉干茶顏色的首要物質(zhì)條件,關(guān)鍵包含葉綠素和胡羅卜素。葉綠素屬吡咯類翠綠色黑色素,是危害綠茶葉干茶綠色顏色的關(guān)鍵成份。胡羅卜素就是指一類具備淡黃色到橘紅色的多種多樣有色板塊化學(xué)物質(zhì),是組成干茶淡黃色顏色的關(guān)鍵因素,與此同時(shí)對普洱茶的香味質(zhì)量有主動(dòng)危害?，F(xiàn)階段荼葉中已發(fā)現(xiàn)41種葉綠素和38類型胡羅卜素,但因?yàn)榍啡毕嚓P(guān)脂溶性黑色素成分與綠茶葉干茶顏色的關(guān)聯(lián)性科學(xué)研究,無法表現(xiàn)各黑色素成分對干茶顏色質(zhì)量的功效。

現(xiàn)階段測量荼葉中脂溶性著色劑的辦法有光度法、薄層色譜法和液相色譜儀法等。光度法定量分析精確性和敏感度稍低,薄層色譜法評定的黑色素成分有可能是混合物質(zhì)且用時(shí)久,現(xiàn)階段多選用高效液相色譜色譜法檢驗(yàn)荼葉中脂溶性黑色素。但中國用以檢驗(yàn)荼葉中脂溶性著色劑的辦法大多數(shù)存有分離出來實(shí)際效果不太理想化,可測量黑色素類型少等難題。ZAPATA等根據(jù)應(yīng)用C8反方向離子交換柱,并在流動(dòng)性看中加上吡啶/醋酸溶液以改進(jìn)峰形所確立的脂溶性黑色素統(tǒng)計(jì)分析方法具備分離度好,可評定成分多等優(yōu)勢,國際性上對其運(yùn)用日益增加,但在我國的茶學(xué)行業(yè)運(yùn)用尚不普遍。

制作工藝對綠茶葉脂溶性著色劑的干擾很大。研究表明,綠茶葉生產(chǎn)加工中脂溶性黑色素在酶、熱和機(jī)械設(shè)備外力作用等要素的效果下產(chǎn)生溶解,轉(zhuǎn)化成一系列葉綠素和胡羅卜素的化合物。結(jié)束是產(chǎn)生綠茶葉“白湯綠葉子”質(zhì)量的重要工藝流程,與此同時(shí)也是葉綠素溶解產(chǎn)生脫鎂葉綠素最明顯的環(huán)節(jié)。攤青對條型綠茶葉的光合強(qiáng)度危害并不大,但提升攤青工作壓力和頻次會擴(kuò)大葉綠素的毀壞率。胡羅卜素成分在綠茶葉生產(chǎn)過程中明顯降低,尤其是經(jīng)結(jié)束和干躁后減幅各自做到52%和67%。干躁方法對脂溶性黑色素危害比較大,低溫干燥和微波干燥機(jī)解決有助于降低綠茶葉葉綠素和β-胡羅卜素等脂溶性著色劑的損害。出香味是綠茶葉生產(chǎn)加工中提高荼葉香味質(zhì)量的主要工藝流程,但在提升香味的與此同時(shí),較難確保綠茶葉“三綠”的顏色質(zhì)量規(guī)定?，F(xiàn)階段少見相關(guān)出香味工藝流程對脂溶性黑色素成分及干茶顏色危害的科學(xué)研究。

本探討選用高效率液相色譜儀-二極管列陣探測器對綠茶葉生產(chǎn)過程中在產(chǎn)品的脂溶性黑色素開展測量,與此同時(shí)選用色度計(jì)檢測在產(chǎn)品外型顏色的轉(zhuǎn)變 ,致力于表明脂溶性黑色素在綠茶葉生產(chǎn)加工中的變化趨勢以及與干茶顏色的相互關(guān)系,研究危害綠茶葉顏色的重要黑色素成份,為綠茶葉顏色質(zhì)量的管控給予理論來源。

1 原材料與方式

1.1 實(shí)驗(yàn)原材料

1.1.1 原材料與實(shí)驗(yàn)試劑

茶茶青原材料：重慶巴渝特早,一芽一葉,2018年9月采于重慶重慶巴南區(qū)。黃體生成素(98%)、玉米黃素(98%)、β-胡羅卜素(98%),上海源葉生物技術(shù)有限責(zé)任公司；葉綠素a(90%)、葉綠素b(90%),上海市邁瑞爾有機(jī)化學(xué)技術(shù)性有限責(zé)任公司；脫鎂葉綠素a(95%),英國FrontierScientific公司；甲苯、工業(yè)甲醇、乙腈、沒有水吡啶、冰乙酸,均為色譜純,成都科龍化工廠試劑廠。

1.1.2 儀器設(shè)備與機(jī)器設(shè)備

M20A高效率液相色譜,日本安捷倫儀器企業(yè)；UltraScanPRO色差儀,英國HunterLab企業(yè)；雷磁pHS25型pH計(jì),上海儀電儀器設(shè)備股權(quán)有限責(zé)任公司；5810R冷凍離心機(jī),法國艾本德企業(yè)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方式

1.2.1 試品制取

茶青原材料生產(chǎn)成綠茶葉茶青的加工工藝如下所示：

攤青(室內(nèi)溫度,10h)→結(jié)束(320℃,1min)→攤青(室內(nèi)溫度,空壓10min-擠壓10min-壓力30min-擠壓10min)→干躁(110℃,20min)

生產(chǎn)過程樣選用液態(tài)氮固樣,低溫干燥后破碎過40目篩密封性。試品均放置-40℃冰柜存放預(yù)留,每一個(gè)試品反復(fù)抽樣3次。

選擇生產(chǎn)制造上常見的3個(gè)出香味溫度,即80、100、120℃對綠霉茶開展出香味解決,在其中80℃出香味,每過60min抽樣,總共6次,試品各自序號T101、T102、T103、T104、T105、T106；100℃出香味每過45min抽樣,總共6次,試品各自序號T201、T202、T203、T204、T205、T206；120℃出香味每過30min抽樣,總共6次,試品各自序號T301、T302、T303、T304、T305、T306。出香味制取的試品破碎過40目篩后裝進(jìn)密封袋,放置-40℃冰柜存放預(yù)留,每一個(gè)試品反復(fù)抽樣3次。

1.2.2 色素提取與HPLC剖析標(biāo)準(zhǔn)

精確稱量0.100g試品于事先制冷的研缽中,添加80%甲苯溶液(-4℃)2mL碾磨至勻漿狀,經(jīng)冷藏離心式(-20℃,4000r/min,10min)后遷移上清液。反復(fù)以上實(shí)際操作,合拼上清液,滴定劑至5mL,過0.45μm有機(jī)膜,引入樣品瓶被測。HPLC剖析標(biāo)準(zhǔn)論文參考文獻(xiàn)ZAPATA等、鄧春梅等的方式 ,并依據(jù)具體情況做適度改動(dòng)。離子交換柱:WatersC8柱(150mm×4.6mm,3.5μm)；流動(dòng)性相A:V(工業(yè)甲醇)∶V(乙腈)∶V(吡啶/醋酸溶液)=50∶25∶25；流動(dòng)性相B:V(工業(yè)甲醇)∶V(乙腈)∶V(甲苯)=20∶60∶20；吡啶/冰醋酸溶液的配制如下所示:20mL吡啶溶解900mL超純水系統(tǒng),遲緩滴入冰醋酸直至pH值變成5.0,接著用超純水系統(tǒng)滴定劑到1L；流動(dòng)速度為1mL/min,柱溫箱溫度25℃；梯度方向過柱程序流程:0-22-28-38-40min,0%B-40%B-95%B-95%B-0%B；氣相容積:10μL:檢驗(yàn)光波長340～740nm。

1.2.3 黑色素成分判定定性分析

參照SUZUKI等及陳麗等的檢驗(yàn)結(jié)論中的有效期限和特點(diǎn)消化吸收光波長對色譜儀峰開展判定,選用外標(biāo)法開展定量分析,標(biāo)曲如表1所顯示。各成分在430nm處均有一定硬度的消化吸收峰,因而選用430nm下的峰總面積開展定量分析測算。因?yàn)檩比~脂溶性黑色素類型多樣且絕大多數(shù)黑色素沒有商業(yè)化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)售賣,在本實(shí)驗(yàn)中沒有標(biāo)準(zhǔn)品的成分依據(jù)文獻(xiàn)資料報(bào)導(dǎo)的更換計(jì)算方式開展定量分析,即葉綠素a同分異構(gòu)體用葉綠素a標(biāo)曲定量分析,葉綠素b同分異構(gòu)體用葉綠素b標(biāo)準(zhǔn)曲線圖定量分析,其他無標(biāo)準(zhǔn)品的葉綠素成分及胡羅卜素成分各自依據(jù)脫鎂葉綠素a和黃體生成素的標(biāo)曲定量分析。

1.2.4 干茶偏色的檢驗(yàn)

選用L^∗-a^∗-b^∗表色調(diào)。取40目下的試品粉末狀,用色差儀測量其L^∗、a^∗、b^∗,每一個(gè)試品反復(fù)測量3次。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

選用SPSS25.0開展單要素和多要素方差分析；選用SIMCA14.1開展偏最小二乘剖析；選用Origin2019做圖。