黑果腺肋花楸別名不老莓、野櫻莓，屬被子植物門(mén)綠色植物。營(yíng)養(yǎng)豐富，果子中含有原花青素、花青素及其黃酮類等各種作用成份，具備抗感染、防輻射、降血脂、護(hù)肝等作用，與此同時(shí)還能消除人體氧自由基。果子既可生吃，也可以生產(chǎn)加工制做保健飲品、水果汁、水果酒和蘋(píng)果醬等食品類，具備健脾胃行氣、養(yǎng)血止咳化痰的功效。現(xiàn)階段世界各國(guó)對(duì)黑果腺肋花楸的科學(xué)研究非常少，開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)和運(yùn)用其作用成份對(duì)日后的科學(xué)研究至關(guān)重要。

花色苷是一類普遍出現(xiàn)于綠色植物身體的水溶的黃酮類化合物、多糖類天然色素，是由原花青素與各種各樣糖原產(chǎn)生的糖苷。其中95％的花色苷中都帶有六種原花青素，即大花天竺葵黑色素、矢車(chē)菊素、飛燕草黑色素、芍藥花黑色素、喇叭花黑色素和錦葵黑色素，根據(jù)強(qiáng)堿水解反應(yīng)可將原花青素轉(zhuǎn)換成6種普遍花色素中的一種或幾類。原花青素具備極強(qiáng)的抗氧化，可以消除人體內(nèi)的氧自由基，抑止肝脂類的過(guò)氧化物狀況，并展現(xiàn)一定的量效關(guān)聯(lián)，可以阻攔臭氧對(duì)DNA、蛋白、脂類和別的分子伴侶的危害，消除有毒的氧自由基，因而具備防止心腦血管疾病，預(yù)防癌癥，減輕糖尿病患者，保護(hù)視力等作用，如今早已被使用到食品類、藥物、保健產(chǎn)品、護(hù)膚品等中?，F(xiàn)階段，并未見(jiàn)有關(guān)黑果腺肋花楸提取液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素成分檢測(cè)的報(bào)導(dǎo)。文中參考有關(guān)參考文獻(xiàn)，供試品水溶液制取選用加溫流回堿化工業(yè)甲醇水解反應(yīng)法，該加工工藝成熟穩(wěn)定且簡(jiǎn)易容易實(shí)際操作。選用HPLC測(cè)定方法黑果腺肋花楸提取液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的成分，為黑果腺肋花楸果的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)運(yùn)用給予實(shí)驗(yàn)根據(jù)。

一、原材料與方式

1、原材料與實(shí)驗(yàn)試劑

黑果腺肋花楸提取液(吉林化工學(xué)校有機(jī)化學(xué)與制藥業(yè)工程學(xué)校試驗(yàn)室自做)；鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素(標(biāo)準(zhǔn)品，HPLC≥98％，成都市曼思特生物技術(shù)有限責(zé)任公司)；工業(yè)甲醇、硫酸銨(色譜純，天津大茂化學(xué)藥品企業(yè))；水為主純凈水；其他常用實(shí)驗(yàn)試劑均為國(guó)內(nèi)分析純。

2、儀器設(shè)備與機(jī)器設(shè)備

LC-2000型高效率液相色譜(大連市依利特分析儀有限責(zé)任公司)；W5-100SP型恒溫水浴鍋(上海市申生高新科技有限責(zé)任公司)；FA-2004N型電子器件電子分析天平(上海精密科學(xué)研究?jī)x有限責(zé)任公司)；KQ250DE超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器設(shè)備有限責(zé)任公司)；TU-1950雙光束紫外線由此可見(jiàn)光度計(jì)(北京市普析通用儀器設(shè)備有限責(zé)任公司企業(yè))；T-50溶劑過(guò)濾器(天津?qū)嶒?yàn)儀器有限責(zé)任公司)；RE-52AA無(wú)油真空泵(天津津騰實(shí)驗(yàn)儀器有限責(zé)任公司)。

3、方式

（1）黑果腺肋花楸提取液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的HPLC成分測(cè)定法

①色譜儀標(biāo)準(zhǔn)離子交換柱為大連市依利特ODS2C18(4.6ininx250mm，5um)；流動(dòng)性相：A為工業(yè)甲醇，B為0.2％硫酸銨溶液(W)，程序流程為0～30min，40％A；流動(dòng)速度：0.8mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20皿；檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為276am。

②標(biāo)準(zhǔn)品水溶液的制取高精密稱量干躁至恒重的鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素標(biāo)準(zhǔn)品1.80mg，放置50mL的容量瓶中，用2％硫酸工業(yè)甲醇融解并滴定劑至標(biāo)尺，混勻，配置成濃度值為0.036mg.mL^-1的標(biāo)準(zhǔn)品水溶液，放置電冰箱中遮光儲(chǔ)存預(yù)留。

③供試試品溶劑的配制方式

稱量干躁至恒重的黑果腺肋花楸提取液1g，放進(jìn)圓底燒瓶中，添加2％的硫酸甲醇溶液30mL，放置90℃水浴中流回1h，制冷至室內(nèi)溫度，混勻，過(guò)慮，將滲瀝液遷移至50mL容量瓶中并且用2％的硫酸甲醇溶液稀釋液至標(biāo)尺，混勻，用微孔濾膜(O.22μm)濾過(guò)，取續(xù)滲瀝液，做為供試品水溶液。

④流動(dòng)性相的挑選

實(shí)驗(yàn)中關(guān)鍵考查了工業(yè)甲醇-0.2％硫酸銨溶液、乙腈-0.2％硫酸銨溶液、工業(yè)甲醇-3％苯甲酸溶液等各種各樣流動(dòng)性相對(duì)性黑果腺肋花楸提取液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素保存期和分離度的危害。

⑤線性相關(guān)調(diào)查

汲取鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的標(biāo)準(zhǔn)品水溶液，配置成濃度值分別為3.6、7.2、14.4、21.6、28.8、36.0μg·／mL的系列產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品水溶液，各自氣相20μL，測(cè)量鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積。以O(shè)D值鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積為縱軸，濃度值C為橫軸制作標(biāo)曲，得線性回歸方程Y=37486C 3.2127，R=0.9995(n=6)。結(jié)果顯示鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素氣相濃度值在3.6～36.0μg·mL^-1范疇內(nèi)與峰總面積線性相關(guān)優(yōu)良。

⑥可重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)黑果腺肋花楸提取液6份，稱量干躁至恒重的黑果腺肋花楸提取液1g，放進(jìn)圓底燒瓶中，添加2％的硫酸甲醇溶液30mL，放置90℃水浴中流回1h，制冷至室內(nèi)溫度，混勻，過(guò)慮，將滲瀝液遷移至50mL容量瓶中并且用2％的硫酸甲醇溶液稀釋液至標(biāo)尺，混勻，用微孔濾膜(O.22μm)濾過(guò)，取續(xù)滲瀝液，做為供試品水溶液。各進(jìn)樣量20μL，測(cè)量鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積。鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素峰總面積各自為602.18、612.34、616.52、621.13、629.28、613.52，RSD為1.54％，結(jié)果顯示成分測(cè)定法具備不錯(cuò)的可重復(fù)性。

⑦儀器設(shè)備精度實(shí)驗(yàn)

汲取標(biāo)準(zhǔn)品及供試品水溶液，持續(xù)氣相6次，每一次氣相20μL，各自測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)品及供試品水溶液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積。供試品中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素峰總面積各自為624.23、623.84、631.37、645.85、623.59、611.80，RSD為1.79％。標(biāo)準(zhǔn)品中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素峰總面積各自為1065.54、1140.96、1122.17、1097.34、1093.65、1138.23，RSD為2.65％，結(jié)果顯示儀器設(shè)備精度符合規(guī)定。

⑧供試品水溶液的可靠性實(shí)驗(yàn)

汲取供試品水溶液，各自于0、2、4、8、12、24h氣相20μL，測(cè)量鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積。供試品中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素峰總面積各自為617.32、634.17、618.97、630.15、631.22、625.34，RSD為1.09％，說(shuō)明供試品水溶液在常溫下24h內(nèi)平穩(wěn)，達(dá)到測(cè)量規(guī)定。

⑨檢出限與定量限實(shí)驗(yàn)

汲取標(biāo)準(zhǔn)品水溶液適當(dāng)，逐漸稀釋液，直至檢驗(yàn)基線噪聲為基線噪聲的3倍才行，測(cè)算鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的最少檢驗(yàn)濃度值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的最少檢出限為0.360μg／mL。汲取標(biāo)準(zhǔn)品水溶液適當(dāng)，逐漸稀釋液，直至檢驗(yàn)基線噪聲為基線噪聲的l0倍才行，測(cè)算鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的定量限，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的定量限為0.144μg／mL。

(2)供試品水溶液制取方式的提升

①正交實(shí)驗(yàn)

依據(jù)單要素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，基本上精準(zhǔn)定位了功效于原花青素水解反應(yīng)的三個(gè)因素，各自為水解反應(yīng)溫度、反應(yīng)速度和酸濃度值。挑選水解反應(yīng)溫度、反應(yīng)速度、酸濃度值做為調(diào)查要素，按三要素三水準(zhǔn)開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，要素水準(zhǔn)表見(jiàn)表1。

②工藝驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)

稱量黑果腺肋花楸提取液3份，每一份0.5g，放進(jìn)圓底燒瓶中，添加3％的硫酸甲醇溶液15mL，放置100℃水浴中流回120min，制冷至室內(nèi)溫度，混勻，過(guò)慮，將滲瀝液遷移至25mL容量瓶中并且用3％的硫酸甲醇溶液稀釋液至標(biāo)尺，混勻，用微孔濾膜(0.22μm)濾過(guò)，棄去初滲瀝液，取續(xù)滲瀝液做為供試品水溶液。離子交換柱為大連市依利特ODS2C18(4.6inin×250mm，5μm)；流動(dòng)性相：A為工業(yè)甲醇，B為0.2％硫酸銨溶液(V/V)，程序流程為0～30min，40％A；流動(dòng)速度：0.8mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL；檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為276nm。各自氣相20μL，測(cè)量鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積，測(cè)算鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的人均成分及RSD值，明確正交實(shí)驗(yàn)所選定的溶解標(biāo)準(zhǔn)的可靠性。