4、身體之外抗氧化性活力實驗

（1）對DPPH的清理工作能力

①DPPH溶液的配制氧自由基

高精密稱量19.716mgDPPH，用乙醇融解滴定劑于250mL容量瓶中，得C=0.2mmol／L的水溶液，于40℃電冰箱遮光儲存。

②試品溶劑的制取

各自稱量烘干的黑果腺肋花楸提取液干中藥浸膏、矢車菊素、鈦酸異丙酯矢車菊素、VC適當，融解而且配置成不一樣濃度值的試品水溶液。各自取不一樣濃度值的試品水溶液2mL于10mL比色管中，按論文參考文獻上述方式實現(xiàn)實際操作，在517am處測量OD值A(chǔ)_空缺，A_試品，A_對比。依照計算公式黑果腺肋花楸提取液、矢車菊素、鈦酸異丙酯矢車菊素、VC對DPPH氧自由基的清除率。

DPPH氧自由基清除率／％=(A_空缺一A_試品 A_對比)／A_空缺×100

式中，A_空缺-純凈水替代供試品水溶液與DPPH水溶液反映后的OD值值；A_試品-各供試品水溶液與DPPH水溶液反映后的OD值值；A_對比-各供試品水溶液與工業(yè)乙醇反映后的OD值值。

（2）FRAP測定方法總的抗氧化能力

①FRAP切削液的配置

各自配置0.2mol／L乙酸鈉緩沖溶液(pH=3.6)，10mmol／LTPl億水溶液(溶解40mmol／L硫酸)，20mmol／LFeCl₃水溶液。將以上三者按容積比10:1:1混和。

②FeSO₄標曲的制取

精準稱量0.01419FeSO₄，融解并滴定劑至50mL容量瓶中，即得濃度值為lmmol／LFeSO₄水溶液。汲取該水溶液適當，配置成濃度值為2.82、8.46、14.10、19.74、25.38、28.20、33.84μg／mL的水溶液。取各水溶液添加3mLFRAP切削液，攪拌后于37℃反映10min，于593nm處測量OD值，以含量為橫坐標軸，OD值為縱軸，制訂復原力標曲，列舉線性擬合方程式。

③被測物總抗氧化性活力測量

各自稱量烘干的黑果腺肋花楸提取液干中藥浸膏、矢車菊素、鈦酸異丙酯矢車菊素、VC適當，融解而且配置成不一樣濃度值的試品水溶液。各自取不一樣濃度值的試品水溶液3mL于10mL比色管中，按論文參考文獻上述方式實現(xiàn)實際操作，在593nm處測量OD值值。

(3)鉬酸銨測定方法總的抗氧化能力

①鉬酸銨反映機制的配置各自稱量

2.13g倍他米松、0.99g鉬酸銨、6.67mL鹽酸溶解200mL水里，攪拌。

②VC標曲的制取

精準稱量0.02599VC，用純凈水融解并滴定劑至50mL容量瓶中，即得濃度值為0.5mg／mL維他命C水溶液。汲取該水溶液適當，配置成濃度值為25、50、75、100、200、250tg／mL的水溶液。汲取O.5mL不一樣含量的水溶液，添加到5mL鉬酸銨反映系統(tǒng)中，反映試管嬰兒于95℃水浴90min。反映液充足制冷至常溫后，于695am處測量OD值，以含量為橫坐標軸，OD值為縱軸，制訂VC抗氧化能力標曲，列舉線性擬合方程式。

③被測物總抗氧化性活力測量各自稱量干

燥的黑果腺肋花楸提取液干中藥浸膏、矢車菊素、鈦酸異丙酯矢車菊素適當，融解而且配置成不一樣濃度值的試品水溶液。各自取不一樣濃度值的試品水溶液0.5mL添加到5mL鉬酸銨反映系統(tǒng)中，按論文參考文獻上述方式實現(xiàn)實際操作，在695nm處測量OD值值。被測物的總抗氧化能力以等同于是多少濃度值的VC來表明。

二、結(jié)果與剖析

（1）色譜儀標準的挑選

離子交換柱為大連市依利特ODS₂C₁₈(4.6mm×250mm，5μm)；流動性相：A為工業(yè)甲醇，B為0.2％硫酸銨溶液(W)，程序流程為0～30min，40％A；流動速度：0.8mL／min；柱溫：30℃；進樣量：20μL；檢驗光波長為276nm。鈦酸異丙酯矢車菊素的保存期為24.21min，理論塔板數(shù)為21917，與鄰近峰的分離度為2.28。HPLC色譜見圖1。

2、流動性相標準的挑選

實驗結(jié)果顯示適合的流動性相為工業(yè)甲醇-O.2％硫酸銨溶液(V:V=40:60)，可以將黑果腺肋花楸提取液中的鈦酸異丙酯矢車菊素與其它化學物質(zhì)分離，保存期適度，依照鈦酸異丙酯矢車菊素最高值測算理論塔板數(shù)為21917，與鄰近峰的分離度為2.28，故挑選在所述流動性相標準下完成有關(guān)實驗。

3、供試品水溶液制取方式的提升實驗結(jié)果

（1）正交實驗結(jié)果

稱量黑果腺肋花楸提取液9份，每一份0.5g，放進圓底燒瓶中，按正交試驗表開展實驗，結(jié)果見表2。

正交實驗結(jié)果顯示：供試品水溶液制取方式的最佳計劃方案為A₃B₃C₂，各要素的危害的大小為：水解反應(yīng)時間＞水解反應(yīng)溫度＞有機溶劑酸濃度值，明確供試品水溶液制取方式的最佳計劃方案為：水解反應(yīng)溫度為100℃、水解反應(yīng)時間為120min、酸濃度值為3％硫酸工業(yè)甲醇溶液。

（2）加工工藝可靠性認證實驗

三次實驗結(jié)果鈦酸異丙酯矢車菊素的峰總面積各自為1379.85、1382.57、1380.43，均值為1380.95，其鈦酸異丙酯矢車菊素成分各自為1.8660、1.8527、1.8523mg／g，均值為1.8570mg／g，RSD為0.78％，結(jié)果顯示，甄選的供試品水溶液制取方式加工工藝相對穩(wěn)定。