2.6 指紋圖譜創(chuàng)建及剖析

2.6.1 指紋圖譜的創(chuàng)建

取“2.1”項的標(biāo)準(zhǔn)品水溶液和“2.2”項下供試品水溶液，按“2.3.1”項的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用高效率液相色譜檢驗。所得的滿山紅葉HPLC對比圖普見圖4，15批滿山紅葉色譜儀累加圖見圖5。

圖4所顯示，該指紋圖譜尋找10個一共有峰，根據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)品色譜比照，確定16號峰為杜鵑花素，并將9號峰做為參考S峰。

2.6.2 相似性剖析

選用“中藥材色譜儀指紋圖譜相似性點評系統(tǒng)”(2012版)，選用中位值法先后開展15批滿山紅葉指紋圖譜的相似性點評，結(jié)果見表9。依據(jù)表9可以得到，15批滿山紅葉紋圖普總體相似性在0.986～0.999，均>0.9，具備較高的一致性。

2.6.3聚類

將15批滿山紅葉的10個一共有紛紛總面積導(dǎo)進(jìn)SPSS 20.0，應(yīng)用均值歐氏距離法，開展聚類，見圖6。歸類結(jié)果顯示不一樣原產(chǎn)地滿山紅中藥材在歸類間距上較遠(yuǎn)，即便 同一原產(chǎn)地其分類間距也出現(xiàn)顯著差異?；酒饰?，很有可能與滿山紅中藥材采收時間、存儲方法、氣侯等相關(guān)。15批滿山紅葉在原產(chǎn)地和批號上其主成分類型具備象征性，指紋識別圖普可以體現(xiàn)出試品的全景。

3 探討

本試驗供試品的做法，調(diào)查了不一樣獲取有機溶劑和獲取方法對滿山紅葉指紋圖譜的危害。在獲取有機溶劑層面，選擇了水、60%工業(yè)甲醇、稀酒精三種有機溶劑做為獲取有機溶劑，結(jié)果發(fā)覺，滿山紅干凍粉在三種有機溶劑中的溶解性都很好，可是以水作獲取有機溶劑的色譜不管在出峰數(shù)量或是分離度上均好于別的二種有機溶劑的色譜，因而挑選水做為獲取有機溶劑。在獲取方法層面，挑選了超聲波獲取法和流回獲取法，結(jié)果發(fā)覺，2種方式獲取的滿山紅葉色譜區(qū)別不大，可是超聲波獲取方式更為簡單，因而挑選超聲波的辦法做為獲取方式。

本試驗針對色譜儀標(biāo)準(zhǔn)的明確，調(diào)查了離子交換柱、檢驗光波長、流動性相系統(tǒng)軟件，流動速度、柱溫對滿山紅葉指紋圖譜的危害。在離子交換柱層面，選了Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）、Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm）和YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5μm）離子交換柱，結(jié)果顯示試品在Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm）和YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5μm）中無法實現(xiàn)分離出來規(guī)定，而在Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）離子交換柱中不但出峰快、數(shù)量多并且分離度符合規(guī)定，因此 挑選Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）離子交換柱做為該試驗離子交換柱。

在檢驗光波長層面，用二極管列陣探測器檢（DAD）中200～400 nm先后掃描儀標(biāo)準(zhǔn)品水溶液和供試品水溶液，數(shù)據(jù)顯示在檢驗光波長297 nm處兩個試品均有較大消化吸收，色譜信息內(nèi)容豐富多彩，杜鵑花素基線噪聲較高，因此采用297 nm為監(jiān)測光波長。在流動性相系統(tǒng)軟件層面，選擇不一樣類型有機相（工業(yè)甲醇、乙腈）和不一樣成份水相（0.3%苯甲酸溶液、0.3%冰醋酸溶液）組成的流動性相對系統(tǒng)供試品水溶液色譜儀峰分離出來的危害，挑選乙腈-0.3%苯甲酸溶液、工業(yè)甲醇-0.3%苯甲酸溶液、工業(yè)甲醇-0.3%冰醋酸溶液等流動性相系統(tǒng)軟件，數(shù)據(jù)顯示，乙腈-0.3%苯甲酸溶液流動性相系統(tǒng)軟件不利試品的分離出來，出峰數(shù)量稀缺且分離度不太好，工業(yè)甲醇-0.3%苯甲酸溶液和工業(yè)甲醇-0.3%冰醋酸溶液流動性相對系統(tǒng)試品分離出來區(qū)別不顯著，可是工業(yè)甲醇-0.3%苯甲酸溶液流動性相系統(tǒng)軟件色譜信息內(nèi)容更豐富，分離度更強，故明確該流動性相系統(tǒng)軟件做為該試驗檢驗的流動性相。在流動速度層面，挑選了0.1 mL·min-1、0.2 mL·min-1、0.25 mL·min-1開展挑選。結(jié)果顯示，用0.1 mL·min-1流動速度檢驗色譜儀峰出峰不徹底，用0.25 mL·min-1流動速度檢驗色譜儀峰分離度不太好，用0.2 mL·min-1流動速度檢驗色譜儀峰出峰數(shù)量徹底，分離度不錯，故明確流動速度為0.2 mL·min-1。在柱溫層面，對25℃、30℃、35℃柱溫開展挑選。結(jié)果顯示上升柱溫，分離出來作用下降，因而確認(rèn)了25℃做為檢驗柱溫。

15批滿山紅葉的指紋圖譜總體相似性范疇0.986～ 0.999，均>0.9，相似性優(yōu)良，15批滿山紅葉中杜鵑花素成分RSD為0.11%，說明其成分并沒有顯著差別，可是聚類結(jié)果將15批滿山紅葉分成四類，且10個一共有紛紛總面積的RSD范疇6%～30%，表明杜鵑花素的成分對其總體成分轉(zhuǎn)變危害不大，別的成分成分轉(zhuǎn)變起關(guān)鍵功效，基本剖析應(yīng)當(dāng)與滿山紅中草藥材原產(chǎn)地、生長發(fā)育自然環(huán)境、采收時間、置放標(biāo)準(zhǔn)和置放時間等相關(guān)。

本分析應(yīng)用高相液相色譜儀分析方法，創(chuàng)建了滿山紅葉的指紋圖譜，該指紋圖譜能夠 全方位呈現(xiàn)滿山紅葉成分的特性，適用因原產(chǎn)地、批號、生長發(fā)育自然環(huán)境等要素的不一樣，發(fā)生的品質(zhì)不均勻一的滿山紅葉。該方式簡單易行，指紋識別峰分離度好，具備較高的真實度，為事后滿山紅葉的科研開發(fā)設(shè)計給予科學(xué)論證。